中央高校基本科研业务费专项资金(DL10BA06)
- 作品数：7 被引量：10H指数：1
- 相关作者：王春生朴善花安铁洙张志人王子竹更多>>
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- 小鼠miR367逆转录病毒载体的构建与检测被引量：1
- 2013年
- 为了探明小鼠体细胞重编程过程中miR367的作用机制,试验构建小鼠miR367逆转录病毒载体。根据NCBI上小鼠miR367的相关序列,从小鼠基因组中扩增miR367并将其连接到pMD18-T载体,然后对重组质粒进行双酶切并回收目的片段。将目的片段与pMXs逆转录病毒载体连接,然后依次经过酶切、PCR筛选阳性克隆和测序,最终构建逆转录病毒载体miR367-pMXs;采用磷酸钙法将miR367-pMXs转染plat-E细胞,以包装逆转录病毒颗粒;用逆转录病毒颗粒侵染小鼠胚胎成纤维细胞,在侵染后的第5天,提取被侵染细胞的总RNA,逆转录后获得cDNA,并采用Q-PCR方法检测侵染细胞中的miR367表达量。结果表明,被逆转录病毒侵染后,小鼠胚胎成纤维细胞中miR367的相对表达量比侵染前约提高了170倍。上述结果表明,成功构建小鼠miR367的逆转录病毒载体,为开展体细胞重编程机制的相关研究提供依据。
- 张志人安铁洙王子竹朴善花王春生
- 关键词：细胞重编程MICRORNA逆转录病毒载体
- 带有GFP的小鼠Sox2基因逆转录病毒载体的构建及其检测
- 2012年
- 为了建立体细胞重编程过程中检测Sox2基因表达变化的方法,本研究利用克隆获得的小鼠Sox2基因与逆转录病毒载体pMX-IRES-GFP连接,构建带有报告基因GFP的逆转录病毒载体,将其转染293GP细胞后获得假病毒上清。将获得假病毒上清侵染小鼠成纤维细胞(NIH3 T3细胞)后观察GFP的表达和检测Sox2转录量的变化。其结果,成功构建带有GFP的Sox2基因逆转录病毒载体pMX-Sox2-IRES-GFP;将构建的载体转染后293细胞后获得能侵染NIH3T3细胞的假病毒上清,且与未侵染的NIH3 T3细胞相比,侵染后的NIH3T3细胞的Sox2表达量提高近10倍。本研究为开展在体细胞重编程过程中Sox2表达与重编程效率的相关性提供依据。
- 渠俊杰陈霞王春生张志人安铁洙朴善花
- 关键词：小鼠逆转录病毒载体GFP
- 小鼠L-Myc基因逆转录病毒载体的构建与检测
- 随着对诱导多能干细胞(iPS细胞)的深入研究,如何优化诱导条件、诱导效率以及避免其癌变成为了关键。已有研究表明,在培育iPS细胞的时候,使用基因"L—Myc"代替基因"c—Myc",可大幅降低iPS细胞癌变的风险,从而有...
- 王子竹王春生张志人朴善花安铁洙
- 关键词：诱导多能干细胞逆转录病毒
- 文献传递
- 小鼠Lin28基因的克隆及原核表达
- 2011年
- 目的探讨获取小鼠Lin28蛋白的方法。方法 提取8.5 d ICR小鼠胚胎mRNA后反转录为cDNA序列,用一对两端引入特定酶切位点(NcoⅠ及XhoⅠ)引物,从该cDNA中扩增出Lin28基因编码区序列;将获得的Lin28基因编码区序列克隆到pMD18-T载体上。对质粒双酶切回收其中Lin28基因片段,与pET-30a(+)载体相连接并转化Rosetta(DE3)型大肠杆菌,用IPTG诱导表达,最后采用SDS-PAGE对表达结果进行分析。结果对所克隆的Lin28蛋白编码区的DNA序列分析表明,Lin28 CDS区包括终止密码子在内为630 bp,与参照DNA(NM_145833)相比同源性为99.37%,与参照氨基酸序列相比同源性为100%;在IPTG诱导下pET-30a(+)-Lin28重组质粒可表达与预期相符的约为27.5×103的蛋白质。结论利用克隆的小鼠Lin28基因,采用原核表达方法,成功获得小鼠Lin28蛋白,为进一步开展以重组蛋白诱导体细胞重编程研究奠定基础。
- 宁方勇王春生张秋婷安星兰朴善花安铁洙
- 关键词：ICR小鼠克隆原核表达
- 绵羊c-Myc的克隆与序列分析被引量：1
- 2013年
- 参照GenBank上绵羊c-Myc序列设计引物,利用RT-PCR技术从60d左右胎羊生殖嵴总RNA中扩增得到绵羊c-Myc基因编码区序列,其为包括终止密码子在内的1320 bp,编码有439个氨基酸。同源性分析结果显示,绵羊c-Myc基因编码区与牛、猪、猫、人、大鼠、小鼠、鸡、爪蟾和斑马鱼的核苷酸序列同源性分别为98.0%、94.1%、92.4%、90.4%、86.9%、86.2%、75.2%、66.4%和63.9%,其氨基酸序列同源性分别为98.0%、94.0%、92.5%、90.3%、87.2%、86.5%、72.2%、65.5%和64.6%;生物信息学软件分析显示,绵羊c-Myc含有细胞核定位模体和HLH结构域。本研究为进一步研究c-Myc基因的功能及探讨其中绵羊体细胞重编程中的作用奠定了基础。
- 王子竹安铁洙李昊朴善花王春生
- 关键词：绵羊
- 绵羊Sox2基因逆转录病毒载体的构建与检测被引量：1
- 2012年
- 为建立利用内源诱导因子诱导绵羊体细胞为多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPS)的方法,对绵羊Sox2基因进行克隆,并与pMXs连接构建逆转录病毒载体,将构建的载体转染293GP细胞以获得假病毒上清,利用假病毒上清侵染绵羊胎儿成纤维细胞以检测细胞中的Sox2表达变化。PCR和酶切鉴定结果显示,成功构建了pMXs-Sox2重组质粒,该质粒具有转染293GP细胞的能力,所获得的假病毒上清侵染绵羊胎儿成纤维细胞后,可诱导细胞表达Sox2基因。本研究为开展绵羊iPS的相关研究提供依据。
- 赵健灵安铁洙张志人王子竹朴善花王春生
- 关键词：绵羊成纤维细胞逆转录病毒载体
- 小鼠microRNA367逆转录病毒载体的构建与检测
- 为进一步研究microRNA在细胞重编程机制中的作用,构建小鼠microRNA367逆转录病毒载体。根据NCBI上小鼠microRNA367的相关序列设计引物,在上游引入BamHI,下游引入XhoI,然后以成年ICR小鼠...
- 张志人王春生王子竹朴善花安铁洙
- 关键词：体细胞重编程逆转录病毒载体
- 文献传递
- 小鼠骨骼肌Desmin启动子的克隆及表达活性分析
- 为了探明小鼠Desmin基因启动子在体细胞中的表达活性,本研究根据NCBI中小鼠Desmin启动子的序列,利用生物软件Primer Premier 6.0设计序列上、下游引物,克隆小鼠基因组中Desmin启动子片段,然后...
- 薛超王春生张志人朴善花安铁洙
- 关键词：小鼠启动子活性分析
- 文献传递
- 绵羊Klf4基因逆转录病毒载体的构建与检测被引量：1
- 2011年
- Klf4作为诱导产生多能性干细胞的基因之一,在体细胞的重编程过程中发挥着重要的作用。为构建绵羊Klf4基因逆转录病毒载体,参照本实验室已克隆出的绵羊Klf4基因编码区(GenBank登录号GQ280389)设计引物,将扩增的基因片段经过酶切后亚克隆到逆转录病毒载体pMXs的多克隆位点,经过酶切、PCR和测序鉴定正确后,和包装质粒pVSV-G联合转染293GP细胞获得重组逆转录病毒。通过绵羊胎儿成纤维细胞检测病毒侵染能力,并使用RT-PCR和SDS-PAGE方法检测在包装细胞和被侵染的成纤维细胞中Klf4基因的转录和表达。本试验成功获得具有侵染能力可以表达绵羊Klf4转录因子的重组逆转录病毒,为今后进一步开展以此为基础的绵羊体细胞诱导重编程研究奠定了基础。
- 王春生杨越飞宁方勇薛超朴善花安铁洙
- 关键词：绵羊逆转录病毒载体
- 绵羊Lin28 cDNA的克隆与序列分析
- 参照GenBank上牛、猪、小鼠和人的Lin28 cDNA序列设计简并引物,利用RT-PCR技术从60d胎羊小肠总RNA中扩增得到绵羊Lin28基因编码区序列,其为包括终止密码子在内的630bp,编码有209个氨基酸。同...
- 王春生张志人王子竹张志崇朴善花安铁洙
- 关键词：绵羊
- 文献传递
