国家自然科学基金(30271184)
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
- 相关作者：王一理李文生司履生刘红莉陈宏伟更多>>
- 相关机构：西安交通大学西安交通大学医学院第一附属医院陕西省人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 截短型人乳头瘤病毒58型L1蛋白的表达及其体外生物活性研究被引量：7
- 2004年
- 利用PCR技术克隆截短型HPV5 8L1基因并重组入杆状病毒表达系统穿梭质粒pFastBac Htb ,通过转座反应 ,将目的基因片段重组入杆状病毒基因组 ,分离重组的BacmidDNA ,并转染Sf 9昆虫细胞 ,收集被转染的Sf 9细胞 ,提取细胞蛋白 ,SDS PAGE检测可见在大约 5 8Kda处出现一新生蛋白条带 ,Westernblot证实为HPV5 8L1蛋白。用ProBondTM 纯化系统纯化所表达的蛋白。小鼠红细胞凝集试验证实纯化的蛋白可介导小鼠红细胞凝集 ,透射电镜观察证实纯化蛋白可自组装成VLP。结果表明昆虫杆状病毒表达系统可高效表达截短型HPV5 8L1蛋白 ,纯化后的截短型HPV5 8L1蛋白在体外可自组装VLP 。
- 李文生郑瑾刘红莉陈宏伟杨军王一理司履生
- 关键词：L1蛋白蛋白纯化病毒样颗粒
- 预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗的研制及免疫学特性被引量：1
- 2007年
- 目的:构建预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗,并研究其免疫学特性。方法:克隆HPV58L1基因并重组入自杀载体pCVD442,减毒志贺氏杆菌Sf301:ΔvirG、辅助质粒PRK2013、重组自杀载体pCVD442-HPV58L1进行筛选杂交,经氨苄抗性培养基、刚果红培养基双重选择,获得重组的含HPV58L1基因的减毒志贺氏杆菌菌株。Western blot检测HPV58L1蛋白表达。用豚鼠角结膜炎模型进行疫苗动物免疫试验,ELISA检测豚鼠血清中特异性抗体,ELISPOT检测豚鼠脾及淋巴结中抗原特异性IgG、IgA产生细胞频数。结果:Western blot法证实该菌株可表达HPV58L1蛋白。豚鼠免疫保护试验发现:HPV58L1-减毒志贺氏杆菌不引起角结膜炎,经用野生型sf301攻击后有80%豚鼠不发病。免疫后第20天,免疫豚鼠血中抗HPV58L1特异性IgG、IgA明显升高,而对志贺氏杆菌菌体抗原(LPS)仅产生低效价的IgG抗体。ELISPOT结果显示,脾和淋巴结的IgA-ASC及IgG-ASC明显升高。结论:成功构建了预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗,能诱发免疫动物较强的体液免疫反应,激发保护性抗体的产生。
- 李文生刘红莉张盈涛杨筱风王一理司履生
- 关键词：疫苗同源重组
- HIF-1α、E-钙黏蛋白及p53在宫颈癌组织中的表达及临床意义被引量：5
- 2015年
- 目的研究宫颈癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、E-钙黏蛋白及p53的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测38例正常宫颈和慢性宫颈炎患者(NNC组)、42例宫颈上皮内瘤变患者(CIN组)、80例浸润性宫颈鳞癌患者(ICC组)宫颈组织中HIF-1α、E-钙黏蛋白及p53的表达。结果 NNC组、CIN组、ICC组患者宫颈组织中HIF-1α表达率分别为10.5%、38.1%、78.8%,E-钙黏蛋白表达率分别为100.0%、71.4%、31.3%,p53阳表达率分别为7.9%、30.1%、61.2%,两两比较差异具有显著性(P<0.05)。HIF-1α和E-钙黏蛋白的表达与临床FIGO分期、组织分化程度和淋巴结是否转移有关。HIF-1α的表达与E-钙黏蛋白表达呈负相关(r=-0.987,P<0.025),与p53表达呈正相关(r=0.452,P<0.028)。结论 HIF-1α/E-钙黏蛋白可能在宫颈癌的进展中发挥重要作用,p53基因的失活可以调节HIF-1α/E-钙黏蛋白通路。HIF-1α、E-钙黏蛋白及p53可以作为宫颈癌诊疗的靶点。
- 杨学超郝小康王一理
- 关键词：宫颈癌缺氧诱导因子-1ΑE-钙黏蛋白P53
- 不同大肠癌细胞裂解物负载健康人外周血DC瘤苗的体外试验研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨3种大肠癌肿瘤细胞裂解物负载的健康人外周血树突状细胞(DC)刺激同体和异体T淋巴细胞增殖活化的作用。方法对血站来源的健康人外周血采用密度梯度离心法,分离获得DC前体细胞,用临床应用药物GM-CSF、TNF-α和试验用试剂rhIL-4联合诱导培养扩增DC,制备3种大肠癌细胞裂解物,体外致敏DC,显微镜观察DC形态演化过程,电镜拍摄微观形态特征,流式细胞仪鉴定DC表型,ELISA法检测肿瘤抗原致敏DC分泌IL-12水平,检测致敏DC刺激T淋巴细胞分泌的IL-10和IFN-γ水平,3H-TdR法检测成熟DC(mDC)诱导同体和异体T淋巴细胞增殖能力。结果 DC形态学呈现典型树突状分化特征,mDC表达特征性免疫表型CD1a、CD83,共刺激分子CD86、HLA-DR,分泌高水平IL-12,mDC与同体和异体T淋巴细胞共培养均能有效刺激T淋巴细胞增殖活化,T淋巴细胞不分泌IL-10,分泌较高水平IFN-γ,SW480细胞株在各项指标上都具优势,3H-TdR法检测提示mDC不仅可以刺激同体淋巴细胞增殖,同样有效激活异体T淋巴细胞。结论来源于血站的健康人外周血是一种方便的DC前体细胞原料。联合细胞因子的培养方法可以成功诱导出成熟的DC1型细胞,引起Th1型细胞免疫反应;3种大肠癌肿瘤细胞裂解物,尤其是SW480细胞株裂解物抗原性质稳定,能够有效促进DC分化,提高DC成熟度;负载裂解物的DC不仅刺激同体T淋巴细胞增殖,也可有效激活异体T淋巴细胞增殖,因此应用健康人异体来源的DC瘤苗刺激患者T淋巴细胞增殖,从而产生抗肿瘤免疫反应的设想是可行的。
- 王乐肖菊香王妍华赵磊
- 关键词：外周血
