国家自然科学基金(81171722)
- 作品数：10 被引量：22H指数：2
- 相关作者：梁炳生李刚韦健贾英伟李永平更多>>
- 相关机构：山西医科大学第二医院山西医科大学上海交通大学附属第六人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金年山西省研究生优秀创新项目博士科研启动基金更多>>
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- 被动运动干预对大鼠失神经萎缩骨骼肌中miRNA-1表达和成肌细胞分化的影响被引量：10
- 2016年
- 目的探讨mi RNA-1在大鼠早期失神经支配后骨骼肌中不同时段的表达,以及被动运动对失神经骨骼肌mi RNA-1表达及成肌细胞分化的影响。方法取SD大鼠27只,体质量(200±10)g,随机分为假手术组(A组,n=3)、失神经组(B组,n=12)和失神经被动运动组(C组,n=12)。各组大鼠显露右侧坐骨神经并游离,B、C组切除坐骨神经长约1 cm,A组仅显露游离神经不切除;术后1 d起,对C组大鼠右后肢行被动屈伸运动。A组于术后6 h,B、C组分别于术后3、7、14、28 d,采用颈椎脱臼法各处死3只大鼠,测量腓肠肌湿重比以及行HE染色观察腓肠肌细胞直径,对肌萎缩情况进行综合评价;采用RT-PCR法检测mi RNA-1、肌分化因子(myocyte differentiation factor,Myo D)基因表达,免疫组织化学染色观察Myo D蛋白表达。结果 B、C组腓肠肌失神经后均有不同程度萎缩,随失神经时间延长,肌纤维排列逐渐紊乱,肌细胞直径逐渐减小,失去正常的结构形态。B、C组术后各时间点腓肠肌湿重及肌细胞直径均小于A组(P<0.05);B、C组间除术后3 d腓肠肌湿重比以及术后3、28 d肌细胞直径比较差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各时间点C组均大于B组(P<0.05)。术后随时间延长,B、C组mi RNA-1和Myo D基因相对表达量呈逐渐升高趋势,但各时间点均显著低于A组(P<0.05);B、C组间除术后3 d比较差异无统计学意义外(P>0.05),术后7、14、28 d C组mi RNA-1和Myo D基因相对表达量均高于B组(P<0.05)。免疫组织化学染色示A、B、C组各时间点Myo D均呈阳性表达,A组阳性表达少于B、C组;B、C组随失神经时间延长,阳性表达逐渐增多,且C组各时间点阳性表达均多于B组。相关性分析结果示mi RNA-1、Myo D分别与腓肠肌湿重比在3、7 d时无相关性(P>0.05),14、28 d时成正相关(P<0.05);各时间点Myo D与mi RNA-1基因相对表达量成正相关(P<0.05)。结论被动运动可能通过促进mi RNA-1的表达,以促进肌细胞分化发挥�
- 刘泽远张文苹黄强开李刚陈治韦健梁炳生
- 关键词：失神经肌萎缩细胞分化
- 过表达慢病毒载体介导miR-1转染L6细胞增殖分化及组蛋白去乙酰化酶的表达被引量：1
- 2019年
- 背景:有研究认为组蛋白去乙酰化酶能够影响肌肉的分化和增殖,且其与miR-1关联紧密,但其具体调控机制尚不明确。目的:分析mi R-1过表达对L6成肌细胞增殖分化及组蛋白去乙酰化酶表达水平的影响。方法:构建表达含miR-1的重组慢病毒载体,进行测序和酶切鉴定,稳定转染L6成肌细胞,采用RT-PCR检测miR-1的表达水平。取稳定转染miR-1重组慢病毒载体的L6成肌细胞(miR-1组)、转染空质粒重组慢病毒载体的L6成肌细胞(空载组)及未转染的L6成肌细胞(空白组),培养24,48,72,96 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖,荧光显微镜下观察细胞形态变化,Western blot检测培养72 h后的α肌动蛋白表达;培养24,72,120 h后,Western blot与RT-PCR检测mi R-1组、空载组组蛋白去乙酰化酶蛋白及基因的表达。结果与结论:①miR-1慢病毒载体经酶切和测序鉴定正确,转染48 h后,mi R-1组L6成肌细胞miR-1基因表达显著高于空载组、空白组(P <0.01),实现了miR-1在L6成肌细胞中过表达;②培养24,48,72,96 h后,3组细胞增殖能力比较差异无显著性意义(P> 0.05);③培养24,48 h时,miR-1组与空白组、空载组细胞形态无明显差异;72 h以后,miR-1组呈梭形的成熟肌细胞显著增多,且细胞α肌动蛋白表达明显高于空载组、空白组,证实miR-1过表达促进了L6成肌细胞的分化;④随着时间推移,miR-1组的组蛋白去乙酰化酶蛋白条带较空载组明显变淡、变细;miR-1组培养不同时间点的组蛋白去乙酰化酶基因表达均低于空载组(P <0.01);⑤结果表明,miR-1过表达可促进L6成肌细胞的分化能力,其机制与抑制组蛋白去乙酰化酶4的表达相关。
- 弓贺炜刘承伟梁炳生李刚
- 关键词：慢病毒载体MIR-1Α肌动蛋白转染肌动蛋白类
- 微RNA与失神经骨骼肌萎缩被引量：1
- 2013年
- 微RNA(miRNA)是一类由内源性基因编码、长约22 nt的非编码单链RNA分子。近年研究表明,miRNA不仅涉及细胞增殖、分化、凋亡、发育等诸多生理过程,而且对许多疾病发生发展,甚至预后起着关键作用,有的miRNA还可作为临床疾病诊断和预后的标志物。该文就miRNA在失神经骨骼肌萎缩中的作用研究进展作一综述。
- 冯小宁李永平贾英伟谷造华梁炳生
- 关键词：骨骼肌萎缩肌细胞非编码RNA
- RNA干扰介导的FoxO3a基因下调延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩被引量：1
- 2015年
- 目的：探讨慢病毒转染RNAi技术介导的FoxO3a基因下调延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩的疗效。方法将36只SD大鼠随机分为对照组和实验组，各18只。切断两组大鼠右侧坐骨神经，建立右下趾长伸肌失神经肌萎缩模型。建立模型后于实验组大鼠失神经趾长伸肌注射50μl重组慢病毒载体Lenti-GFP-FoxO3a；对照组注射Lenti-GFP溶液50μl，注射后1、3周，每个时间点两组大鼠分别取3只，完整切除右侧趾长伸肌，于荧光显微镜下观察绿色荧光信号，每个时间点两组大鼠分别取6只，完整切除右侧趾长伸肌，观察肌细胞超微结构，检测肌肉总蛋白含量，测肌肉湿重维持率，RT-PCR检测FoxO3a基因，检测肌细胞横截面积。结果转染后1和3周，两组趾长伸肌中均可观察到大量GFP荧光信号。转染后1周实验组的肌肉湿重维持率、肌细胞横截面积、趾长伸肌肌肉总蛋白含量分别为（90.87±1.56）％、（937.63.42±17.63）μm2和（93.20±1.33） mg/ml，均明显高于对照组（77.73±2.21）%、（721.50±14.40）μm2和（74.74±1.45） mg/ml，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。RT-PCR检测实验组FoxO3a基因与对照组相比明显下调（P〈0.01）。转染后3周，上述各指标分别为（86.69±1.31）%、（843.10±16.44）μm2和（80.39±2.34） mg/ml，仍高于对照组，对照组各指标为（53.42±2.01）%、（633.90±12.90）μm2和（65.22±2.72） mg/ml（均P〈0.01）。超微结构显示，术后1周和3周，实验组退变的细胞核均少于对照组，核质染色均匀。结论 FoxO3a基因siRNA重组慢病毒在大鼠体内有较高的转染率，可有效抑制FoxO3a基因的表达。RNAi介导的FoxO3a基因下调可在大鼠失神经早期延缓失神经骨骼肌的萎缩。
- 张鉴秦春耀韦健张小丽李刚冯勇杜利兵梁炳生
- 关键词：肌萎缩FOXO3A去神经支配RNA干扰
- miRNA-133a过表达对体外L6成肌细胞增殖分化作用机制的研究被引量：2
- 2014年
- 目的 构建微小RNA-133a重组慢病毒载体,观察其转染后对L6成肌细胞增殖、分化及转录因子MEF2A的影响.方法 构建表达含微小RNA-133a基因的重组慢病毒载体,转染L6成肌细胞,以实时定量PCR（Taqman探针法）对微小RNA-133a基因表达水平进行检测;细胞计数试剂盒（CCK-8）试验评价微小RNA-133a过表达后对L6成肌细胞增殖的影响;倒置荧光显微镜观察L6成肌细胞增殖、分化的影响;Western blot法检测转录因子MEF2A表达水平的变化.结果 构建的微小RNA-133a重组慢病毒载体经质粒酶切和测序鉴定正确;与对照组比较,转染L6成肌细胞24h后,微小RNA-133a基因的相对表达量明显增加（P＜0.01）;L6细胞增殖数量明显增加（P＜0.01）,对L6成肌细胞的分化有明显抑制作用（P＜0.01）;MEF2A的表达量逐渐下降（P＜0.01）.结论 成功构建微小RNA-133a重组慢病毒载体并转染16成肌细胞后可高效表达微小RNA-133a,促进体外成肌细胞的增殖并抑制分化.
- 李波弓贺炜李文斌李永平冯勇贾英伟田江华李刚梁炳生
- 关键词：细胞分化细胞增殖慢病毒载体
- miRNA-1和miRNA-133在大鼠失神经腓肠肌中的变化规律研究被引量：6
- 2013年
- 目的研究大鼠腓肠肌失神经支配后miRNA-1(miR-1)、miRNA-133(miR-133)的表达规律,并分析miR-1、miR-133之间的关系。方法 108只SD大鼠,随机分成9大组,每大组再分实验组和对照组,实验组大鼠切断右下肢坐骨神经,左下肢行坐骨神经探查术,对照组大鼠双下肢均行坐骨神经探查术,在各个时间点取下腓肠肌,采用RT-PCR检测miR-1和miR-133并描述其表达规律。透射电镜观察肌卫星细胞超微结构变化,采用方差分析和LSD法进行统计学分析。结果随着失神经时间的延长,骨骼肌中miR-1和miR-133表达先逐渐下调再升高,2周表达最低,miR-1约为正常时的0.25倍[(0.25±0.12),t=2.771,P=0.018],miR-133为正常时的0.3倍[(0.30±0.19),t=0.076,P=0.018],随后二者表达逐渐升高。在腓肠肌超微结构中,随着失神经时间的延长,肌丝肌节逐渐紊乱,肌小节长度减少,肌质网扩张,线粒体肿胀,线粒体嵴变短,直至消失。结论 miR-1及miR-133表达改变与失神经骨骼肌萎缩发生的机制密切相关。
- 谷造华冯小宁李永平李刚贾英伟梁炳生
- 关键词：MIR-1腓肠肌失神经骨骼肌萎缩
- miRNA-222在失神经骨骼肌萎缩中的作用实验研究被引量：1
- 2020年
- 目的研究miRNA-222在失神经骨骼肌萎缩中的作用及机制。方法取40只成年雄性SD大鼠,随机分为4组,假手术组、失神经骨骼肌萎缩组、失神经骨骼肌萎缩+miRNA-222注射组和失神经骨骼肌萎缩+anti-miRNA-222注射组。建立SD大鼠右下肢坐骨神经失神经骨骼肌萎缩动物模型。于术后4周行HE染色、腓肠肌肌湿重比和肌细胞直径检测,采用实时定量PCR检测各组miRNA-222的表达水平,采用实时定量PCR和Western blot法检测各组腓肠肌细胞中miRNA-222靶基因MyOD和Rbm24的mRNA及蛋白表达量。结果术后4周,失神经骨骼肌萎缩组miRNA-222表达量显著增高;与假手术组相比,失神经骨骼肌萎缩组出现明显肌萎缩,外源性注射miRNA-222可使肌萎缩进一步加重,外源性注射anti-miRNA-222可有效减轻肌萎缩。与假手术组相比,失神经骨骼肌萎缩组MyOD和Rbm24 mRNA含量显著减少,外源性注射miRNA-222后MyOD和Rbm24 mRNA含量进一步减少,相反外源性注射anti-miRNA-222后MyOD和Rbm24 mRNA含量虽较假手术组低,但与失神经骨骼肌萎缩组及miRNA-222注射组相比MyOD和Rbm24 mRNA含量均有显著增高。蛋白检测结果与mRNA结果一致。结论外源性miRNA-222可抑制MyOD和Rbm24的mRNA及蛋白表达水平,加重失神经骨骼肌的萎缩程度;相反,外源性anti-miRNA-222可有效对抗miRNA-222的作用,减轻失神经骨骼肌的萎缩程度。
- 陈治郭丽鲁晓梅常文凯李刚乔虎云贾英伟田江华张登峰梁炳生
- 关键词：肌萎缩MYOD
- 长链非编码RNA在小鼠失神经骨骼肌中的变化规律及意义
- 2017年
- 目的研究失神经骨骼肌萎缩过程中长链非编码RNA（long non—coding RNA，LncRNA）的表达变化及意义。方法取48只Balb／c小鼠，建立右下肢腓肠肌失神经支配模型，采用实时定量PCR（qPCR）检测失神经支配后1、3、5、7、14和28d的腓肠肌中一些LncRNA是否表达及表达变化。结果实验小鼠腓肠肌失神经支配后的不同时段，LncRNA的Meg3、H19、linc—MD1、Malat1、Neat1、Nctc1、SRA均有表达且表达水平在这段时间的连续观察中基本都呈先升高后降低的趋势。结论LncRNA的Meg3、H19、linc—MD1、Malat1、Neat1、Nctc1、SRA在失神经骨骼肌中有表达，表达强度与肌肉萎缩密切相关。
- 韦健寒桦梁炳生
- 关键词：肌萎缩失神经长链非编码RNA
- 微小RNA调控骨骼肌增殖、分化的研究进展
- 2013年
- 骨骼肌损伤、萎缩等疾病的防治一直是困扰临床医生的难题。这些骨骼肌疾病的康复离不开肌细胞增殖、分化的调节。微小RNA（microRNA）作为基因表达的调节因子，通过对骨骼肌细胞增殖、分化机制的开启、促进和抑制等方式，对骨骼肌发育过程中的初始肌细胞、成肌细胞以及生物体成熟以后的肌卫星细胞的增殖、分化均进行着精细调节。因此，研究microRNA调节骨骼肌增殖、分化的机制已成为科研工作者的当务之急，并具有广阔的应用前景。
- 于猛李刚韦健杨凯梁炳生
- 关键词：骨骼肌损伤分化机制微小RNAMICRORNA骨骼肌疾病
- miRNA-1和miRNA-133过表达对L6细胞增殖与分化的影响被引量：1
- 2014年
- 目的观察大鼠微小RNA-1(miR-1)、微小RNA-133(miR-133)过表达对L6成肌细胞增殖分化的影响。方法分别构建miR-1、miR-133的重组慢病毒载体,并进行测序鉴定,稳定转染L6细胞后,用RT-PCR Taqman探针的方法检测miR-1、miR-133的表达水平;细胞计数实验(CCK-8试剂盒)评价miR-1、miR-133过表达后对L6细胞增殖的影响。诱导稳定转染后L6成肌细胞进行分化,观察miR-1、miR-133过表达后对L6细胞分化的影响。以Western blot法检测miR-1、miR-133过表达后,α肌动蛋白(skeletalα-actin)表达水平的变化。采用Kruskal-Wallis H检验、重复测量和单因素方差分析进行比较。结果miR-1慢病毒载体经酶切和测序鉴定序列准确,转染48 h后L6细胞miR-1组(4.292±0.50)比control组(0.231±0.86)、miR-133组(0.205±0.48)比control组(3.564±0.45)表达均显著上调(P<0.001);细胞计数和细胞分化实验显示,培养120 h后,过表达miR-1的L6细胞α肌动蛋白(skeletalα-actin)比对照组(0.415±0.02)表达显著升(0.676±0.02,F=222.144,P<0.001),分化明显加快,但增殖无明显变化;而过表达miR-133的L6细胞增殖明显加快,α肌动蛋白表达呈下降趋势(0.363±0.02,F=2385.643,P<0.001),分化受到抑制。结论 miR-1、miR-133慢病毒表达载体稳定转染L6成肌细胞后高效表达miR-1和miR-133,miR-1可促进L6细胞分化,miR-133能促进L6细胞增殖但抑制其分化。
- 弓贺炜李波李文斌李刚梁炳生
- 关键词：慢病毒载体微RNAS细胞分化细胞增殖肌动蛋白类
