上海市自然科学基金(03ZR14031)
- 作品数：11 被引量：72H指数：6
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- 马兜铃酸致肾小管上皮细胞损害及释放内皮素与血管紧张素的实验研究被引量：6
- 2004年
- 目的 :探讨马兜铃酸 (AA)对培养的肾小管上皮细胞的损害 ,及释放内皮素 (ET)、血管紧张素(Ang -Ⅱ ) 的影响。方法 :5 %FCSRPMI - 1 6 4 0培养肾小管上皮细胞 (LLC -PK1 ) ,采用结晶紫染色法观察细胞增殖 ;荧光染色观察活细胞数目 ;酶动力学检测LDH活性 ,比色法检测NAG水平 ;透射电镜观察细胞超微结构 ;放射免疫法测定ET、Ang -Ⅱ的浓度。 结果 :(1 )AA 4 0、80、1 6 0 μg/ml可明显抑制细胞增殖 ,结晶紫OD值显著减少 ,与无AA对照组比较P <0 .0 1。在AA 4 0 μg/ml作用下 ,随着时间延长 ,活细胞数目逐渐下降 ,显示AA对细胞损伤有一定的延续性 ;增加LDH释放率和NAG酶水平 ,与无AA对照组比较P <0 .0 1。细胞超微结构观察 :AA 4 0 μg/ml作用 2 4h后 ,细胞超微结构发生显著改变 ,以核变异最突出 ,出现染色质浓染、核边集、核缺失、核膜卷曲增厚 ,线粒体肿胀等严重细胞损伤改变。AA(4 0、80、1 6 0 μg/ml)可明显刺激细胞释放ET、Ang -Ⅱ ,与无AA对照组比较P <0 .0 1。 结论 :马兜铃酸对肾小管上皮细胞有明显的细胞毒性损害作用 ,使细胞超微结构发生显著损伤性改变 ,刺激肾小管上皮细胞分泌和释放ET、Ang -Ⅱ 。
- 王会玲张金元周巍朱丽娟
- 关键词：马兜铃酸细胞超微结构血管紧张素NAG
- 甘草酸对马兜铃酸致肾小管上皮细胞损害保护作用的初步研究被引量：22
- 2005年
- 目的:探讨甘草酸(glycyrrhizin ,GL)对马兜铃酸(aristolorchicacid ,AA)肾损害的保护作用,观察GL是否可以减轻AA对培养的肾小管上皮细胞的损害。方法:5 %FCSRPMI - 16 4 0培养肾小管上皮细胞(LLC -PK1) ,采用结晶紫染色法观察细胞增殖;荧光染色观察活细胞数目;酶动力学检测LDH活性,比色法检测NAG水平;透射电镜观察细胞超微结构。结果:(1)AA 4 0、80、16 0 μg/ml可明显抑制细胞增殖,结晶紫OD值显著减少,与无AA对照组比较(P <0 .0 1)。(2 )GL在5、10、2 5 μg/ml时结晶紫OD值与无GL对照组比较(P >0 .0 5 ) ;GL在5 0 μg/ml时P <0 .0 5 ,10 0 μg/ml、2 0 0 μg/ml时P <0 .0 1,提示大剂量GL可改善AA抑制细胞增殖的作用。(3)在AA 4 0 μg/ml作用下;随着时间延长,无GL组的细胞存活数目逐渐减少,而GL(10 0 μg/ml、2 0 0 μg/ml)作用组,活细胞数目明显增多,显示高浓度GL对细胞损伤有一定的保护作用。(4)GL在5、10、2 5 μg/ml时,LDH释放率、NAG酶水平与无GL对照组比较(P >0 .0 5 ) ,GL在5 0 μg/ml时P <0 .0 5 ,GL在10 0 μg/ml、2 0 0 μg/ml时LDH释放率、NAG酶明显减少,与无GL组比较(P <0 .0 1)。提示大剂量GL可减轻AA的细胞毒作用。(5 )细胞超微结构观察:AA 4 0 μg/ml作用2 4h后,细胞超微结构发生显著改?
- 王会玲张金元
- 关键词：甘草酸马兜铃酸肾小管上皮细胞马兜铃酸肾病
- 甘草酸和泼尼松对慢性马兜铃酸肾病大鼠肾脏组织病理及超微病理改变的影响被引量：11
- 2007年
- 目的通过建立大鼠慢性马兜铃酸肾病(AAN)动物模型,观察甘草酸、泼尼松对慢性AAN肾损害的干预作用。方法雄性Wistar大鼠98只,SPF级,随机分为4组:正常对照组20只,模型组、甘草酸组、泼尼松组每组26只;实验组按马兜铃酸(AA)20 mg／(kg·d)关木通浸膏灌胃,正常对照组灌胃等体积饮用水;2 h后按分组灌胃给药:甘草酸25 mg／(kg·d),泼尼松3．15 mg／(kg·d);正常对照组、模型组灌胃饮用水。各组每周测量体重,于第4、8、12周测定相关肾功能指标;取肾组织进行形态学检查。结果随着喂饲时间延长,正常对照组大鼠体重稳定性增长,而马兜铃酸给药各组体重增长缓慢。马兜铃酸用药后各组血肌酐／体重水平明显增高,甘草酸组、泼尼松组血肌酐／体重水平显著降低。肾脏组织形态学改变:甘草酸、泼尼松治疗组形态结构损害程度较模型组(纤维化程度约30％)轻微,纤维化程度约15%-20%。电镜结果:马兜铃酸可引起肾小管上皮细胞损伤、变性、坏死,线粒体等细胞器损伤明显,有细胞核变异。甘草酸、泼尼松组以小管损伤为主,线粒体等细胞器正常,细胞核变异少见,间质胶原纤维较少。结论甘草酸、泼尼松对大鼠慢性马兜铃酸肾损害有一定的保护作用,能降低血肌酐,改善肾功能,在一定程度上减轻马兜铃酸造成的肾组织形态学改变,并减少肾间质纤维化程度。
- 王会玲张金元黄健
- 关键词：马兜铃酸甘草酸
- 马兜铃酸对大鼠肾功能和组织病理学影响及川芎嗪与苯那普利的干预作用被引量：7
- 2006年
- 目的：通过动物实验，观察大鼠灌胃马兜铃酸（AA）后，肾功能及肾脏组织病理学改变，及川芎嗪、苯那普利对肾损害的干预作用。方法：雄性Wistar大鼠98只，SPF级，随机分为4组：正常对照组20只，实验组分为模型组、川芎嗪组、苯那普利组，每组26只；各实验组按AA20mg·kg^-1·d^-1关木通浸膏灌胃，2h后按分组灌胃给药。川芎嗪50mg·kg^-1·d^-1，苯那普利1．8mg·kg^-1·d^-1；正常对照组、模型组灌胃饮用水。各组每周测量体重，分别于第4、8、12周处死动物；腹主动脉采血分离血清，检测肾功能；取肾组织进行病理形态学检查。结果：AA灌胃4周后各组血肌酐／体重水平明显增加，与正常对照组比较有统计学差异；与模型组比较，川芎嗪、苯那普利组血肌酐／体重水平显著降低，提示有改善肾功能作用。肾脏组织病理学可见模型组早期有明显的肾小管坏死。部分小管结构紊乱较严重，空泡变性明显；后期出现间质灶性纤维化，纤维化面积〉30％。川芎嗪、苯那普利治疗组的肾功能和组织学损害程度较轻微，纤维化程度约15％～20％。结论：马兜铃酸对大鼠肾脏具有肾毒性，可导致小管间质损害和肾纤维化。川芎嗪、苯那普利对马兜铃酸肾损害有保护作用，能减轻马兜铃酸造成的肾组织病理损害，减少肾纤维化程度。
- 王会玲张金元黄健
- 关键词：马兜铃酸肾脏病川芎嗪治疗学病理学
- 马兜铃酸对大鼠肾功能和肾脏组织病理的影响被引量：2
- 2006年
- 目的观察马兜铃酸对大鼠肾功能和肾脏病理的影响。方法雄性Wistar大鼠46只,随机分为正常对照组20只,实验组26只。实验组按马兜铃酸(AA)20mg·kg-1·d-1的剂量给予关木通浸膏灌胃,正常对照组灌胃等体积饮用水。每周测量体重,于第4,8,12周代谢笼法留取24h尿液,分别腹主动脉采血,测定相关肾功能指标,取肾组织进行组织病理检查。结果实验组大鼠体重增长缓慢,尿量增多,尿白蛋白、尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷(NAG)酶排泄量明显增加,血肌酐/体重进行性升高,提示AA作用后肾功能发生明显损害。肾脏病理改变:实验组光镜下早期为肾小管变性、坏死等急性小管间质损害,逐渐加重,后期小管结构紊乱严重,并出现严重的局灶性萎缩及间质早期纤维化;电镜表现为细胞器损伤明显,细胞核变异等,第8周时已出现早期间质纤维化,12周时间质纤维化面积达到31.36%。结论关木通所含马兜铃酸对大鼠肾脏具有明显损害作用,肾组织病理改变主要为小管间质病变,并导致细胞核变异,早期间质纤维化。
- 王会玲张金元黄健
- 关键词：马兜铃酸肾脏毒性病理学
- 马兜铃酸肾病大鼠肾损害及纤维化进展与相关因子表达的关系被引量：4
- 2006年
- 目的探讨细胞因子网络失衡在马兜铃酸肾病(AAN)肾纤维化发生发展中的作用。方法雄性Wistar大鼠46只,SPF级,随机分为对照组(20只)和模型组(26只),模型组用含20mg/(kg.d)马兜铃酸(AA)的关木通浸膏灌胃,对照组用同体蒸馏水灌胃。于第4、8、12周处死动物,取肾组织行HE、PAS、Masson染色,病理学观察分析肾小管损伤和间质纤维化程度,免疫组化分析PCNA、VEGF、TGF-β1蛋白表达,RT-PCR分析VEGF、ET-1、BMP-7mRNA的表达。结果模型组大鼠在第4周即可见明显的肾小管间质损伤,并随时间延长而进行性加重,第12周小管间质形态结构紊乱严重,纤维化程度达31.36%;第4周时肾组织PCNA表达明显增高,第8周时呈下降趋势,第12周时在基底膜裸露的肾小管很少有PCNA阳性表达;在第4周TGF-β1、VEGF表达明显增高,随时间延长TGF-β1呈持续高表达,但VEGF阳性表达逐渐下降。RT-PCR检测发现模型组从第4周起VEGF、ET-1mRNA表达明显升高,第8、12周略有下降,但仍维持在较高水平,而BMP-7随着病变进展表达逐渐减少,第12周达最低水平。结论肾小管严重损伤及快速进展的早期纤维化是AAN的特征之一;肾小管上皮细胞的再生修复能力严重受损,促修复和抑纤维化因子表达不足,而致纤维化因子高表达,可能是AAN纤维化进展的重要原因。
- 王会玲张金元
- 关键词：马兜铃酸纤维化肾间质
- 马兜铃酸对肾小管上皮细胞释放ET、Ang-Ⅱ的影响及甘草酸干预作用的实验研究被引量：17
- 2004年
- 为探讨马兜铃酸 (AA)对体外培养的肾小管上皮细胞释放内皮素 (ET)、血管紧张素(Ang II)的影响 ,以及甘草酸的干预作用 ,以不同浓度AA作为刺激物 ,观察AA对体外培养的肾小管上皮细胞系 (LLC PK1)分泌和释放Ang II、ET的影响 ;另各培养体系中分别加入AA (4 0 μg/ml)和不同浓度甘草酸 ,观察甘草酸对AA作用下LLC PK1释放AngII、ET的干预作用。各组培养 2 4h后 ,提取培养上清 ,用放射免疫法测定ET、Ang II的浓度。结果显示 :①AA(4 0、80、16 0 μg/ml)可明显刺激细胞释放ET、Ang II(P <0 0 1)。②甘草酸在 5 0 μg/ml、10 0 μg/ml、2 0 0 μg/ml浓度时可使AA刺激细胞分泌和释放ET、Ang II水平下降 (P <0 0 5或P <0 0 1)。提示 :AA可刺激肾小管上皮细胞分泌和释放ET、Ang II ,此作用可能与AA的细胞毒性损害有关 ;甘草酸可使AA刺激细胞分泌和释放ET、Ang II水平下降 ;甘草酸的保护作用可能与抑制AA作用下细胞分泌和释放ET、Ang II有关。
- 王会玲张金元万晨旭周巍朱丽娟
- 关键词：马兜铃酸肾小管上皮细胞血管紧张素甘草酸
- 甘草酸对慢性马兜铃酸肾病大鼠尿蛋白与尿酶排泄及肾功能的影响被引量：16
- 2006年
- 目的观察甘草酸对慢性AAN肾损害的干预作用。方法将雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、甘草酸组、泼尼松组。正常组灌胃饮用水;实验组按马兜铃酸20mg.kg-1.d-1灌胃关木通浸膏,建立大鼠慢性AAN动物模型,并于2h后按分组灌胃给药:甘草酸25mg.kg-1.d-1,泼尼松3.15mg.kg-1.d-1,模型组灌胃饮用水。各组每周测量体重,于第4、8、12周代谢笼法留取24 h尿液,腹主动脉采血并分离血清,测定相关肾功能指标。结果随着喂饲时间延长,正常组大鼠体重稳定性增长,而马兜铃酸造模各组体重增长缓慢,尿白蛋白、NAG酶排泄量、肌酐/体重水平均明显升高,其中甘草酸组、泼尼松组尿白蛋白和NAG酶排泄量、血肌酐/体重水平均较模型组明显降低。结论甘草酸对马兜铃酸肾损害有一定的保护作用,能降低尿白蛋白和尿ANG酶排泄,改善肾功能。
- 王会玲张金元黄健
- 关键词：马兜铃酸肾病甘草酸
- 关木通浸膏加低盐饮食建立大鼠慢性马兜铃酸肾病模型被引量：1
- 2006年
- 目的探讨用关木通浸膏加低盐饮食建立大鼠慢性马兜铃酸肾病动物模型的方法。方法制备关木通浸膏剂,并测定其中马兜铃酸(AA)含量。实验分为正常对照组、低剂量组(AA5mg·kg-1·d-1)、中剂量组(AA10mg·kg-1·d-1)、高剂量组(AA20mg·kg-1·d-1)。给药前一次性腹腔注射速尿4mg/kg,然后分别灌胃不同浓度的关木通浸膏,给药组给予低盐饮食(钠含量<0.05%);对照组灌胃同体积自来水。连续给药1周,停药1周,隔周给药。各组每周测量体重,每2周代谢笼法留取24h尿液;每组分别于第10d、30d处死大鼠各2只,第56d处死其余大鼠,腹主动脉采血,测定相关肾功能指标;取肾组织进行形态学检查。结果AA用药组尿量均明显增多,体重明显降低,尿蛋白、尿酶排泄量、肌酐等均升高。肾脏病理出现明显的小管间质损伤和典型的早期间质纤维化表现。结论表明成功建立了大鼠慢性AAN模型,且本方法造价低廉,造模时间短,成功率高。
- 王会玲张金元黄健
- 关键词：马兜铃酸肾病关木通动物模型
- 甘草酸二铵对马兜铃酸致肾小管上皮细胞损害保护作用的实验研究被引量：4
- 2004年
- 目的 探讨甘草酸对马兜铃酸 (aristolochic acid,AA)肾损害的保护作用 ,观察甘草酸是否可以减轻 AA对培养的肾小管上皮细胞的损害 ,并初步探讨其可能机制。方法 5 % FCS RPMI- 16 4 0培养肾小管上皮细胞株 (L L C- PK1) ,采用结晶紫染色法观察细胞增殖 ;荧光染色观察活细胞数目 ;酶动力学检查 L DH活性 ,比色法检测 NAG水平 ;透射电镜观察细胞超微细胞结构。结果 1AA4 0、80、16 0μg/ ml可明显抑制细胞增殖 ,结晶紫 OD值显著减少 ,与无 AA对照组比较 P<0 .0 1。 2甘草酸二铵 (diammoniumglycyrrhizinate,DG)在 5、10、2 5 μg/ ml时结晶紫 OD值与无甘草酸对照组比较 P>0 .0 5 ,甘草酸在 5 0 μg/ ml时 P<0 .0 5 ,10 0 μg/ ml、2 0 0μg/ ml时 P<0 .0 1,提示大剂量甘草酸可改善 AA抑制细胞增殖的作用。 3在 AA4 0μg/ ml作用下随着时间延长 ,无甘草酸组的细胞存活数目逐渐减少 ,而甘草酸 (10 0μg/ ml、2 0 0μg/ ml)作用组 ,活细胞数目明显增多 ,提示高浓度甘草酸对细胞损伤有一定的保护作用。4甘草酸在 5、10、2 5 μg/ ml时 ,L DH释放率、NAG酶水平与无甘草酸对照组比较 P>0 .0 5 ,甘草酸在 5 0 μg/ ml时 P<0 .0 5 ,甘草酸在 10 0μg/ ml、2 0 0μg/ ml时 L DH释放率、NAG酶明显减少 。
- 王会玲张金元
- 关键词：肾小管上皮细胞马兜铃酸NAG
