黑龙江省自然科学基金(C200837)
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
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- 传染性胰腺坏死病毒VP3基因的分段表达及其抗原表位区域分析被引量：3
- 2011年
- 采用PCR方法克隆了传染性胰腺坏死病毒（IPNV）VP3四段相互重叠的基因片段L1、L2、L3和L4,将PCR产物分别连接到原核表达载体pGEX-6P1和pET32a上,经酶切、PCR、测序鉴定,获得重组质粒pGEX-6P1-VP3（L1）、pET32a-VP3（L2）、pGEX-6P1-VP3（L3）和pGEX-6P1-VP3（L4）;将其分别转化感受态菌Rosetta和BL21,经1.0mmol/L的IPTG诱导,分别得到大小为32 kD、26 kD、30 kD和31 kD的目的蛋白。经Western-blo-ting分析,4段目的蛋白中,只有VP3（L1）和VP3（L4）基因片段所表达的融合蛋白能与IPNV阳性血清反应,说明VP3蛋白的免疫优势区域集中在该蛋白的1~70和143~206氨基酸之间。该融合蛋白可以作为诊断抗原用于建立ELISA诊断方法。本实验为进一步精确定位VP3蛋白抗原表位奠定了基础。
- 刘巍巍赵丽丽赵永欣王健楠李一经葛俊伟乔薪瑗刘敏
- 关键词：VP3基因原核表达抗原表位
- 传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白在干酪乳杆菌的表面表达被引量：5
- 2010年
- 为获得传染性胰腺坏死病毒(IPNV)VP3蛋白在菌体表面表达,本研究将IPNV VP3基因定向插入乳酸杆菌表面表达型载体pPG1,构建的重组质粒pPG1-VP3电转化干酪乳杆菌,获得了重组干酪乳杆菌表达系统pPG1-VP3/Lactobacillus casei393。经1%糖诱导表达后,SDS-PAGE和western blot检测表明,有约31ku蛋白得到了表达,其大小与理论值相符;诱导表达的菌体进行间接免疫荧光试验表明,重组蛋白在菌体表面获得了表达。该病毒VP3蛋白在乳酸菌的表面表达为进一步探讨传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白免疫原性及相关功能奠定了基础。
- 刘敏赵丽丽葛俊伟乔薪瑗刘巍巍赵永欣李一经
- 关键词：VP3蛋白干酪乳杆菌
- 传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的原核表达及抗原性分析被引量：7
- 2010年
- 应用RT-PCR方法扩增了IPNV编码内衣壳VP3蛋白的基因615bp,将VP3基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌BL21中得到了表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小约30ku的VP3蛋白,与理论值相符,经薄层扫描分析表明目的蛋白表达量可占菌体总蛋白的30%。用镍离子亲和层析柱纯化可溶性的VP3蛋白,并制备抗血清。Western-blotting结果显示,VP3蛋白可被兔抗IPNV阳性血清识别;间接ELISA结果显示,IPNV细胞培养物作为抗原,兔抗VP3蛋白高免血清稀释度为1∶25600时,P/N>2,抗血清可与IPNV全病毒发生反应,以上两项结果说明,表达的VP3蛋白与天然的IPNVVP3蛋白一样具有相同的抗原性。试验利用原核表达系统成功地高效表达了IPNVVP3蛋白,融合蛋白以可溶性形式存在,并制备了高效价的抗血清。
- 赵丽丽刘敏哈卓刘巍巍赵永欣葛俊伟乔薪瑗李一经
- 关键词：VP3基因原核表达抗血清
- 传染性造血组织坏死病毒糖蛋白基因的原核表达及抗原性分析
- 2011年
- 应用RT-PCR方法扩增了传染性造血组织坏死病毒IHNV-ZYX株编码的糖蛋白(G)基因,将G基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中得到了表达。SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小的G蛋白。提取G蛋白的包涵体,并制备抗血清。间接ELISA和Western-blotting结果显示,重组表达的G蛋白与天然的IHNV G蛋白一样具有抗原性。试验为进一步研究IHNV G基因的免疫保护作用,为灵敏高效的检测传染性造血组织坏死病的方法的建立和基因工程疫苗的研制奠定了基础。
- 赵永欣赵丽丽刘巍巍王健楠李一经乔薪瑗葛俊伟刘敏
- 关键词：G基因克隆表达抗血清
- 传染性造血组织坏死病毒核衣壳蛋白的原核表达及抗原性分析被引量：5
- 2011年
- 应用RT-PCR方法扩增了长度为1176 bp的IHNV-ZYX株编码核衣壳(N)蛋白基因,将N基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中得到了表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小约48 KD的N蛋白,与理论值相符;提取N蛋白的包涵体,并制备抗血清。间接ELISA和Western-blot-ting实验结果说明,表达的N蛋白与天然的IHNV N蛋白一样具有相同的抗原性。本试验结果为进一步研究分离株IHNV-ZYX N基因的免疫功能,建立灵敏高效的检测传染性造血组织坏死病的方法和研制基因工程疫苗奠定了重要的物质基础。
- 赵永欣赵丽丽刘巍巍王建楠李一经乔薪瑗葛俊伟刘敏
- 关键词：N基因原核表达抗血清
