国家自然科学基金(30271154)
- 作品数：9 被引量：33H指数：4
- 相关作者：张镜宇郭刚梁东春王宝利赵学勤更多>>
- 相关机构：天津医科大学代谢病医院天津医科大学天津医科大学总医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 改进TRIZOL法提取基因组DNA被引量：15
- 2006年
- 目的建立一种在提取总RNA的同时又能制备基因组DNA的方法。方法利用TR IZOL法收集水相沉淀总RNA后余下的中间层和有机相,合并去除蛋白质,再提取基因组DNA。通过紫外分光光度法和电泳法予以鉴定,并以之为模板进行PCR扩增鉴定。结果提取的基因组DNA纯度和浓度俱佳,用于PCR扩增效果良好。结论改进的TR IZOL法可以更加充分地利用实验材料,且可靠易行。
- 杨宇虹梁东春郭刚张镜宇
- 关键词：TRIZOL聚合酶链反应
- 不同碘营养状态对大鼠肝组织Ⅰ型脱碘酶和脑组织Ⅱ型脱碘酶活性的影响
- 2007年
- 不同碘营养状态Wistar大鼠分别于饲养3、6、12个月时处死,放射免疫法测定血清甲状腺激素水平。放射性核素分析法检测大鼠脑组织Ⅱ型脱碘酶(DⅡ)和肝组织Ⅰ型脱碘酶(DⅠ)的活性。结果显示在早期碘缺乏状态下,动物出现以低T_4为主要表现的甲减,DⅠ和DⅡ活性代偿性上调。高碘在转录后直接抑制DⅠ的活性,使血清TT_3和FT_3下降,而DⅡ的活性增高,可能是由于T_4和T_3对酶的底物诱导失活所致。
- 孙蓓左爱军梁东春郭刚赵学勤阎玉芹陈祖培张镜宇
- 关键词：碘化物过氧化物酶碘缺乏碘过量
- 人骨保护素成熟肽表达载体的构建、表达及重组蛋白免疫学鉴定被引量：4
- 2003年
- 目的 :构建人骨保护素 (OPG)成熟肽cDNA重组表达载体 ,实现其在毕赤酵母中的高效表达。方法 :由人成骨细胞提取总RNA ,经RT -PCR扩增得到人OPG成熟肽cDNA ,克隆入分泌型表达载体 pPIC9K ,转化酵母细胞 ,G418筛选多拷贝整合的重组子进行甲醇诱导表达 ,产物行Westernblotting 鉴定。结果 :成功构建了人OPG成熟肽表达载体 ,该载体能在酵母细胞中获得分泌表达 ,诱导96h的表达量占上清总蛋白的30 %。重组蛋白相对分子质量约55ku ,可被OPG抗体识别。结论 :重组人OPG成熟肽在酵母表达系统获得较高水平表达 ,为进一步研究开发基因工程药物准备了条件。
- 王宝利戴芳郭刚邱明才张镜宇
- 关键词：人骨保护素成熟肽重组蛋白免疫学鉴定基因表达
- 甲状腺激素对成骨样MG-63细胞甲状腺激素受体不同亚型表达的影响被引量：2
- 2011年
- 目的 检测人类成骨样细胞MG-63中甲状腺激素受体（TR）的表达情况以及甲状腺激素（T3或T4）对其的影响.方法 用实时荧光定量PCR法对MG-63细胞中TR的主要4个亚型,α1、α1、β1、β2的mRNA表达进行了测定.结果 TRα1 mRNA的表达水平最高,为10.70±0.45;TRβ1仅及其半,为5.75±0.10;TRβ2不低,相当于TRβ1的60%,为3.34±0.08;TRα2的表达极低,仅为（3.66±0.59）×10-2.分别加入不同浓度的T3或T4,仅TRα1和TRα2对T3表现明显的降调节,且TRα1和TRα2的表达与相应T3浓度之间负相关,其他亚型无显著性变化,也无相关关系;同样浓度范围的T4作用各亚型,表达均无显著性变化.结论 在骨细胞发育分化中TRα1起关键作用.
- 杨宇虹左爱军朱志峰赵学勤郭刚张镜宇
- 关键词：甲状腺激素甲状腺激素受体基因表达
- 成骨样细胞MG-63中的甲状腺激素受体Ⅰ——细胞核可溶性甲状腺激素受体与激素（T3）结合的动力学
- 2011年
- 建立人类成骨样细胞系MG-63中甲状腺激素受体的结合实验的方法，测定受体动力学参数。体外培养MG-63细胞，制备细胞核提取液，对其细胞核提取物中的甲状腺激素受体与激素（主要是T3）结合的动力学进行了Seatchard分析。MG-63细胞核内存在高亲和力（Ka为7．68×10^9L／mol）和有限结合容量的甲状腺激素受体，最大结合容量为（111．25±10．73）fmol／mg蛋白。建立了一个简易的自培养细胞制备纯净细胞核的方法，为进一步研究成骨样细胞及骨组织中的甲状腺激素受体奠定基础。
- 杨宇虹左爱军朱志峰赵学勤郭刚张镜宇
- 关键词：甲状腺激素受体
- 小鼠骨保护素配基胞外片段的表达、纯化及生物活性分析(英文)被引量：2
- 2004年
- 骨保护素配基 (OPGL)是调节破骨细胞分化和成熟的核心细胞因子。由小鼠骨组织提取总RNA ,RT PCR扩增得到小鼠OPGL胞外片段 (sOPGL)cDNA ,以特定策略克隆入表达载体 pET 4 2a(+) ,以便使未来表达产物的融合标签序列能够完全被因子Xa切除。重组载体在大肠杆菌中诱导表达可获得高水平的 4 7kD产物 ,Westernblotting证实它可被OPGL抗体识别。经Glutathione sepharose 4B亲和层析 ,除融合蛋白外 ,还有一约 30kD蛋白与层析柱发生了特异性亲和。该 30kD蛋白可被GST IGF I多克隆抗体识别 ,但不能被OPGL抗体识别 ,提示它的产生乃由于融合蛋白在融合位点附近发生裂解。融合蛋白经Xa因子裂解和进一步纯化 ,得到分子量约 17 5kD的sOPGL。生物活性分析证明 ,重组sOPGL可以促进OLC的生成 ,并呈现剂量依赖关系。
- 王宝利邱明才郭刚梁东春张镜宇
- 关键词：纯化大肠杆菌
- 碘过量对大鼠脑神经元特异性烯醇化酶基因表达的影响
- 2009年
- 目的观察碘过量对大鼠脑神经元特异性烯醇化酶（NSE）基因表达的影响。方法选用150只断乳1月龄的健康Wistar大鼠，按5×2析因设计分为10组，每组15只。按摄碘量分为正常碘（NI）、5倍碘（5HI）、10倍碘（10HI）、50倍碘（50HI）、100倍碘（100HI）5个水平，饲喂时间为3、6个月。实验期满后，取全部大鼠血样，用放射免疫分析方法测定血清总甲状腺素（TT4）、总三碘甲状腺原氨酸（TT3）、游离甲状腺素（FT4）、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、反三碘甲状腺原氨酸（TT3）水平；取大鼠脑组织，采用RT—PCR方法检测脑组织NSE mRNA的表达。结果各碘水平组TT4、TT3变化明显（F值分别为18．867、27．287，P〈0．01），时间和碘水平对TT4存在交互作用（F=2．486，P〈0．05）；100HI组TT4、TT3均低于同时间NI、5HI、10HI、50HI组（P均〈0．01）。血清FT4、FT3、TT3水平，在3、6个月时变化明显（F值分别为4．968、27．046、59．776，P〈0．05或〈0．01），各碘水平组间变化明显（F值分别为33．058、28．420、17．482，P均〈0．01），时间和碘水平对FT3、rT3存在交互作用（F值分别为6．894、5．233，P均〈0．01）；100HI组FT4、FT3、rT3低于同时间其他组（P〈0．01或〈0．05）。各碘水平间NSE mRNA变化明显（F=29．006，P均〈0．05）；3、6个月100HI组大鼠脑中NSE mRNA水平（0．61±0．19、0．61±0.22），与NI（0．73±0．13、0．72±0．26）、5HI（0．72±0．15、0．72±0．16）、10HI（0．73±0．32、0．70±0．13）、50HI（0．71±0．18、0．69±0．31）组比较降低（P均〈0．05）。3、6个月时血清FT3、FT4与NSE mRNA水平均存在相关关系（r值分别为0．987、0．969及0．890、0．910，P均〈0．05）。结论NSE基因的表达对过量碘摄入呈现出耐受性且有一定的阈值；当过量碘摄入为正常100倍时，在转录水平影响NSE基因的表达，表现为抑�
- 郑纺郭刚王宝利梁东春张瑞张镜宇赵学勤陈祖培
- 关键词：碘甲状腺激素类神经元特异性烯醇化酶
- 破骨细胞分化因子和护骨素mRNA在OVX小鼠骨组织的相对表达被引量：8
- 2003年
- 目的 研究破骨细胞分化因子 (ODF)和护骨素 (OPG)mRNA在OVX小鼠骨组织中的相对表达水平 ,探讨ODF和OPG在绝经后骨质疏松 (PMO)发病中的意义。 方法 将 4 0只小鼠随机分为 5组 ,第Ⅰ、Ⅴ组行假手术 ,两组小鼠分别在术后 1周和 5周处死 ;第Ⅱ、Ⅲ组行卵巢切除手术 ,分别在术后 1周和 5周处死 ;Ⅳ组行卵巢切除手术 ,术后第 2天给苯甲酸雌二醇治疗 ,5周后处死。小鼠处死后 ,提取其骨组织总RNA ,RT PCR检测ODF和OPGmRNA表达水平。 结果 去卵巢后Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组ODF与OPGmRNA比值 (分别为 1 16 78± 0 2 873、0 80 93± 0 14 14、0 6 6 4 0± 0 0 935 )显著增高 ,采用雌激素防治可使其一定程度上恢复。
- 王宝利郭若霖左爱军邱明才张镜宇
- 关键词：破骨细胞分化因子护骨素MRNA骨组织绝经后
- 甲状腺激素受体研究进展被引量：4
- 2007年
- 甲状腺激素受体（TRs）属于核受体超家族，由TRα和TRβ基因编码。目前发现共有9种亚型。其分子结构由4个功能区组成，分别是A／B区、DNA结合区域、铰链区和配体结合区域，每个区域都有其各自不同的功能。TRs可以单体、同二聚体、异二聚的形式与甲状腺激素应答元件结合，介导甲状腺激素调节靶基因。TRs在各组织器官中广泛分布但不同亚型在组织中表达是不同的，这与它们在组织器官中的作用有密切关系。
- 柳明波孙蓓张镜宇
- 关键词：甲状腺激素甲状腺激素受体
