国家高技术研究发展计划(2006AA02Z476)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 相关作者：戴大鹏周晓阳蔡剑平郑君德张铁梅更多>>
- 相关机构：北京医院卫生部北京老年医学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肌细胞增强因子2A CAG重复序列的改变与其细胞学定位功能的相关性研究
- 2009年
- 目的构建肌细胞增强因子2A(MEF2A)/绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体,检测其在Hela和293T细胞中的表达,探讨MEF2A第11号外显子CAG三联核苷酸重复序列的改变与其细胞学定位功能的相关性。方法用PCR法扩增野生型MEF2A基因全长cDNA序列,以及其他含4～15个CAG三联核苷酸重复序列的变异型MEF2A全长cDNA序列;将上述12种MEF2A全长cDNA序列分别克隆入带有GFP报告基因的真核表达载体pEGFP-Cl,构建MEF2A野生型融合表达质粒pEGFP-MEF2A、变异型融合表达质粒pEGFP-MEF2A-CAGr;通过脂质体介导的方法将以上质粒转染到Hela和293T细胞,荧光显微镜检测GFP蛋白的表达。结果构建成功与GFP融合的野生型及变异型MEF2A蛋白表达质粒共12种用于细胞学定位功能研究,体外实验结果显示,上述12种MEF2A蛋白均定位于细胞核内。结论 MEF2A第11号外显子CAG三联核苷酸重复序列的改变不会影响其细胞内的定位功能。
- 戴大鹏周晓阳郑君德张铁梅蔡剑平
- 关键词：肌细胞细胞学转染绿色荧光蛋白质类
- MEF2A第11号外显子四个特殊变异位点的生物学活性研究被引量：1
- 2009年
- 目的建立MEF2A蛋白细胞学定位和转录激活活性的体外检测体系,探讨MEF2A第11号外显子四个特殊变异位点的生物学意义。方法构建含绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)报告基因真核表达载体的MEF2A野生型融合表达质粒pEGFP-MEF2A和变异型融合表达质粒pEGFP-MEF2A-Mut;通过脂质体介导的方法将以上质粒转染到Hela和293T细胞,用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白的定位表达情况。构建含HRC基因启动子/增强子序列的萤火虫荧光素酶报告基因表达质粒pGL3-HRC enhancer,将该质粒与野生型MEF2A cDNA表达质粒pCDNA-MEFcDNA,或变异型MEF2A cDNA表达质粒pCDNA-MEFcDNA-Mut,以及海肾荧光素酶质粒pRL-TK,用脂质体转染法共转染于293T细胞,Western blot检测MEF2A蛋白的表达,双荧光素酶报告基因检测系统测定荧光素酶报告基因的表达。结果本研究建立的细胞学定位和转录激活活性检测体系均可有效检测MEF2A蛋白的生物学活性;与野生型MEF2A蛋白相比,四种MEF2A特殊变异蛋白的细胞学定位和转录激活活性均无显著性差异。结论本研究发现的MEF2A基因第11号外显子四个含特殊变异位点的MEF2A变异蛋白不会影响其细胞学定位和转录激活的生物学活性。
- 戴大鹏郑君德周晓阳张铁梅蔡剑平
- MEF2A基因CAG三核苷酸重复序列与冠状动脉病变及严重程度的相关性被引量：3
- 2010年
- 目的探讨北京地区汉族人群中MEF2A基因CAG三核苷酸重复序列与冠状动脉病变及严重程度的相关性。方法用聚合酶链反应产物直接测序法对所有研究对象进行MEF2A基因11号外显子测序,用病例-对照方法研究CAG重复序列与冠状动脉病变支数的相关性。结果在473例冠心病病例和303例对照中,MEF2A基因11号外显子CAG重复序列存在多态性,按照不同遗传模式分析,4～8个CAG重复序列均与冠状动脉病变支数无明显相关性。结论 MEF2A基因11号外显子4～8个CAG重复序列和北京地区汉族人群中冠状动脉病变的严重程度无明显相关性。
- 贾娜蔡剑平戴大鹏孙福成许峰季福绥周晓阳何青
- 关键词：冠心病肌细胞增强因子2A动脉粥样硬化
- MEF2A第11号外显子CAG三联核苷酸重复序列的改变与其转录激活活性的相关性被引量：2
- 2009年
- 目的探讨MEF2A第11号外显子CAG三联核苷酸重复序列的改变与其转录激活活性的相关性。方法PCR法扩增富含组氨酸钙结合蛋白（histidine—rich calcium—binding protein，HRC）基因启动子／增强子序列，插入报告载体pGL3-Basic中，生成pGL3-HRC enhancer质粒，该质粒与全长野生型MEF2A cDNA表达质粒pCDNA—MEFcDNA，或含4～15个CAG的变异型MEF2AcDNA表达质粒pCDNA—MEFcDNA—CAGr，以及内参质粒pRL—TK，用脂质体转染法共转染于293T细胞，Western blot检测MEF2A蛋白的表达，双荧光素酶检测系统测定报告分子的表达。结果成功构建了MEF2A蛋白体外转录激活活性检测系统；所构建的含4～15个CAG序列的MEF2A变异蛋白，与含11个CAG序列的野生型MEF2A蛋白之间其转录激活活性没有显著性差异。结论目前已发现的MEF2A第11号外显子CAG重复数目的改变不会影响MEF2A蛋白的转录激活活性。
- 戴大鹏郑君德周晓阳张铁梅蔡剑平
