广东省农科院院长基金(201305)
- 作品数：5 被引量：26H指数：4
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- 相关机构：广东省农业科学院南京农业大学更多>>
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- 柑桔黄龙病菌外膜蛋白的原核表达与纯化
- 2014年
- 为获得大量高纯度的柑桔黄龙病菌Omp外膜重组蛋白,应用PCR方法从染病柑桔模板中扩增出黄龙病菌omp基因的3个片段,将其克隆到pMDl9-T载体,再亚克隆到pET32a原核表达载体,构建pET32a-omp原核表达重组质粒,然后转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导并用SDS-PAGE电泳检测带组氨酸标签的Omp融合蛋白表达后,用镍柱分离纯化该融合蛋白。结果表明:柑桔黄龙病菌omp基因序列的两个片段在37℃经1 mmol/L IPTG诱导后,在大肠杆菌得到了高效表达;镍柱纯化蛋白得到预期大小(约55 ku)的融合蛋白。
- 程保平鹿连明彭埃天赵弘巍宋晓兵陈霞
- 关键词：原核表达蛋白纯化
- 以omp基因为靶标的3种检测方法对柑橘黄龙病菌检测效果比较被引量：5
- 2014年
- 为了比较以omp基因为靶标的常规PCR、LAMP检测方法(Loop-mediated isothermal amplification)和实时荧光定量PCR方法在实际检测中对柑橘黄龙病的检测效果,比较了3种检测方法对柑橘黄龙病菌omp基因检测的灵敏度,并运用3种检测方法对采自广东省田间11个本地柑橘品种上疑似感染黄龙病的多个病样进行实际检测。结果显示:3种检测方法的灵敏度有所不同,依次为常规PCR
- 程保平赵弘巍彭埃天陈霞宋晓兵凌金锋
- 关键词：柑橘黄龙病常规PCRLAMP实时荧光定量PCR
- 柑橘多个品种和多个部位中黄龙病菌的检测与调查被引量：8
- 2014年
- 探索黄龙病菌在柑橘多个品种和植株多个部位中的分布情况,可为研究该菌在植株内的侵染扩散奠定基础;调查多个果园的柑橘植株感染黄龙病的情况,可为病害防控提供科学依据。通过常规和巢式PCR检测了黄龙病菌在柑橘多个品种和植株多个部位中的存在情况,并进一步调查了龙门、阳春、肇庆、云浮等地柑橘园中的柑橘植株感染黄龙病的情况。结果发现:在砂糖橘、贡柑、甜橙、脐橙、马水橘和春甜桔中,黄龙病阳性检测率较高,而在佛手和粗柠檬中,黄龙病阳性检测率较低。在染病的植株的根茎花果叶根中均可检测到黄龙病菌,但黄龙病菌在植株内的分布并不均匀。此外,研究发现,失管果园和附近的柑橘植株携菌率很高,而老病树挖除后补栽的一些小柑橘苗的携菌率也很高。
- 程保平鹿连明彭埃天赵弘巍宋晓兵陈霞
- 关键词：柑橘黄龙病常规PCR巢式PCR
- 广东不同地区柑橘黄龙病菌的遗传多样性分析被引量：5
- 2014年
- 不同基因型的黄龙病菌可能具有不同的致病模式,为了探明广东省不同基因型黄龙病菌的分布特点,为该病害的流行学研究提供重要依据,本研究利用PCR-RFLP的方法研究了广东省柑橘产区7个市县黄龙病菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)基因的遗传多样性,并对各地黄龙病菌的omp基因进行克隆测序,构建了系统发育树。采用4种限制性内切酶消化各地区的柑橘黄龙病菌omp基因分别产生了不同的RFLP指纹图谱,每种限制性内切酶均产生了2种类型的酶切谱带;系统进化分析结果显示:广东地区的柑橘黄龙病菌属于韧皮部杆菌亚洲种,且亲缘关系非常近。广东地区黄龙病菌在omp基因水平上未见显著差异,未发现其他优势种类。
- 黄永辉程保平彭埃天宋晓兵凌金锋陈霞
- 三种PCR方法检测柑橘黄龙病菌的效果比较被引量：10
- 2014年
- 为了比较常规PCR、巢式PCR和实时荧光定量PCR方法在大田检测中对柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)的检测效果,首先比较了3种检测方法对柑橘黄龙病菌检测的灵敏度,结果发现:3种检测方法的灵敏度依次为常规PCR<巢式PCR<实时荧光定量PCR。运用3种检测方法对广东5个柑橘品种上的189个黄龙病疑似病样进行检测,结果发现:黄龙病检出率依次为常规PCR<巢式PCR<实时荧光定量PCR。研究表明:常规PCR适合以较低成本大规模检测黄龙病;实时荧光定量PCR具有最大的检测灵敏度;巢式PCR检测技术同时具有前两者的一些优点,但操作较复杂,适合技术熟练的研究者使用。
- 程保平彭埃天宋晓兵凌金锋陈霞
- 关键词：巢式PCR实时荧光定量PCR
