国家自然科学基金(30770093)
- 作品数：7 被引量：33H指数：2
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- 摩氏摩根菌噬菌体MmP1内溶素基因的克隆、表达及活性鉴定
- 2009年
- 目的克隆、表达摩氏摩根菌噬菌体编码的内溶素基因,为内溶素的生物学活性检测提供纯化蛋白产物。方法以摩氏摩根菌噬菌体基因组为模板扩增内溶素全长基因,并将其插入原核表达载体pQE31中,成功构建了内溶素重组质粒pQE31-M12;将重组质粒转化大肠埃希菌JM109,获得了表达稳定的基因工程菌,并优化了表达条件;该表达菌经过超声裂解及SDS-PAGE电泳,确定重组融合蛋白的表达形式,并利用亲和层析及分子筛层析纯化目的蛋白;利用平板扩散法检测重组蛋白抑菌活性。结果内溶素基因重组质粒pQE31-M12经酶切及测序鉴定正确;重组工程菌经0.5mmol/LIPTG在37℃诱导5h后内溶素重组蛋白可获得最佳分泌型表达,对其蛋白裂解上清行非变性的Ni-NTA柱亲和层析以及分子筛层析纯化后,获得单一条带的目的蛋白;该重组蛋白对金黄色葡萄球菌的生长具有明显的抑制作用。结论成功构建了表达内溶素基因的大肠杆菌工程菌,获得了纯化的表达产物,并初步证明该内溶素蛋白可抑制金黄色葡萄球菌的生长,为进一步改组内溶素的结构并增强其抗菌功能奠定了基础。
- 朱晓艳朱军民王竞黎庶饶贤才胡福泉谭银玲
- 关键词：噬菌体基因表达纯化
- 通过RNA-seq初步考察铜绿假单胞菌噬菌体PaP3对宿主转录组的全局性调控
- 2013年
- 目的定性定量地考察铜绿假单胞菌噬菌体PaP3在感染宿主菌PA3后对宿主转录组的全局性调控作用。方法利用高通量链特异性的RNA-seq对PaP3感染宿主菌PA3后5个时间点(5 min、10 min、20 min、30 min、80 min)的转录本进行深度测序,并以铜绿假单胞菌PAO1株及噬菌体PaP3基因组序列为参照,通过生物信息学对检测数据做定性定量的分析。结果以未感染噬菌体的细菌为对照,在铜绿假单胞菌PA3被噬菌体PaP3感染后的不同时间点共检测到5 536个差异表达基因,共归属于27条PseudoCAP功能注释,KEGG Pathway显著性富集分析发现差异表达基因共涉及45条代谢路径。此外,在5个样本中还预测出1 438个新转录本及1 329个新的候选sRNA,发现19种已注释的sRNA及91种新的候选sRNA出现差异表达。结论噬菌体PaP3可能通过抑制宿主菌PA3转录调节相关基因而对宿主的转录组进行全局性的调控,这为深入理解噬菌体与宿主相互作用的机制奠定了基础,也为探索噬菌体通过细菌与人体免疫系统的相互作用提供了多方面多层次的信息。
- 赵霞陈灿煌倪青山王竞胡福泉谭银玲
- 关键词：RNA-SEQ转录组转录调控SRNA
- 摩氏摩根菌噬菌体MmP1内溶素重组蛋白活性的初步鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的初步鉴定摩氏摩根菌噬菌体MmP1内溶素基因重组蛋白的生物学活性。方法提取摩氏摩根菌细胞肽聚糖成分,采用酶谱电泳法、扩散法检测重组融合蛋白对细胞壁肽聚糖层的降解活性;采用纸片法检测重组蛋白对金黄色葡萄球的抑菌作用;测定重组蛋白与抗生素的协同抑菌作用。结果成功提取了摩氏摩根菌细胞壁肽聚糖,酶谱法、扩散法结果表明重组蛋白对摩氏摩根菌肽聚糖具有降解作用,纸片法结果表明重组蛋白可抑制金黄色葡萄球菌的生长;当与新青霉素Ⅱ、氨苄青霉素(Amp)、羧苄青霉素(Car)3种抗生素共同作用时有协同抑菌作用,3种抗生素的MIC值分别由1.56、1.56、3.125μg/ml降为0.39、0.78、0.195μg/ml。结论重组融合蛋白可降解肽聚糖、抑制金黄色葡萄球菌生长活性,且与抗生素协同作用时可降低抗生素MIC值。
- 朱晓艳胡福泉谭银玲
- 关键词：噬菌体抑菌活性
- 噬菌体的“关闭宿主”功能被引量：1
- 2007年
- 噬菌体基因组编码产生某些特殊的蛋白质分子,可与宿主菌生长、代谢的重要调控性蛋白质结合,并使其钝化,从而阻断宿主的生长与繁殖,将宿主菌大分子合成机制和能量装置转向噬菌体自身的复制与增殖。目前研究所获得的有关噬菌体"关闭宿主"功能的证据,主要涉及噬菌体编码的某些蛋白质分子与宿主菌的DNA复制及转录相关因子的相互作用,而这些蛋白质-蛋白质分子间的相互作用将为我们提供新的抗菌药物或抗菌药物作用的靶点,也有助于生物系统进化关系及蛋白质-蛋白质相互作用关系的研究。
- 谭银玲朱晓艳胡福泉
- 关键词：噬菌体
- 铜绿假单胞菌耐药机制及其耐药现状被引量：27
- 2010年
- 朱晓艳谭银玲
- 关键词：铜绿假单胞菌耐药性耐药现状
- 噬菌体编码的穴蛋白在细菌裂解中的作用被引量：2
- 2009年
- 穴蛋白(holin)是有尾的双链DNA噬菌体编码的一种跨膜蛋白质,它与内溶素配合对细菌进行裂解。根据拓扑异构学可将穴蛋白分为三大类(第Ⅰ类、第Ⅱ类和第Ⅲ类),它们具有不同的作用特点,但基本作用过程相似,就是在细胞膜上聚集,引起胞膜结构改变,使内溶素穿过细胞膜作用于细胞壁,引起细菌裂解。此外噬菌体还会编码一种对穴蛋白具有抑制作用的抗穴蛋白。抗穴蛋白与穴蛋白相互作用,调节噬菌体对细菌的裂解。
- 乔阳张硕勋谭银玲
- 关键词：噬菌体
- 铜绿假单胞菌噬菌体PaP3全基因组在感染宿主菌PA3过程中的分时期表达研究被引量：1
- 2012年
- 目的明确铜绿假单胞菌噬菌体PaP3在感染宿主菌PA3后其全基因组的分时期表达模式。方法利用基因芯片检测噬菌体PaP3在感染宿主菌PA3后不同时间(5 min,10 min,20 min,30 min,80 min)其全基因组(含71个预测的ORF)在转录水平的表达谱变化,并进行非监督层次聚类(hierarchical clustering)分析。利用蛋白质合成抑制剂氯霉素(Cm)和DNA复制抑制剂磷酸乙酸(PAA)实验确定PaP3全基因组的分时期表达情况。结果根据时间表达模式的不同,PaP3全基因组可分为3大类:15个早期基因(ORF 71-57)、35个中期基因(ORF 56-22)及21个晚期基因(ORF 21-1)。在PaP3基因组结构中,这3类基因各自串联分布且可能受不同的操纵子调控。结论 PaP3感染过程中其早期、中期及晚期基因随时间有序表达,为深入了解噬菌体基因表达模式及生命复制周期奠定基础,并为了解噬菌体与宿主及机体免疫系统的的相互作用提供了基础。
- 陈灿煌赵霞王竞胡福泉谭银玲
- 关键词：噬菌体早期基因晚期基因
