国家大学生创新性实验计划项目(091073052)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
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- 硫酸镍诱导体外大鼠睾丸间质细胞凋亡及其对c-kit和caspase-3基因表达的影响被引量：2
- 2011年
- 目的观察硫酸镍(NiSO4)诱导体外培养大鼠睾丸间质细胞凋亡及其c-kit和caspase-3 mRNA及蛋白表达的变化,探讨镍致睾丸间质细胞损伤的可能机制。方法体外提取和纯化大鼠睾丸间质细胞,用0、250、500和1 000μmol/L NiSO4分别处理睾丸间质细胞,染毒时间分别为6、12和24 h。采用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测睾丸间质细胞的凋亡发生率,实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测c-kit和caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平。结果(1)AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测结果显示,间质细胞凋亡主要发生于NiSO41 000μmol/L染毒12 h和NiSO4 250、500、1 000μmol/L染毒24 h组。(2)实时荧光定量PCR结果显示:与对照组比较,染毒6 h NiSO4 250μmol/L、染毒12 hNiSO4 250和500μmol/L c-kit mRNA相对表达量上调(P<0.05);染毒24 h NiSO4 500和1 000μmol/L c-kit mRNA相对表达量下降(P<0.05)。NiSO4各浓度和各时间组caspase-3 mRNA相对表达量均上调(P<0.05)。(3)Western blotting结果显示:与对照组比较,NiSO4各浓度c-kit蛋白表达逐渐减弱,caspase-3蛋白表达逐渐上调,主要见于NiSO41 000μmol/L染毒6 h以及NiSO4各浓度分别染毒12和24 h。结论 NiSO4可诱导体外大鼠睾丸间质细胞凋亡,且与基因c-kit和caspase-3 mRNA及蛋白异常表达有关。
- 张志刚孙应彪关聪会李成云张瑞孔德万赵秋燕
- 关键词：硫酸镍睾丸间质细胞C-KITCASPASE-3
- 硫酸镍对体外培养大鼠睾丸间质细胞毒作用的实验研究被引量：6
- 2011年
- 目的建立大鼠睾丸间质细胞体外分离、纯化和培养的方法,探讨不同浓度和时间硫酸镍对大鼠睾丸间质细胞的毒作用。方法采用胶原酶消化、Percoll分离液密度梯度离心和差速贴壁法体外分离、纯化睾丸间质细胞,并采用3β-HSD染色法进行纯度鉴定。硫酸镍(NiSO4)0、62.5、125、250、500和1 000μmol/L对分离纯化的睾丸间质细胞染毒,采用MTT比色法和乳酸脱氢酶(LDH)渗漏法观察染毒3、6、12、24、36和48 h后,睾丸间质细胞增殖和培养上清液中LDH活力的变化。结果 (1)纯化的睾丸间质细胞经3β-HSD特异性染色鉴定,纯度可达到95%以上。(2)相同时间NiSO4各浓度组与对照组比较:染毒12 h后,NiSO4各浓度组均出现间质细胞增殖抑制(P<0.01);染毒6 h后,NiSO4各浓度组培养液中LDH活力均开始升高(P<0.05或P<0.01)。(3)相同浓度各染毒时间与对照组(0 h)比较:NiSO4 250μmol/L及其以上浓度组,各染毒时间均可抑制间质细胞增殖(P<0.01)。除NiSO4 62.5μmol/L染毒3 h组外,其他各浓度不同染毒时间LDH活力均明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论建立了较理想的体外分离、纯化和培养睾丸间质细胞的方法;镍对体外培养的睾丸间质细胞具有明显的毒作用,并呈现一定的剂量-效应和时间-效应关系。
- 关聪会张志刚孙应彪孔德万李成云赵秋燕
- 关键词：硫酸镍睾丸间质细胞LDH
