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3株脑心肌炎病毒河南分离株VP1基因的序列测定与遗传进化分析: 2014年; 为研究野猪家养在猪场脑心肌炎（EMC）发生发展过程中可能扮演的角色和鼠在不同猪源脑心肌炎病毒（EMCV）交叉感染中的作用，应用 RT-PCR和测序技术，对分离自河南省同一发病猪场的良种猪源、家养野猪源和鼠源EMCV 等3株病毒的VP1基因进行序列比较和遗传进化分析，发现 EMCV可分为G1、G2和G33个群。3株分离病毒的遗传距离较近，核苷酸序列同源性高达99．6％～99．8％，并与国内猪源EMCV亲缘关系最近，同属于G1群，而与欧美毒株的亲缘关系较远，存在较大的地域差异。研究结果证实，野猪家养可传播EMCV并引起良种猪感染发病，鼠在不同猪源 EMCV的交叉感染、传播与流行中起到重要媒介作用；分离自同一猪场的良种猪源EMCV和家养野猪源 EMCV应是同一株病毒对不同猪种的感染，因而需要在野生动物家养活动中充分考虑自然疫源性疾病传播的生态学因素。; 常洪涛陈陆杜季梅杨霞王新卫赵军姚惠霞王川庆; 关键词：脑心肌炎病毒反转录-聚合酶链反应 VP1

地方土猪源副猪嗜血杆菌16SrRNA基因的分子鉴定及遗传进化分析被引量：4: 2013年; 为研究地方土猪源副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis，Hps）的分子遗传进化特性，应用PCR方法扩增河南地方分离株XY0501的16SrRNA基因，并进行遗传进化分析。结果显示，地方土猪源Hps的16SrRNA基因全长为822bp，与国内外参考菌株的核苷酸序列同源性为97．1％～99．3％；与血清5型参考菌株的核苷酸序列同源性高达99．3％；基于16SrRNA基因序列绘制的系统进化树显示，地方土猪源Hps与血清5型Hps参考株属于同一分支。研究结果证明，Hps可感染地方土猪并导致发病，感染来源有待进一步查明；16SrRNA基因在Hps的不同血清型中高度保守，且无品种差异。; 常洪涛刘慧敏杜季梅陈陆赵军王新卫姚惠霞杨霞李鸿雁王川庆; 关键词：副猪嗜血杆菌 RRNA 分子进化

猪细小病毒种子批中污染的猪鼻支原体的清除: 2014年; 支原体是细胞和病毒培养中常见的污染物,本研究尝试使用滤膜过滤法、反复多次冻融法、支原体抑制药物M-plasmocin处理法、氯仿抽提法等4种方法清除猪细小病毒种子批中污染的猪鼻支原体,并对4种方法的清除效果进行比较。结果表明,支原体抑制药物M-plasmocin处理法与氯仿抽提法效果较好,支原体抑制药物处理84 h以及氯仿与被支原体污染的猪细小病毒液作用5 min均能彻底清除猪细小病毒种子批中污染的支原体。本研究筛选出的清除猪细小病毒中支原体方法为非囊膜类病毒种子批中支原体的清除提供了依据。; 郭龙飞燕贺杨霞高东生陈陆常洪涛王新卫赵军王川庆; 关键词：种子批支原体猪细小病毒氯仿

基于PEDV中国变异株S蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用被引量：6: 2014年; 以纯化的重组猪流行腹泻病毒(PEDV)中国变异株S蛋白为包被抗原,建立了检测PEDV流行株抗体的间接ELISA方法。所建方法最佳反应条件为:抗原最适包被量为1μg/孔,包被时间为37℃1h后4℃过夜;血清工作浓度为1∶100,作用时间为1.5h;二抗选用HRP标记的兔抗猪IgG稀释度为1∶4 000,作用时间为1.5h;显色液TMB作用时间为15min;判定标准为,样品S/P值大于等于0.058判定为阳性,小于0.045判定为阴性。所建ELISA方法具有良好的特异性和重复性。对50份疑似猪流行性腹泻血清样品进行检测,该方法与PEDV病原检测结果有较高的符合率。结果表明本研究所建立ELISA方法可用于PEDV流行株抗体检测和疫病监测。; 陈静王晓梦杨盼盼雷喜梅刘金玲李晓静赵军王川庆; 关键词：S蛋白间接ELISA

乙型脑炎病毒荧光定量PCR的建立及对病毒体外复制动态的研究被引量：3: 2013年; 根据乙型脑炎病毒(JEV)NS3基因保守序列设计并合成一对引物,以构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测JEV的SYBR Green I荧光定量PCR方法。该方法在1.92×108～1.92×101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中19拷贝/μL的病毒核酸,敏感性是常规RT-PCR方法的10倍;检测时间缩短了50%,该方法不与其它猪源病毒发生交叉反应;在重复性试验中,批间、批内变异系数均小于1.2%。应用本方法对JEV在BHK-21细胞上繁殖滴度进行定量检测,绘制JEV在BHK-21细胞上的一步生长曲线,并与TCID50方法绘制的复制动态曲线进行比较。结果显示,两种方法测定的JEV在BHK-21细胞上的复制动态具有一定的平行关系,对于制备灭活疫苗而言,荧光定量PCR方法更快速和敏感,所测得的抗原含量更精确,有利于企业机动灵活地安排生产。; 王帅涛王新卫陈陆赵军常洪涛杨霞刘红英王川庆; 关键词：乙型脑炎病毒荧光定量PCR TCID50

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