国家自然科学基金(31072224)
- 作品数：21 被引量：75H指数：6
- 相关作者：丛丽娜王红英卢冬王丹张欢更多>>
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学化学工程更多>>
- 重组中国明对虾溶菌酶包涵体的复性研究被引量：1
- 2014年
- 作者的前期研究已证明,大肠杆菌表达系统能够高效表达重组中国明对虾溶菌酶,但目的蛋白主要以包涵体形式存在。本实验研究了重组中国明对虾溶菌酶包涵体的变性条件,并分别采用稀释复性法和亲和层析复性法对包涵体进行处理。实验结果发现,亲和层析复性明显优于稀释复性,具有更高的蛋白复性产率。在亲和层析复性实验中,分别优化了上样量、pH和温度3种因素。结果表明,较低浓度的蛋白复性液在pH 8.0的缓冲体系下,降低上样量并提高环境温度,会有效提高复性效率。亲和层析复性得到高纯度、可溶的重组对虾溶菌酶蛋白对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌和溶壁微球菌均具有高效的抑菌活性。
- 张艳敏李成武瑶梁雯靖宋宛霖姚鹏丛丽娜刘志文
- 关键词：溶菌酶包涵体重组蛋白复性
- 重组海参溶菌酶基因工程菌的构建及原核表达被引量：5
- 2012年
- 根据GenBank中海刺参溶菌酶的cDNA序列(Accession no.EF036468),利用RT-PCR技术扩增出海刺参溶菌酶的基因片段(SL),将其克隆到原核表达载体pET-32a(+),得到重组质粒pET-32a(+)-SL,再转化至E.coil Rosetta(DE3)pLysS。利用IPTG诱导表达,重组蛋白经SDS-PAGE分析,得到一条分子质量约为31ku的特异条带。经过Western blotting分析鉴定,结果显示重组海参溶菌酶成功在大肠杆菌中表达,并且有部分可溶性蛋白,占总菌体蛋白约10%。这些结果为进一步研究海参溶菌酶的作用机理奠定基础。
- 常艺海丛丽娜卢冬
- 关键词：溶菌酶原核表达克隆海参
- 枯草芽孢杆菌发酵条件的优化及微生态制剂的研制被引量：9
- 2013年
- 以从海参肠道中筛选的枯草芽孢杆菌为发酵菌株，通过单因素实验和正交实验确定了发酵培养基的最佳成分，即葡萄糖1.0％、牛肉膏1.5％、K2HPO40.5％；最适发酵条件为发酵温度30℃，初始pH7.2，接种量4％，发酵时间38～40h。经过优化后发酵液的活茵浓度可达到3.98×10^9 cfu／mL。再以1％海藻酸钠为壁材，4％氯化钙作为固化剂，将发酵后收集的菌体通过乳化法和挤压法制成微胶囊制剂，采用活菌计数法进行该微胶囊制剂的稳定性实验。结果显示，分别采用乳化法和挤压法包埋制备的微胶囊制剂的活菌存活率均高于未经微胶囊化的样品，但乳化法制备工艺相对较为简单且微胶囊形成速度较快，因此预计乳化法将更适合于该菌株微生态制剂的大规模工业化生产。
- 宋文龙丛丽娜王红英
- 关键词：枯草芽孢杆菌正交实验微生态制剂
- 产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及其发酵条件优化被引量：3
- 2013年
- 从大连海域的海参肠道中筛选得到一株产碱性蛋白酶较高的海洋细菌HS-A156，经形态学和16SrDNA序列分析初步鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）（GenBank检索号KCl66863）。对菌株HS-A156的酶学性质进行初步研究，结果表明该菌株所产蛋白酶最适作用pH为9．0，在pH8．O～11．0性能稳定；最适作用温度为40℃，在25～45℃具有良好的热稳定性。同时对该菌株产酶发酵培养基和发酵条件进行优化，确定了最适产酶培养基组成为葡萄糖1．5％、牛肉膏1．0％、酵母粉2．0％、CaCl20．05％；最佳发酵条件培养基初始pH8．0、发酵温度30℃、接种量3％。经过优化后菌株HS-A156产碱性蛋白酶的酶活力达到538U／mL，比优化前的产酶量提高了3．7倍。
- 宋明徽丛丽娜王红英姜启晨
- 关键词：海洋细菌碱性蛋白酶发酵优化
- 海参溶菌酶基因克隆及在毕赤酵母中的表达与纯化被引量：5
- 2010年
- 研究构建并筛选了具有抑菌活性的重组海参溶菌酶(Stichopus japonicuslysozyme,SJL)的毕赤酵母工程菌。从海参肠组织中提取总RNA,根据已经测得的SJL的基因序列(GenBank accession No.EF036468)设计引物,以总RNA为模板经RT-PCR获得目的基因,并将该基因与表达载体pPIC9K连接,构建重组质粒pPIC9K-SJL,再转化至毕赤酵母GS115中。利用MD、MM和含抗生素G418的YPD平板培养基筛选出表型为His+Muts的高拷贝阳性菌株。挑选具有抑菌活性的菌株进行甲醇诱导表达液体发酵,其上清液经硫酸铵沉淀、透析后得到溶菌酶粗品,再经CM52-纤维素阳离子交换柱进一步纯化,得到电泳纯的溶菌酶。结果显示,共筛选到7株有抑菌活性的重组酵母菌株,诱导72 h时表达量最高。SJL在毕赤酵母中得到成功表达。
- 谷跃峰丛丽娜骆宁
- 关键词：毕赤酵母纯化
- 重组海参溶菌酶N端可溶性表达与抑菌分析
- 2013年
- 通过对海参(Stichopus japonicus)溶菌酶(SjLys)cDNA(Genbank accession no:EF036468)片段的分析,结果发现N端基因区域所对应的蛋白质序列中含有糖苷酶活性。因此利用RT-PCR技术以其为模板,扩增出长度为174 bp的溶菌酶N端(SjLys-N)基因,将其亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a(+)-SjLys-N,再转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)pLysS,成功地构建了重组SjLys-N的基因工程菌。该工程菌在改造的LB培养基和最适的发酵条件下经IPTG诱导后,表达约23 kD的重组SjLys-N蛋白。此外,它还能以可溶性的形式表达,占总菌体蛋白约46%。经过Western blotting分析,重组SjLys-N在23 kD左右能够与penta-his抗体发生特异性免疫反应,结果表明重组SjLys-N得到正确的表达。最后对纯化后的重组SjLys-N进行了抑菌特性的分析,结果发现它对溶壁微球菌和副溶血弧菌有较高的抑菌活性。上述结果将为进一步研究海参溶菌酶的基因结构与功能之间的关系提高参考。
- 常艺海丛丽娜栾桂花刘志文杨杰钱斯日古楞
- 关键词：可溶性表达抑菌活性
- 海洋枯草芽孢杆菌HS-A38产直链脂肽活性物质的初步检测被引量：6
- 2011年
- 从海参肠道中分离得到了一株海洋枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HS-A38,将其发酵上清液经盐酸沉淀、有机溶剂萃取得到具有广谱抗菌活性的代谢物质。采用薄层层析和茚三酮显色检测到4种物质,分别命名为化合物1、2、3和4;应用层析板覆盖指示菌的生物自显影技术对其抗菌活性成分进行追踪、检测,结果发现化合物1和2具有显著抑制弧菌的作用。进一步检测分析表明,化合物1、2和4具有很强的热稳定性,初步推断它们属于直链的脂肽类化合物,并且这4种物质出现在不同的发酵代谢时期,这将为研究群体效应提供基础检测依据。
- 张欢丛丽娜侯英敏李爱民谢三群王丹
- 关键词：抗菌活性
- 海洋侧孢短芽孢杆菌的分离鉴定及其抗菌活性物质初步研究被引量：4
- 2014年
- 采用滤纸片和牛津杯法对分离自大连海参养殖圈海水及海底污泥的506株细菌进行了抗菌活性筛选,获得了1株抗菌活性较强的菌株HS-A465。经形态观察及生理生化实验,结合16S rDNA序列分析,确定为海洋侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)。采用薄层层析和茚三酮显色检测,在其发酵上清液中存在2种具有较强抗菌活性的代谢物质,对每一种成分进行了分离纯化和抑菌实验。结果发现,成分2和3具有显著的抑菌作用。进一步分析表明,成分2和3还具有很强的热稳定性和pH稳定性,对有机溶剂耐受性较好。根据茚三酮显色结果,可以初步推断该活性物质结构上含有游离的氨基酸,初步推断它们是直链的肽类物质。这一研究成果将为海洋抗菌活性物质的进一步开发利用提供理论参考。
- 王岩王红英钱斯日古楞丛丽娜
- 关键词：抗菌活性
- 高效净水异养硝化细菌的筛选鉴定及固定化应用研究被引量：4
- 2014年
- 本研究从海参养殖水体、泥土中筛选出4株具有硝化能力的异养硝化细菌。分别将其游离菌体细胞投入海参养殖水体,测定亚硝态氮、氨氮去除率,筛选出HS-NOB2为高效净化菌株,对HS-NOB2进行16S rDNA扩增及序列测定,初步鉴定为节杆菌(Arthrobacter sp.)。利用海藻酸钠包埋法对高效净化菌体细胞进行固定化,将该固定化菌投入养殖水体及人工合成污水,研究其对水体中亚硝态氮、氨氮的处理效果,并与游离菌体细胞进行比较。结果表明,固定化后亚硝态氮去除率达到49.85%,氨氮去除率达到56.58%,均明显高于游离菌体细胞。上述研究为探寻水体净化提供了新思路,为水质改良剂的实际生产提供可选菌株。
- 窦赫喆侯超高鹏丛丽娜李成
- 关键词：异养硝化细菌亚硝态氮氨氮固定化
- 热处理对海参溶菌酶C端多肽的抑菌活性和结构的影响被引量：3
- 2014年
- 实验优化了重组蛋白C端多肽（SjLys-C）的E. coli Rosetta（DE3）pLysS表达系统,将重组质粒pET-32a （＋）-SjLys-C转入有助于蛋白二硫键正确折叠的新表达宿主E. Coli Rosetta-GamiB（DE3）pLysS中. SDS-PAGE分析表明,重组蛋白SjLys-C在宿主中得到高效可溶表达.抑菌实验结果表明,重组蛋白SjLys-C具有较高的抑菌活性；经100℃处理40 min后,蛋白SjLys-C的抑菌活性提高.分子动力学（ MD）模拟表明, SjLys-C蛋白具有高度的热稳定性,蛋白热处理后未变性,仍维持完整的三级结构.但在热处理过程中, SjLys-C多肽的氨基酸残基随温度变化发生内部结构的重排.其中C端区、 N端区和活性区域（10~20）内氨基酸残基的柔性增加,蛋白整体构象展开,导致被包埋在内部的2个活性位点（Ser18, His48）暴露,并且它们之间的距离缩短；而活性区域（37~47）内氨基酸残基的构象调整,导致区域结构紧凑,使2个活性位点间的距离改变.
- 武瑶梁雯婧李成商旭丛丽娜
- 关键词：抑菌活性分子动力学模拟
