国家自然科学基金(81072173)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 相关作者：程龙叶棋浓徐小洁张浩王瑜更多>>
- 相关机构：军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 肿瘤基因治疗的研究进展被引量：7
- 2012年
- 肿瘤是严重影响人类身体健康的重大疾病之一,肿瘤的发生发展是一个复杂的涉及到众多基因的过程,肿瘤的基因治疗也已经成为肿瘤治疗的研究热点之一。目前,肿瘤基因治疗的策略主要包括以下几个方面:基因沉默治疗、抑癌基因治疗、免疫基因治疗、自杀基因疗法、抑制肿瘤血管生成基因治疗、肿瘤多药耐药基因治疗、抗端粒酶疗法和多基因联合疗法等。我们简要地对上述策略及相关研究进展进行综述。
- 梁迎春程龙叶棋浓
- 关键词：肿瘤基因治疗
- RBPMS不同剪接体的真核表达和亚细胞定位
- 2013年
- 目的：构建具有多种剪接形式的RNA结合蛋白（RBPMS）基因的真核表达载体，并在真核细胞中表达，确定不同形式的RBPMS在细胞中的定位。方法：采用PCR技术从人卵巢cDNA文库中扩增RBPMS基因的几种完整编码序列（命名为RBPl～RBP4），克隆到带绿色荧光蛋白标签的pEGFP-C1表达载体上，转染人胚肾细胞293T，Western印迹鉴定RBPMS的表达，并利用激光共聚焦显微镜观察RBPMS不同剪接体在细胞中的定位。结果：限制性内切酶分析和DNA序列测定表明构建的重组表达载体正确，Western印迹实验证明RBP1～RBP4表达成功。通过激光共聚焦显微镜观察，RBP1／4围绕胞核在核膜的周围呈聚集状分布；RBP2则在细胞质和细胞核中均有分布，但会出现斑点状聚集；RBP3呈半月状紧密分布在细胞核周围；RBPMS中的RNA识别基序缺失后，这种现象消失，与空载体对照类似，在细胞核和细胞质中均有分布。结论：构建并表达了RBPMS基因的真核表达载体，RBPMS不同剪接体及RNA识别基序缺失后具有不同的亚细胞分布模式，提示具有不同的功能。
- 付洁王瑜程龙徐小洁张浩宋海峰叶棋浓
- 关键词：剪接体细胞内定位RNA结合蛋白
- c-Fos不同结构域的真核表达及功能鉴定
- 2013年
- 目的:克隆c-Fos蛋白不同结构域基因片段,构建其含FLAG标签的真核表达载体,并鉴定其功能。方法:用PCR方法扩增获得c-Fos不同结构域片段基因,定向克隆至本实验室保存的FLAG-pcDNA3.0载体中,瞬时转染293T细胞进行表达,并以本实验室保存的HA-c-Jun与FLAG-c-Fos不同结构域片段免疫共沉淀鉴定其相互作用区域,以佐证所构建的c-Fos结构域克隆的正确性。结果:测序结果表明c-Fos不同结构域序列正确,Western印迹显示可以在真核细胞中获得表达,并且免疫共沉淀结果显示c-Jun可以与c-Fos的bZIP区域特异性结合。结论:构建并表达了c-Fos不同结构域片段,为进一步研究与c-Fos相互作用的蛋白及其区域定位奠定了基础。
- 付洁王瑜程龙徐小洁张浩宋海峰叶棋浓
- 关键词：C-FOS激活蛋白1C-JUN免疫共沉淀
- 动物活体成像生物发光稳定细胞株的构建被引量：2
- 2011年
- 目的:构建组成型表达萤光素酶基因的载体,建立稳定高表达萤光素酶的MCF-7乳腺癌细胞株,检测其对细胞增殖的影响及在传代后的表达效果。方法:以载体pGL4.20为模板,PCR扩增萤火虫萤光素酶基因,将其克隆到载体pIRESpuro2上,将获得的pIRESpuro2-Luc经酶切和测序验证后,转染293T、MCF-7及ZR75-1细胞,通过检测萤光素酶报告基因的活性,检测其表达效果;将萤光素酶基因表达载体转染MCF-7细胞,通过嘌呤霉素筛选稳定转染细胞株,用有限稀释法挑选高表达萤光素酶基因的单克隆细胞株,并检测其对细胞增殖的影响与传代后的表达效果。结果:测序结果表明构建了萤光素酶基因表达载体,活性测定证明了其表达效果;筛选到高表达萤光素酶基因的MCF-7稳定转染细胞株,分析表明其遗传稳定性良好,对细胞的增殖没有影响。结论:构建了高表达萤光素酶基因的MCF-7稳定转染细胞株。
- 蒋凯韩永健程龙徐小洁张浩曹佳范忠义叶棋浓
- 关键词：萤光素酶活体成像生物发光乳腺癌
