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人脐带间充质干细胞获得和纯化及向软骨细胞分化能力的研究被引量：2: 2009年; 目的研究脐带间充质干细胞获得纯化的高效方法及向软骨细胞的分化能力。方法取人的正常分娩或剖腹产胎儿的脐带，用胶原酶和胰酶初步消化后，将流式细胞仪筛选得到的CD45（-）、CD90（＋）细胞作为原代细胞进行培养，并用复合胶原酶差速消化法逐级传代、纯化细胞，每次传代后取部分细胞用作流式细胞仪分析细胞的CD45、CD90阳性比率；对P3代细胞向软骨细胞进行诱导。结果流式细胞仪检测提示，采用流式细胞仪进行初次筛选并用复合胶原酶差速消化法逐级传代获得的P1、P2、P3代细胞中CD90的阳性率为（80．86±7．85）％、（95．86±3．28）％、（97．15±1．43）％，而CD45的阳性率为（2．534-0．28）％、（0．97±0．48）％、（0．05±0．01）％；向软骨细胞诱导结果提示P3代细胞有向终末软骨细胞分化能力，具有干细胞的特性。结论采用流式细胞仪进行初次筛选并用复合胶原酶差速消化法能快速获得高纯度的具有向终末软骨细胞分化能力的人脐带间充质干细胞。; 周佳沈尊理金羽青刘伟沈华; 关键词：间充质干细胞脐带软骨显微外科

快速获得和纯化骨髓基质干细胞的方法: 2008年; 目的研究在体外快速获得骨髓基质干细胞及纯化的方法。方法采用流式细胞仪筛选法获得CD45-、CD90+原代细胞,复合胶原酶差速消化逐级传代、纯化;对第3代(P3代)细胞进行脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞三向诱导;2～4周后,分别行oilred’O、Safranin’O和茜素红染色,倒置显微镜下观察诱导结果。结果经流式细胞仪初筛和复合胶原酶差速消化,传代至P3代,细胞形态已呈现均一性。向脂肪细胞诱导后第4周,oilred’O染色见细胞内大量红染的脂滴;向软骨细胞诱导后第4周,Safranin’O染色见多数切片呈阳性,细胞团块中存在大量软骨特异性的陷窝样结构;向骨细胞诱导后第4周,茜素红染色发现肉眼可见广泛散在的红色阳性钙结节。结论本研究所采用的流式细胞仪初筛和复合胶原酶差速消化法,可快速获得高纯度的骨髓基质干细胞。; 周佳沈尊理金羽青刘伟沈华; 关键词：骨髓基质干细胞纯化

经等离子体修饰并复合BMSCs的组织工程神经研究被引量：2: 2008年; 目的探讨经等离子体修饰的PLGA神经导管复合BMSCs后修复大鼠坐骨神经缺损的疗效。方法取30只新生SD大鼠股骨及胫骨骨髓,培养获得原代BMSCs,并传至第3代。将PGA和PLA按90∶10摩尔比例混合,制备PLGA神经导管,对其进行等离子体修饰。取30只4周龄SD大鼠,制备右后肢坐骨神经1cm缺损模型。按修复材料不同随机分成3组(n=10),实验组:第3代BMSCs复合经等离子体修饰PLGA神经导管;对照组:第3代BMSCs复合普通PLGA神经导管;自体组:自体神经。术后6周观察大鼠的行走步态变化,测定坐骨神经功能指数(sciatic function index,SFI)、电生理变化、腓肠肌湿重恢复率,采用再生神经轴突图像分析评价神经修复效果。结果术后大鼠均存活至实验完成。术后6周,实验组和自体组大鼠行走步态恢复情况较对照组好。实验组、对照组及自体组SFI分别为—51.02±6.54、—58.73±7.87及—48.73±3.95,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组运动神经传导速度及波幅明显高于对照组(P<0.05),但与自体组差别不明显(P>0.05),对照组与自体组差异有统计学意义(P<0.01)。实验组、对照组及自体组腓肠肌湿重恢复率分别为56.13%±4.27%、43.14%±6.52%、59.47%±3.85%,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组有髓神经纤维密度、直径及髓鞘厚度均高于对照组(P<0.05),低于自体组(P<0.05);对照组与自体组差异有统计学意义(P<0.01)。结论复合BMSCs的等离子体PLGA神经导管能有效促进周围神经的再生,为研制新型的组织工程神经修复周围神经缺损提供新的思路。; 周佳沈尊理沈华金羽青刘伟娄琳陈南梁; 关键词：组织工程神经 BMSCS

壳聚糖神经导管修复犬胫神经缺损的实验研究被引量：9: 2006年; 目的:探讨壳聚糖涂层并预置引导纤维神经导管修复周围神经缺损的效果。方法:18条杂交犬,平均分成3组,无菌条件下切断左侧胫神经,制成25mm的犬胫神经缺损模型。采用壳聚糖涂层并预置引导纤维的聚乳酸和聚羟基乙酸共聚物(PLGA)神经导管作为实验组A组,以单纯PLGA神经导管为B组,自体神经移植组为C组作对照,每组6条犬。术后12周后通过一般观察,肌电图检查,HE染色和S-100免疫组化观察,再生神经图像分析等评价修复的效果。结果:术后12周各组再生神经已通过神经导管长入远端,肌电图,HE染色和图像分析结果表明A组再生神经轴突数量及再生神经质量优于B组(P<0.05);C组优于A、B组。结论:壳聚糖涂层并预置引导纤维的神经导管能有效修复周围神经缺损。; 沈华沈尊理张佩华贾万新王永春张兆锋黄一雄; 关键词：甲壳素周围神经神经导管

甲壳素涂层并预置引导纤维神经导管的实验研究: 目的探讨甲壳素涂层并预置引导纤维神经导管修复周围神经缺损的效果。方法成年雌性SD 大鼠24只,平均分成4组,无菌条件下切断双侧坐骨神经,制成14mm 的大鼠坐骨神经缺损模型。采用甲壳素涂层并预置引导纤维的聚乳酸和聚羟基乙...; 沈华沈尊理张佩华张俊锋贾万新张兆锋黄一雄; 关键词：甲壳素周围神经雪旺细胞神经导管; 文献传递

甲壳素涂层并预置引导纤维神经导管的实验研究被引量：13: 2005年; 目的探讨甲壳素涂层并预置引导纤维神经导管修复周围神经缺损的效果。方法成年雌性SD大鼠24只,无菌条件下切断双侧坐骨神经,制成14mm的大鼠坐骨神经缺损模型。根据不同修复材料随机分为4组,每组6只。A组:甲壳素涂层并预置引导纤维的聚乳酸聚羟基乙酸共聚物(polyglycolic-lacticacid,PGLA)神经导管;B组:甲壳素涂层的PGLA神经导管;C组:单纯PGLA神经导管;D组:自体神经移植作为对照。术后4周和12周行大体观察、肌电图检查、S-100免疫组织化学染色和组织学观察,图像分析评价修复效果。结果术后4周A、B及C组观察到神经导管中有新生轴索通过,再生神经发育不成熟;D组近段有髓神经纤维均匀疏散分布,远段未见明显再生神经束形成。术后12周各组再生神经已通过神经导管长入远端,肌电图、S-100免疫组织化学染色和图像分析结果表明A组再生神经轴突数量及再生神经质量优于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05)。D组移植神经轴突直径、髓鞘厚度、纤维密度与A、B及C组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但D组近段神经髓鞘部分空泡样变性及脱髓鞘改变,远段再生神经束形成少。结论甲壳素涂层并预置引导纤维的神经导管能有效修复周围神经缺损。; 沈华沈尊理张佩华张俊锋贾万新张兆锋黄一雄; 关键词：甲壳素周围神经雪旺细胞神经导管

等离子体处理聚乳酸／羟基乙酸材料的细胞相容性被引量：2: 2008年; 乳酸羟基乙酸共聚（PLGA）支架虽然早就应用于组织工程，用以修复肌腱、骨、外周神经等组织的缺损，但由于其亲水性差，细胞吸附力弱，在制作细胞-支架复合物时，往往效果不甚理想。我们用常压等离子体射流技术制备了PLGA支架。; 周佳沈尊理娄琳陈南梁沈华; 关键词：等离子体处理细胞相容性羟基乙酸聚乳酸骨髓基质干细胞 PLGA支架

睫状神经营养因子涂层的聚羟基乙酸聚乳酸神经导管修复犬胫神经缺损被引量：12: 2006年; 目的探讨应用脉冲等离子体方法涂层睫状神经营养因子(CNTF)的聚羟基乙酸聚乳酸(PGLA)神经导管修复犬胫神经缺损的疗效。方法18只杂交犬,每只犬左后肢制成胫神经2．5 cm缺损模型,随机分别应用三种方法修复。A组：应用脉冲等离子体方法涂层CNTF的PGLA神经导管；B组：单纯PGLA神经导管；C组：自体神经。应用苏木精-伊红和Masson染色、S-100免疫组化染色、神经电生理及神经轴突计数方法评价神经再生效果。同时动态记录犬行走步态变化,实验观察期3个月。结果神经导管血管化良好且大部分降解吸收,再生神经均已通过所有神经导管。A组与C组的神经传导速度和神经轴突计数差异无统计学意义(P＞0．05),而A组和C组的数据均优于B组(P＜0．05)。A组和C组的犬基本恢复正常行走步态,而B组犬仍有跛行。结论脉冲等离子体方法涂层CNTF的PGLA神经导管能有效修复犬2．5 cm胫神经缺损,取得与自体神经相近的效果。; 沈尊理沈华张菁张佩华王文祖陈南墚郯志清王永春连峰; 关键词：外周神经神经导管脉冲等离子体睫状神经营养因子

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上海市自然科学基金(03ZR14075)

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