国家自然科学基金(81171774)
- 作品数：13 被引量：69H指数：5
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- 慢病毒介导的Aggrecanase-1 shRNA转染体外培养的类风湿关节炎患者软骨细胞的研究被引量：1
- 2015年
- 目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰在软骨细胞的可行性,确定是否可以通过抑制软骨细胞中Aggrecanase-1的表达实现对软骨中Aggrecan的保护作用.方法 将设计并构建的shRNAAggrecanase-1慢病毒表达载体转染进RA患者关节软骨细胞.通过荧光定量PCR检测转染后不同时间点不同转染复数下Aggrecanase-1及Aggrecan mRNA水平的变化;通过免疫细胞化学方法测定各组Aggrecan蛋白水平表达量的变化,所有数据利用SPSS 19.0软件,采用配对t检验及方差分析进行统计分析.结果 由慢病毒介导的RNA干扰中,随着Aggrecanase-1 mRNA表达水平显著下降,Aggrecan mRNA 和蛋白表达也相应地增加,特别是shRNA4组变化较为显著,其中Aggrecanase-1 mRNA由开始的1.083±0.133降为0.074±0.004（t=35.71,P＜0.05）;Aggrecan mRNA由开始的1.182±0.160增加到2.922±0.169 （t=19.43,P＜0.01）;同时Aggrecan蛋白多糖由开始的507±265增加到2 270±334（t=11.43,P＜0.05）.结论 由慢病毒介导的RNA干扰可以实现对Aggrecanase-1表达的抑制,且对软骨细胞的表型和生长速度没有负面影响;慢病毒介导的RNA干扰可以通过抑制Aggrecanase-1的表达实现对Aggrecan的保护,是一种缓解软骨退化的有效途径.
- 杜清峰王英振张海宁刘英魁杜明程莉王永冯志强张宝安宋振王宁谭玉春王亮杜小卫
- 关键词：软骨细胞
- 血清白细胞介素-17水平对类风湿性关节炎患者骨关节损害作用及机制被引量：12
- 2014年
- 目的探讨血清白细胞介素（IL）-17水平对类风湿性关节炎（RA）患者骨关节损害作用及机制。方法我院收治的RA患者55例作为实验组，选取健康人55例作为对照组。检测两组血清IL-17和抗环瓜氨酸多肽抗体（抗CCP）水平，对比不同x线分期的RA患者血清IL-17水平，并观察患者活动期、类风湿因子和晨僵时间与患者血清IL-17水平的关系。结果实验组患者IL-17水平[（308．42±76．14）ng、L]和抗CCP水平[（1325．3±234．1）AU/mL]显著高于健康对照组[（124．38±48．65）ng/L、（24．6±11．7）AU/ml]，差异有统计学意义（P〈0．05）；实验组患者X线分期越高，m清IL-17水平越高[期的血清IL-17水平分别为（208．23±67．41）、（322．62±78．35）和（452．81±88．32）ng/L]，差异有统计学意义（P〈0．05）；处于活动期的患者血清IL-17水平[（342．61±101．41）ng/L]显著高于非活动期的患者[（228．61±101．54）ng/L]，类风湿因子阳性的患者血清IL-17水平[（318．74±98．42）ng/L]高于类风湿因子阴性的患者[（220．56±99．62）ng/L]，晨僵时间长的患者血清IL-17水平[（356．27±88．74）ng/L]显著高于晨僵时间短的患者[（201．38±78．43）ng/L]，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论血清IL-17在RA的发生发展中起重要作用，骨关节损害严重的患者血清IL-17水平高。
- 朱温帅王英振夏长所张海宁王昌耀
- 关键词：白细胞介素-17类风湿性关节炎骨关节损害
- 大直径陶瓷/陶瓷人工全髋关节置换治疗股骨头缺血坏死被引量：7
- 2012年
- 目的评价应用大直径陶瓷/陶瓷股骨头人工全髋关节置换术治疗股骨头缺血坏死的临床疗效。方法回顾性分析本组3年内收治的23例股骨头缺血坏死患者实施单侧大直径陶瓷/陶瓷股骨头人工全髋关节置换术,患者手术时平均年龄53.5岁。平均随访26个月,手术前后评估患者髋关节Harris评分,术后进行X线检查评价假体位置情况及主观满意度调查。手术前后及随访时监测患者肾功能的变化。结果所有患者均获得随访,在随访期内影像学显示假体位置良好,无假体松动,脱位等并发症。Harris评分由术前50.7分改善为术后91.2分,优良率为95.7%,总体满意率为95.7%。手术前后及随访时患者肾功能无明显变化。结论大直径陶瓷/陶瓷股骨头全髋关节置换术治疗股骨头缺血坏死可获得较好的安全性和近、中期疗效。
- 张海宁王英振吕成昱
- 关键词：陶瓷制品骨坏死
- 人胰岛素样生长因子I基因增强组织工程修复全层半月板缺损
- 2013年
- 目的建立全层无血运区半月板缺损模型，观察人胰岛素样生长因子I（humanin—sul in—like growth factorI，hIGF—I）基因修饰骨髓间充质干细胞（bone—marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）复合可注射藻酸钙凝胶修复半月板缺损的效果。方法制造成年山羊半月板前角无血运区全层缺损模型。实验分为四组，即基因增强组织工程（gene—enhancedtissueengineer-ing，GETE）组（GETE组）：用hIGF—I基因转染的BMSCs复合可注射藻酸钙凝胶修复半月板缺损；BMSCs组：用BMSCs复合藻酸钙凝胶修复缺损；空载体组：用藻酸钙凝胶空载体修复缺损；对照组：缺损旷置，不做任何修复。术后4，8，16周时相点行大体观察；光镜、电镜观察修复组织变化；测定修复组织中蛋白聚糖含量。结果GETE组修复半月板缺损在4—16周效果逐渐改善，缺损完全被修复组织填充，色白质韧，结合紧密，与正常半月板组织相似，大体观察优于其他各组；光镜下可见细胞随凝胶纤维排列分布，载体纤维间隙大多为细胞分泌基质所充填，细胞排列密集，基质分布均匀；扫描电镜观察到纤维排列规整紧密，纤维间缝隙为致密的细胞外基质填充；修复组织中蛋白聚糖含量较高，但与正常半月板仍有差异。结论转染hIGF—I基因的BMSCs复合可注射藻酸钙凝胶可改善全层半月板缺损的修复效果。
- 张海宁王英振吕成昱周峰续宗耀
- 关键词：半月板胫骨基因胰岛素样生长因子I
- 某综合性医院2013年-2015年医院感染率与医院感染现患率的比较分析被引量：3
- 2017年
- 目的比较某院2013年-2015年医院感染全年调查与现患率调查情况,研究医院感染现患率调查对全年医院感染情况的代表性,分析影响医院感染发生率的危险因素与抗菌药物的合理应用情况。方法对2013年10月31日、2014年6月6日、2015年6月13日所有住院患者进行调查,填写统一现患率调查表。同时对3年出院患者进行回顾性调查。结果 2013年-2015年全院出院人数95 430人,感染例数2 317例,医院感染率为2.43%。感染部位以下呼吸道感染为主,占比超过40%。全院调查60 154例住院患者中22 435例使用抗菌药物,使用率为37.30%,治疗使用抗菌药物11 202人,占49.93%。病原学送检7 526例,病原学送检率为67.18%。结论医院感染现患率能较好地反映全年医院感染情况,但抗菌药物使用与病原学送检仍为全年监测更客观指标。
- 邵明鑫王中军王虹张东峰
- 关键词：医院感染现患率抗菌药物
- Piezo1蛋白经MAPK／ERK5信号通路介导软骨细胞凋亡的机制研究被引量：15
- 2016年
- 目的探讨骨关节炎患者软骨细胞中机械敏感性离子通道Piezol蛋白经MAPK／ERK5信号通路介导软骨细胞凋亡的机制。方法体外培养骨关节炎患者软骨细胞，应用细胞牵张应力加载系统对软骨细胞分别加载0h、2h、12h、24h和48h的周期性牵张应力，在各加力组加入Piez01的特异性拮抗剂GsMTx4和ERK5的特异性抑制剂BIX02188作为抑制剂组。用免疫荧光激光共聚焦显微镜观察定位Piezol蛋白在软骨细胞中的表达位置；用RT-PCR检测细胞Piez01、ERK5、凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-2相关x蛋白（Bcl．associatedXprotein，Bax）及Bcl-2相关促凋亡蛋白（Bcl咀ssociateddeathpromoter，BAD）的mRNA相对表达量；用AV-PI凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况。结果激光共聚焦显微镜观察Piez01蛋白可以在细胞核和细胞质表达。RT-PCR检测PizeolmRNA在骨关节炎退变软骨中有少量表达，12h加力组Pize01、ERK5、BAD和BaxmRNA的相对表达量增加，24h达到峰值，48h表达量下降。而Bcl-2mRNA的相对表达量自2h开始下降，12h降到最低值，24h开始升高。Piezol蛋白特异性抑制剂GsMTx4组Pizeol、ERK5、BAD、BaxmRNA的相对表达量均下降，Bcl-2表达量升高。ERK5特异性抑制剂BIX02188组ERK5、BAD、BaxmRNA的相对表达量均下降，Bcl．2表达量升高，Piezol表达量不变。2h加力组细胞凋亡率于早期开始增加，晚期凋亡率无明显增加；12h加力组调亡率于晚期开始增加；24h加力组晚期细胞凋亡率最高；48h加力组晚期凋亡率较24h加力组降低。RT-PCR检测结果显示Piez01、ERK5、Bcl-2、BAD和BaxmRNA的表达量与晚期凋亡具有相似的表达趋势。结论Piezol参与骨关节炎的软骨细胞晚期凋亡过程，且通过MAPK／ERK5信号通路启动细胞凋亡。
- 李晓飞张钊王天宝王兰凤张海宁
- 关键词：离子通道软骨细胞MAP激酶信号系统细胞凋亡
- 环氧化酶2基因沉默不影响人骨髓间充质干细胞定向分化的能力被引量：5
- 2014年
- 背景:目前环氧化酶2基因沉默在干细胞中的研究还处在初级阶段。目的:构建携带环氧化酶2基因沉默的慢病毒载体,观察其在人骨髓间充质干细胞中的表达,以及其定向分化潜能变化情况。方法:应用重组慢病毒技术构建携带沉默环氧化酶2基因和绿色荧光蛋白的慢病毒载体,并用其转染体外培养第3代的人骨髓间充质干细胞,以无目的基因的慢病毒转染人骨髓间充质干细胞的实验组和未做处理的人骨髓间充质干细胞分别作为阴性对照组和空白组进行对比。转染后7 d分别提取各组细胞的总RNA和蛋白检测环氧化酶2表达量。对环氧化酶2基因沉默的人骨髓间充质干细胞和正常人骨髓间充质干细胞定向诱导,观察环氧化酶2基因沉默对人骨髓间充质干细胞成脂、成骨、成软骨能力的影响。结果与结论:慢病毒转染3 d后,荧光显微镜下可见人骨髓间充质干细胞发出绿色荧光,阴性对照组转染效率可达90%以上,实验组转染效率达85%以上。RT-PCR和Western blot检测结果显示,环氧化酶2基因在人骨髓间充质干细胞中的基因水平和蛋白水平均得到了明显抑制。环氧化酶2基因转染对人骨髓间充质干细胞成脂、成骨、成软骨能力无明显影响。
- 赫天张海宁项金瑜刘相萍邓继红王英振
- 关键词：人骨髓间充质干细胞环氧化酶2基因沉默细胞定向分化WESTERNBLOT
- 大直径金属/金属股骨头人工全髋关节置换治疗股骨头缺血坏死被引量：1
- 2012年
- 背景:与以往大直径股骨头的高磨损率和高髋臼松动率相比,新一代大直径金属对金属全髋关节有着更长的使用寿命和低磨损,低脱位率等优点。目的:评价应用大直径金属/金属股骨头人工全髋关节置换术治疗股骨头缺血坏死的临床疗效。方法:回顾性分析26例股骨头缺血坏死患者实施单侧大直径金属/金属股骨头人工全髋关节置换资料。结果与结论:所有患者均获得随访,在随访期内影像学显示假体位置良好,无假体松动,脱位等并发症。Harris评分由置换前49.5分改善为置换后92.5分,优良率为96%,总体满意率为96%。置换前后及随访时未发生假体松动、脱位、感染等不良反应。说明大直径金属/金属股骨头全髋关节置换治疗股骨头缺血坏死可获得较好的疗效,短期内无明显肾功能变化。
- 张海宁吕成昱徐浩王英振
- 关键词：金属对金属全髋关节置换骨坏死
- 人胰岛素样生长因子1基因转染脂肪源性干细胞的效应
- 2013年
- 背景:人胰岛素样生长因子1基因对脂肪源性干细胞的增殖和分化也可能会产生有效作用。目的:验证人胰岛素样生长因子1基因转染对体外培养的脂肪源性干细胞的效应。方法:构建含人胰岛素样生长因子1基因的双顺反子真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1,利用阳离子脂质体Lipofectamine2000介导转染体外培养的人脂肪源性干细胞。观察基因转染后细胞增殖及形态的变化,倒置荧光显微镜观测标记基因增强绿色荧光蛋白的表达并计算转染效率,酶联免疫吸附试验检测培养上清中人胰岛素样生长因子1的浓度,免疫组织化学染色及RT-PCR检测人胰岛素样生长因子1的表达,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化。结果与结论:测序及酶切证实真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1构建正确。体外培养的脂肪源性干细胞为多种形态并存,转染后6h检测到有EGFP的表达,至60h达到高峰,转染效率为(16±3)%。细胞上清中人胰岛素样生长因子1的浓度在60h达到22.65μg/L。免疫组织化学染色及RT-PCR均检测到人胰岛素样生长因子1的表达。转染后的细胞分裂增殖加快,细胞群体倍增时间缩短,S期细胞比例增多。证实人胰岛素样生长因子1基因可有效转染脂肪源性干细胞并表达人胰岛素样生长因子1蛋白质,同时可促进细胞增殖。
- 张海宁丁昌荣吕成昱王英振周峰续宗耀
- 关键词：干细胞脂肪干细胞胰岛素样生长因子脂肪源性干细胞
- 人工全膝关节置换后是否放置引流管:随机对照试验被引量：13
- 2016年
- 背景:人工全膝关节置换作为膝骨关节炎晚期患者缓解疼痛、重建膝关节功能的最终修复方案,已被人们普遍接受。但置换后放置引流管与否一直存在很大争议。目的:比较初次单侧人工全膝关节置换后膝关节腔内放置引流管与否的修复效果差异。方法:选择行初次单侧人工全膝关节置换的患者102例为研究对象,随机分为2组。引流组在关闭切口前放置引流管,非引流组则直接关闭切口不放置引流管。分别记录2组置换前及置换后1,3,7 d血红蛋白及红细胞压积值,计算总失血量,评估失血情况;观测患肢置换后疼痛目测类比评分、肿胀程度、皮肤瘀斑面积、感染以及下肢深静脉血栓形成等并发症;记录置换后1年时美国膝关节协会评分。对2组患者的观测指标进行对比分析。结果与结论:1置换后引流组总失血量及异体血输血率显著高于非引流组,差异有显著性意义(P<0.05);2置换后2组患者患膝目测类比疼痛评分、肿胀程度、皮肤瘀斑面积、感染以及下肢深静脉血栓发生率差异均无显著性意义(P>0.05);3美国膝关节协会评分2组差异未见显著性意义(P>0.05);4结果表明,人工全膝关节置换后膝关节腔内不放置引流管将降低患者置换后的失血量及异体输血率,并不增加置换后肢体肿胀程度及皮肤瘀斑面积。在感染、下肢深静脉血栓发生率及膝关节功能方面放与不放置引流管亦无差异。故全膝关节置换后关节腔内不放置引流管相对安全,并无明显不良后果。
- 任国清刘红云滕学仁张海宁卢菁
- 关键词：失血人工假体引流人工全膝关节置换失血功能评分随机对照试验
