烟台市科学技术发展计划项目(2011203)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：孙成铭邵会媛张守信马新衡栾材富更多>>
- 相关机构：青岛大学重庆医科大学烟台毓璜顶医院更多>>
- 发文基金：烟台市科学技术发展计划项目山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 稳定表达转录因子增强子结合蛋白α基因的白血病细胞株的构建及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的构建稳定表达转录因子增强子结合蛋白α(CCAAT-enhancer-binding proteinα,C/EBPα)基因的白血病髓性细胞系。方法利用DNA重组技术将C/EBPα基因插入到慢病毒表达载体PLVX-EGFP-3FLAG-Puro中,构建重组慢病毒质粒PLVX-C/EBPα-3FLAG-Puro,与慢病毒包装辅助质粒plp1、plp2、plp/VSVG(1∶1∶1)共转染293细胞,包装出慢病毒,实时荧光定量PCR法检测病毒滴度;收集病毒,分别以10、20 MOI感染K562细胞,G418筛选阳性克隆,利用有限稀释法筛选稳定转染的单克隆细胞株,并采用Western blot法检测C/EBPα蛋白的表达。结果重组慢病毒质粒PLVX-C/EBPα-3FLAG-Puro经菌落PCR及测序鉴定证明构建正确;包装后的慢病毒pSB957的病毒滴度为5×106 TU/ml;pSB957-K562细胞中C/EBPα蛋白的表达水平较高,且20和10 MOI pSB957感染的K562细胞中,C/EBPα蛋白的表达水平无明显差异。结论成功构建了pSB957-K562白血病细胞株,为进一步研究C/EBPα在白血病发生发展中的作用提供了良好的细胞模型。
- 邵会媛栾材富刘杰张守信马新衡张贵丽孙成铭
- 关键词：慢病毒基因表达
- C/EBPα-Per2信号通路对K562细胞相关基因的调控机制被引量：1
- 2014年
- 目的探索Per2在CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)参与调控的慢性粒细胞白血病(CML)发生、发展中的作用。方法通过脂质体介导将真核表达载体pGenesil-3-SiPer2和空载体pGenesil-3-HK转染到pEGFP-C/EBPα-K562细胞,利用新霉素筛选稳定干扰Per2的pEGFP-C/EBPα-K562单克隆细胞株。利用RT-PCR和Western blot分别检测转染组、空载组、对照组细胞p53、c-myc、cyclinB1的mRNA及蛋白表达水平的改变。结果成功构建稳定干扰Per2表达的pEGFP-C/EBPα-K562细胞株。与对照组和空载组细胞相比,转染组pGenesil-3-SiPer2-K562细胞的p53mRNA及蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),而cyclinB1和c-myc基因的mRNA及蛋白表达水平则显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Per2基因在C/EBPα参与调控的CML发生发展中起重要作用,该通路的发现对于研究CML的发生及调控机制具有重要意义。
- 孙成铭栾材富邵会媛高玉洁李少君马新衡刘日明李杰张守信刘鹏
- 关键词：慢性粒细胞白血病
- NPM1基因突变调控THP-1细胞体外增殖和侵袭及其机制被引量：1
- 2013年
- 目的探讨NPM1基因突变对THP．1细胞体外增殖和侵袭的影响及其机制。方法将THP．1细胞分为THP-1．mA组、空载体转染组和未处理组，THP-1．mA组使用携带人NPMl-mA的重组质粒pEGFPCI．NPMl．mA转染THP-1细胞，建立稳定表达NPM1．mA的白血病细胞系（THP-1-mA）；空载体转染组使用空载体质粒pEGFPCI转染THP-1细胞；未处理组不进行质粒转染。采用反转录PCR、免疫细胞化学检测3组细胞NPMl．mA基因和蛋白的表达；使用细胞生长曲线观察细胞体外增殖能力；流式细胞术检测细胞周期分布；细胞体外侵袭实验观察细胞体外侵袭能力；实时荧光定量PCR检测血管生成素1（Ang-1）、Ang．2mRNA的表达。结果成功构建了稳定表达NPMl．mA的白血病细胞株。与空载体转染组和未处理组比较，稳定表达NPMl。mA蛋白的THP-1．mA细胞体外增殖能力明显增强，G1期细胞比例减少，S期细胞比例增加（均P〈0．01）。与空载体转染组和未处理组比较，细胞体外侵袭实验显示THP．1-mA组细胞体外侵袭能力增强，实时荧光定量PCR显示THP．1．mA组细胞Ang．1mRNA表达增高（均P〈0．01）。结论NPMl突变基因的表达能够促进THP-1细胞体外增殖和侵袭，而Ang-1可能在其中发挥重要作用。
- 苗宗玉吴红邵会媛李倩邢艳艳张伶孙成铭
- 关键词：基因NPM1细胞侵袭血管生成素类
- 增强子结合蛋白α-节律基因Per2信号轴对K562细胞相关基因的调控机制
- 目的:探索Per2在C/EBPα参与调控的CML发生发展中的作用。方法:通过脂质体介导将真核表达载体pGenesil-3-SiPer2和空载体pGenesil-3-HK转染pEGFP-C/EBPα-K562细胞,利用新霉...
- 孙成铭栾材富邵会媛高玉洁李少君马新衡刘日明李杰张守信刘鹏
- 关键词：K562C/EBPΑPER2
- 文献传递
