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麻鸡新城疫病毒SX-1株F和HN基因共表达蛋白的免疫原性被引量：3: 2011年; 用PCR扩增麻鸡新城疫病毒SX-1株F基因和HN基因,并以由15个氨基酸构成的短肽为Linker将F及HN基因片段体外连接,与转座载体PFastBacⅠ连接,获得重组质粒PFastBacF-HN,并转化到DH10Bac宿主菌,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经筛选获得的重组Bacmid F-HN质粒转染Sf-9昆虫细胞,进行表达检测,表达产物间接免疫荧光试验阳性,经SDS-PAGE、Western-blot检测显示,获得相对分子质量约123 000的蛋白特异条带,说明F-HN重组蛋白表达成功。将共表达蛋白进行进行动物试验,间接血凝试验表明雏鸡免疫14d后在体内可检测到特异性抗体,共表达蛋白二次免疫雏鸡后,对NDV强毒的攻毒保护率为80%,这一结果提示利用F-HN基因构建的亚单位疫苗具有重要的开发应用价值。; 李红丽詹丽娥王彩先唐娟陆冰洋丁壮; 关键词：新城疫病毒共表达

定点突变麻鸡副黏病毒ZH-1株F基因及其鉴定: 2011年; 根据麻鸡副黏病毒ZH-1株F基因序列,采用PCR体外定点突变技术,设计2对引物(引物中含有突变位点)。应用重叠PCR延伸法,分3次PCR扩增F基因,从而得到突变后的F基因,命名为F变基因,将其克隆进入pGEM-T载体,并进行PCR、酶切测序鉴定,使突变后的F变基因编码的氨基酸裂解位点为112 Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Leu117,具有弱毒株的特点。; 李红丽詹丽娥王彩先唐娟陆冰洋; 关键词：麻鸡副黏病毒 F基因定点突变

麻鸡新城疫病毒SX-1株F和HN基因在真核细胞中共表达研究被引量：7: 2011年; 以山西省农业科学院畜牧兽医研究所预防兽医研究室克隆的pG-F和pG-HN质粒为模板,PCR扩增麻鸡新城疫病毒SX-1株F基因和HN基因,并以由15个柔性氨基酸构成的柔性短肽作为Linker将F及HN基因片段体外连接,插入pCI-neo真核表达载体,构建麻鸡新城疫病毒SX-1株F基因和HN基因共表达载体pCI-F-HN,并在Vero细胞中转染表达,进行间接免疫荧光检测。结果显示,麻鸡新城疫病毒SX-1株F-HN组合基因在Vero细胞中得到较高水平的表达,在荧光显微镜下能够观察到较强的荧光,说明F-HN组合蛋白具有良好的反应原性。为下一步研究高效亚单位基因工程苗奠定基础。; 李红丽詹丽娥张伟业唐娟陆冰洋王彩先; 关键词：共表达

麻花鸡副黏病毒ZH-1株F基因真核表达载体的构建被引量：2: 2009年; 将麻花鸡副黏病毒ZH^-1株毒种接种于11日龄SPF鸡胚,收集48-96 h死亡的鸡胚尿囊液。参考已发表的鸡源副黏病毒F基因序列,设计并合成了一对特异性引物,用以扩增麻花鸡副黏病毒ZH^-1株F基因,预期扩增的F基因片段包含完整的开放阅读框。通过RT-PCR扩增出麻花鸡副黏病毒ZH^-1株F基因片段,琼脂糖凝胶电泳回收、纯化,得到F基因片段,经EcoRⅠ和SalⅠ消化,将F基因克隆进入PCI-neo载体,转化大肠杆菌DH5α,挑选菌落,经限制性核酸内切酶SalⅠ和EcoRⅠ双酶切及PCR鉴定,结果证明重组真核表达载体PCI-neo-F构建成功,为下一步在哺乳动物细胞Vero细胞中表达打下良好的基础。扩增的F基因测序后,与其他禽副黏病毒1型F基因进行系统发育树的分析比较,为阐明麻花鸡副黏病毒ZH^-1株的遗传背景奠定了基础。; 李红丽詹丽娥乔忠王彩先陆冰洋; 关键词：F基因重组质粒

新城疫病毒SX-1株F基因定点突变及真核表达研究: 2011年; 根据已发表的分离自麻鸡的新城疫病毒SX-1株F基因序列,采用PCR体外定点突变技术,设计2对引物,引物中含有突变位点。应用重叠PCR延伸法,分3次PCR扩增F基因,从而得到突变后的F基因,命名为F′基因,使改造后的F′基因编码的氨基酸裂解位点为112Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Leu117。在EcoRⅠ和HindⅢ位点将F′基因与转座载体pFastBacⅠ连接,获得重组质粒,并进行PCR、酶切鉴定,核苷酸序列测定正确的pFastBac-F′质粒转化到DH10Bac宿主菌,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经筛选获得的重组Bacmid F′质粒转染Sf-9昆虫细胞,并进行表达检测,表达产物间接免疫荧光试验阳性,经SDS-PAGE、Western-blotting检测显示,获得分子量约63ku的蛋白特异条带,说明F′重组蛋白表达成功。; 李红丽詹丽娥张伟业王彩先唐娟陆冰洋; 关键词：麻鸡新城疫病毒 F基因定点突变

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山西省自然科学基金(2008011072)