北京市科技计划项目(H020220020310)
- 作品数：4 被引量：16H指数：3
- 相关作者：李天伯王以光胡洋左增艳冯爽更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院中国人民解放军总医院沈阳药科大学更多>>
- 发文基金：北京市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- mMR-1基因的克隆和在毕赤酵母中分泌表达被引量：3
- 2005年
- hMR 1为本实验室首次克隆发现的一个人类新基因 ,是一种和三种肌肉收缩蛋白及多种细胞信号蛋白具有相互作用的膜蛋白。经与鼠基因组数据库进行同源分析后设计合成引物 ,利用RT PCR技术从小鼠C5 7BL 6J脾脏T淋巴细胞总RNA中反转录得到鼠源MR 1基因 (mMR 1) ,提交GenBank ,收录号 (AY2 99972 )。序列分析证明其与人源MR 1基因 (hMR 1)同源性为 90 1%。构建表达载体pPIC9 mMR 1电转化PichiapastorisGS115 ,筛选得到整合分泌表达mMR 1蛋白的重组酵母菌株。表达目的蛋白分子量 2 5kD ,诱导 5d时产量达到 5 0mg L ,通过Westernblot验证了表达产物的正确性。本研究为进一步研究新基因MR 1的生物学功能奠定了基础。
- 李天伯胡洋王以光夏焕章
- 关键词：毕赤酵母
- 6A8α-甘露糖苷酶表达对人鼻咽癌细胞CNE-2L2端粒酶活性和端粒长度的影响
- 2003年
- 探讨端粒长度与端粒酶活性在人鼻咽癌细胞CNE 2L2恶性行为改变前后的变化 ,建立研究恶性行为改变与端粒长度与端粒酶活性间关系的细胞模型。与 6A8α 甘露糖苷酶表达正常的CNE 2L2细胞 (野生型细胞W ,转导空载体的细胞M及转导无关DNA片段的细胞S)相比 ,6A8α 甘露糖苷酶表达低下的细胞 (AS)接种裸鼠皮下后的肿瘤性生长受抑。用TeloTAGGGTelomereLengthAssayKit及TelomerasePCRELISAKit分别测定端粒长度及端粒酶活性 ,用RT PCR方法分析端粒重复序列结合因子 (TRF)的转录水平。见AS细胞的端粒明显缩短 (6 78Kb ,W细胞为8 4 0Kb ,M细胞为 8 34kb ,S细胞为 9 5 6kb) ,但端粒酶活性及端粒重复序列结合因子 1和 2 (TRF 1和 2 )的转录水平未见改变。实验表明 ,恶性行为降低的CNE 2L2细胞的端粒变短 ,但与端粒酶活性及TRF 1 2无关 ,提示在CNE 2L2细胞中可能存在着端粒酶及TRF 1 2以外的调节端粒长度的机制。
- 靳玉兰赵方萄岳玮史耕先刘音朱立平
- 关键词：鼻咽癌端粒酶端粒长度端粒重复序列结合因子
- 肌原纤维调节因子-1在心肌肥大中的作用研究被引量：6
- 2006年
- 目的:研究肌原纤维调节因子-1(MR1)在心肌肥大中的变化及其作用。方法:选取rMR1mRNA的3个Stem-loop结构作为靶点,构建RNA干扰载体,对乳鼠心肌细胞进行瞬时转染,通过定量RT-PCR,选定第1靶点进行RNA干扰以封闭MR1基因;采用心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入、形态学检测、蛋白质提取、Westernblotting技术,检测蛋白合成速率、细胞表面积、rMR1蛋白表达等指标,观察MR1基因沉默对于血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的影响。结果:AngⅡ组[3H]-亮氨酸掺入较对照组增加24.1%(P<0.01),其细胞表面积较对照组高65.8%(P<0.01),rMR-1蛋白表达水平升高;AngⅡ的上述作用可被卡托普利完全消除;MR1基因封闭后,由AngⅡ诱导的[3H]-亮氨酸掺入降低30.2%(P<0.01),细胞表面积较AngⅡ组降低31.1%(P<0.01),rMR-1蛋白表达较对照组减少。结论:AngⅡ诱导的心肌细胞肥大与rMR-1表达上调有关。MR-1可能通过促进心肌收缩蛋白的合成参与心肌肥大的发生。
- 徐菲菲刘秀华王彦珍李天伯王以光
- 关键词：心肌肥大
- 人肌纤生成调节因子1融合蛋白在大肠杆菌的表达和抗体制备被引量：10
- 2005年
- 目的研究人肌纤生成调节因子1(MR-1)的表达,获得MR-1蛋白,制备MR-1抗体,为MR-1生物功能研究提供基础。方法利用大肠杆菌质粒pGEX-5X-1、pET30a(+)及pET24a(+),分别构建MR-1及其两端与不同标签序列融合的表达载体。在大肠杆菌BL21(DE3)和BL21-CodonPlus(DE3)-RIL中比较N端和/或C端融合标签序列对该基因表达的影响。通过凝胶蛋白电泳及电洗脱制备目的蛋白,免疫家兔。酶联免疫吸咐试验(ELISA)和Westernblot检测所制备抗体的滴度和免疫原性。结果利用GST或T7-tag序列在其N端融合,使MR-1在大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIL得到表达。利用所表达获得的MR-1-T融合蛋白,制备了针对此蛋白的多克隆抗体。ELISA检测所制备抗体滴度达到1∶105,Westernblot显示所制备的多克隆抗体可用于检测天然细胞中的MR-1蛋白。结论MR-1蛋白需在N端与GST或T7-tag序列融合方可实现表达。利用在大肠杆菌表达纯化的蛋白所制备的抗体可用于MR-1生物学功能的研究。
- 李天伯胡洋冯爽左增艳王以光
- 关键词：多克隆抗体
