广东省粤港关键领域重点突破项目(2006A25005002)
- 作品数：7 被引量：37H指数：3
- 相关作者：雷红涛孙远明沈玉栋肖治理王弘更多>>
- 相关机构：华南农业大学广东省教育厅广州军区广州总医院更多>>
- 发文基金：广东省粤港关键领域重点突破项目广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程农业科学医药卫生理学更多>>
- 呋喃西林代谢物荧光偏振免疫检测方法研究被引量：12
- 2009年
- 利用新制备的抗体首次建立了呋喃西林代谢物氨基脲(SEM)的荧光偏振免疫分析(FPIA)方法。通过设计合成新的SEM半抗原CEPSEM(2-(4-((2-carbamoylhydrazono)methyl)phenoxy)aceticacid),偶联载体蛋白后免疫新西兰大白兔,制备了亲和力高、特异性好的多克隆抗体。结合新设计合成的荧光示踪物CEPSEM-HDF建立了SEM的FPIA方法。结果表明:在示踪物浓度为0.5nmol/L,抗体稀释度为1/100的优化条件下,IC50为47.9μg/L,检出限为8.3μg/L,线性范围为15.8～145.7μg/L。该方法特异性强(和其它相关兽药交叉反应小于0.1%),稳定性好(批内相对标准偏差小于2.5%,批间相对标准偏差小于6.3%)。
- 沈玉栋张世伟蔡肇婷雷红涛肖治理王弘孙远明
- 关键词：呋喃西林
- 抗克伦特罗单链抗体基因工程菌株发酵条件的研究被引量：1
- 2009年
- 重组大肠杆菌BL21携带抗克伦特罗单链抗体(scFv)基因,研究了不同培养基、诱导时期、诱导时间、初始pH以及装液量对重组抗体表达量的影响,并对重组质粒稳定性进行研究。结果表明,在初始pH为7.2、装液量为25mL/250mL的LB培养基中,30℃培养菌体生长至A600nm为0.8时,42℃诱导表达6h,scFv表达量可达33.7%。工程菌在无选择压力条件下连续传代120代,保持稳定,100%的菌株携带重组质粒且经诱导后均有重组抗体的表达。
- 王弘梁艳刘细霞杨金易雷红涛沈玉栋孙远明
- 关键词：克伦特罗单链抗体工程菌
- 丁草胺人工抗原及抗体制备研究被引量：3
- 2007年
- 以除草剂丁草胺、巯基丙酸为原料,合成丁草胺半抗原,用氢核磁共振、电喷雾质谱、红外光谱方法进行鉴定;通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备丁草胺人工抗原,用紫外光谱法对其鉴定;免疫动物后,间接竞争ELISA检测鉴定抗体。结果表明,巯基丙酸与丁草胺连接生成半抗原,半抗原被连接到载体蛋白上,丁草胺人工抗原合成成功,获得了丁草胺小鼠抗血清。棋盘滴定法确定包被抗原工作浓度为3μg/ml,抗血清稀释倍数为32000倍。建立了间接竞争ELISA标准曲线,丁草胺IC50为1.44μg/ml,检测限为0.47μg/ml。
- 雷红涛肖治理方坚生沈玉栋刘文字孙远明冯伟雯
- 关键词：丁草胺人工抗原抗血清
- 甲硝唑半抗原及全抗原合成与鉴定被引量：6
- 2007年
- 在微波加热条件下,将甲硝唑与琥珀酸酐反应,合成半抗原甲硝唑半琥珀酸酯,氢核磁共振、电喷雾质谱、红外光谱方法的鉴定结果表明,目标半抗原合成成功;通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备甲硝唑全抗原,紫外光谱法鉴定结果表明,全抗原合成成功.
- 雷红涛沈玉栋刘文字邱志超杨瑾孙远明
- 关键词：甲硝唑半抗原
- Lipocalin文库的构建及与克百威有结合活性的小分子筛选被引量：2
- 2008年
- 构建大菜粉蝶Lipocalin蛋白家族中的BBP蛋白突变文库,依据基因序列,分别设计10条和12条引物,通过PCR重叠延伸法得到包含随机突变蛋白BBP的基因序列,并重组到噬菌粒载体pCANTAB5E中构建Lipocalin突变文库,库容达到4.0×109.以偶联分子BSA-克百威和OVA-克百威为靶分子,采用柱式和平皿式交叉法对Lipocalin文库进行了筛选,用竞争洗脱法洗脱特异结合活性的噬菌体.经过3轮筛选,从第3轮的洗脱液中随机挑选了10个重组克隆,用Dot-blotting法检测出K7anticalin分子能与克百威特异结合.为研发克百威的Anticalin类检测试剂盒提供了候选分子,也为拓宽Lipocalin文库在有害小分子检测方面的应用奠定了基础.
- 武婕杨金易张宏斌潘科王弘雷红涛郑霖肖治理孙远明
- 关键词：克百威
- 分子模拟技术在小分子免疫检测方法研究中的应用
- 常用的分子模拟方法有:量子力学法、分子力学法、蒙特卡洛法和分子动力学法。本文重点阐述了分子模拟技术在小分子免疫检测方法研究中的应用,即分子模拟技术能够更好地研究抗原抗体反应中的分子间作用力,促进抗原抗体反应识别机制研究的...
- 王伟华雷红涛孙远明
- 关键词：分子模拟
- 文献传递
- 隐孔雀石绿半抗原与全抗原设计、合成及鉴定被引量：10
- 2008年
- 从偶联位点、偶联活性基团的性质及半抗原的合成与偶联方法分析,设计了系列不同结构的半抗原和人工抗原及其合成方法。以N,N-二甲基苯胺、苯甲醛衍生物为原料,Amberlyst15树脂为催化剂,在温和条件下合成出3种隐孔雀石绿半抗原;进一步采用活泼酯和重氮化法分别将获得的半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联,形成相应全抗原。半抗原和全抗原分别经减压硅胶柱色谱及透析纯化后,采用质谱、核磁共振及紫外扫描光谱等分析手段进行了鉴定,结果表明半抗原及免疫全抗原均合成成功,满足了进一步免疫、筛选高质量抗体和建立检测方法的需要。同时,采用分子模拟手段对抗原表面半抗原决定簇的前线分子轨道分布情况进行了仿真模拟分析,讨论了前线轨道的分布可能对抗体特性造成的影响,为进一步的半抗原构效关系研究提供理论支持。
- 沈玉栋王宇孙远明雷红涛王弘肖治理
- 关键词：孔雀石绿半抗原
- 分子模拟技术在小分子免疫检测方法研究中的应用被引量：3
- 2010年
- 量子力学法、分子力学法、蒙特卡洛法和分子动力学法是4种常用的分子模拟技术。本文重点综述了分子模拟技术在小分子免疫检测方法研究中的应用,分子模拟技术能够更好地研究抗原抗体反应中的分子间作用力,促进抗原抗体反应识别机制研究的深入进行,能够解释抗体的交叉反应率,从而能应用于提高抗体宽谱性提高的研究。
- 王伟华雷红涛孙远明
- 关键词：分子模拟
