湖南省科技厅科技计划项目(2007SK3096)
- 作品数：3 被引量：3H指数：2
- 相关作者：匡多秀曲喜英谢小兵周新朱惠斌更多>>
- 相关机构：湖南中医药大学第一附属医院武汉大学南方医科大学更多>>
- 发文基金：湖南省科技厅科技计划项目湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 原发性开角型青光眼家系的MYOC基因突变研究被引量：3
- 2009年
- 目的对来自重庆地区的1个原发性开角型青光眼（POAG）家系进行MYOC基因突变筛查，研究POAG与MYOC基因突变的相关性，探讨MYOC基因突变在中国人POAG发病中的作用。方法1个4代共39例的青光眼家系，8例为已确诊患者，健康对照者100名。用单链构象多态性分析（SSCP）、PCR-限制性片段长度多态性（RFLP）和基因测序的方法筛选MYOC基因的突变（包括G34C、C136T、G144T、G227A、C624G、G736A、C1009G、A1036G、C1081T、G1099A、G1138A、A1139C、T1430A、C1441A和C1442T等），同时对检测到的突变结果进行生物信息学分析。结果在该家系中，发现1个G227A（Arg76Lys）突变，该突变存在2例已确诊的POAG患者和1例家系表型正常者中，健康对照者中未检出。发现1个缺失突变（C1009del），该突变存在于家系中所有发病患者和1例4岁的子代亲属，健康对照者中未检出。未发现其他突变。由于C1009del突变是首次发现，据此我们申请了GenBank号，已发表的GenBank序列号为FJ237047，对应的蛋白序列号为ACI62293。结论G227A（Arg76Lys）突变为已报道的多态性位点，与该家系青光眼的发病无相关性。移码突变C1009del突变与青光眼的发病密切相关，也可由此推测青光眼患者亲属的发病率较正常人高。
- 谢小兵周新田艳丽曲喜英匡多秀朱惠斌喻京生宁兴旺
- 关键词：开角型系谱细胞支架蛋白质类糖蛋白类突变
- C1009del突变质粒载体的构建及MYOC基因的有效干扰被引量：2
- 2011年
- 目的在前续课题基础上构建针对MYOC基因的RNAi慢病毒载体及C1009del突变质粒载体,并筛选出小梁网细胞作为后续转染阳性质粒合适的药物G418浓度,为下一步将突变质粒载体导入小梁网细胞使其表达突变蛋白,研究突变蛋白的功能、分泌特点等,进而研究原发性开角型青光眼的致病机制提供技术支持。方法采用基因定向克隆方法构建目的基因过表达载体及4种RNAi慢病毒载体、凝胶电泳及基因测序验证;采用Westernblot及基因测序方法筛选有效的RNA干扰靶点;应用基因定点突变技术合成C1009del突变序列,构建突变质粒载体;培养小梁网细胞并用G418筛选。结果经酶切和基因测序证实MYOC基因过表达载体、RNAi慢病毒载体及C1009del突变质粒载体构建成功,并筛选出PSC413为最有效的RNA干扰靶点;G418终浓度为400μL/mL及更高浓度的孔细胞凋亡。结论本实验构建的RNAi慢病毒载体能成功将正常MYOC基因干扰掉,并将G418为400μL/mL作为后续小梁网细胞转染成功的最适筛选浓度,为本课题下一步将突变基因导入小梁网细胞进行突变蛋白的功能研究奠定基础。
- 匡多秀李萍周新曲喜英朱昕力谢小兵
- 关键词：开角型青光眼基因突变
- 原发性开角型青光眼家系中一个新的MYOC基因突变被引量：2
- 2008年
- 目的对MYOC(Mycolin)基因突变与一个POAG(primary open-angle glaucoma)家系的相关性进行研究,以便进一步揭示MYOC基因突变在中国人群POAG发病中的作用。方法用PCR-RFLP和基因测序的方法对一个来自中国西部地区POAG家系和200例正常人进行MYOC基因突变(包括G34C,C1009G,A1036G,G1099A,A1139C,T1430A和C1441A等)筛查,同时对检测到的突变结果进行生物信息学分析。结果该家系共67人尚健在56人,其中11人已确诊为POAG,3例因为眼压(IOP)>22mmHg而被定义为可疑者,其余42例表型正常。检出1个新的杂合子突变C38T,该突变存在于4例已确诊的POAG病人和1例可疑者中,突变率为8.8%,200例对照者中未检出。未检出其他突变。结论通过生物信息学分析,虽然C38T突变并未导致蛋白质的结构和性质发生明显变化,但仍不能排除它是该家系的致病性突变的可能。基因检查可能是家族性POAG早期诊断的一种有效的方法。
- 谢小兵周新田艳丽曲喜英匡多秀朱惠斌
- 关键词：POAGMYOC基因突变
