国家自然科学基金(81072113)
- 作品数：5 被引量：40H指数：3
- 相关作者：李红卫杜红延张艳玲陈白虹谭万龙更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 腺病毒滴度不同测定方法比较被引量：19
- 2011年
- 目的将目前测定腺病毒滴度常用的OD260法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法、细胞病变(CPE)法进行比较研究,分析和讨论各种方法的优缺点。方法 4种重组腺病毒(Ad-G-AT2R-EGFP、Ad–CMV-EGFP、Ad-mif-shRNA-EGFP和Ad-CBA-GFP)扩增、纯化后,同时分别用OD260值法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法及CPE法测定病毒滴度,并以壳蛋白免疫法测定结果作为标准,对各种方法所得结果进行比较研究。结果绿色荧光蛋白标记法、CPE法与壳蛋白免疫法同时测定4种腺病毒滴度,其结果无统计学差异(P>0.1)。荧光定量PCR法测定值明显高于壳蛋白免疫法(P<0.05),但与该法测定结果间存在良好的相关性(r=0.965),约为壳蛋白免疫法所测得结果的10倍。OD260法测得结果与壳蛋白免疫法测得结果间则无相关性。结论绿色荧光蛋白标记法与壳蛋白免疫法是测定腺病毒感染性滴度最为快速有效的方法,其结果客观可靠,能真实地反映病毒的实际感染力。荧光定量PCR法测定结果反映的是完整的病毒颗粒数,能够间接反映病毒的感染力,且该方法操作简单,耗时短,同样有较高的实用性。
- 孙鹏宇张艳玲荆玉明张信基张哲欢黎诚耀陈白虹谭万龙李红卫
- 关键词：腺病毒绿色荧光蛋白荧光定量PCR
- 慢病毒载体——重组蛋白高效表达的新契机
- 2013年
- 随着生命科学产业的发展,人们对于重组蛋白的需求越来越大,所以构建一种能够大规模生产重组蛋白的系统成为当前的研究热点。而通过慢病毒(Lentivirus)来提高重组蛋白的产量可能会是一种十分有效的方法。由于其拥有的优良特性,慢病毒系统被广泛关注,已经被应用于许多领域。本文对近年来有关慢病毒系统在外源重组蛋白表达方面的应用进行了综述。将慢病毒应用于外源重组蛋白的表达,将会为外源蛋白的高效表达提供新的契机。
- 周鹏高洋杜红延李红卫
- 关键词：慢病毒慢病毒载体
- p38丝裂原激活蛋白激酶基因重组慢病毒载体的构建及其在建立人前列腺癌稳定细胞株中的应用被引量：3
- 2012年
- 目的构建p38丝裂原激活蛋白激酶基因(MAPK)重组慢病毒载体并建立表达外源性p38基因的人前列腺癌稳定细胞株。方法采用限制性内切酶酶切、T4 DNA连接酶连接等方法,将EGFP/p38融合基因插入慢病毒载体pTYF-EF1α-IRES-EGFP中,构建启动子EF1α调控的EGFP/p38共表达慢病毒载体pTYF-EF1α-EGFP/p38,经酶切鉴定后,利用慢病毒三质粒系统,通过脂质体法转染包装细胞HEK 293T细胞,收集病毒上清后转导人前列腺癌DU145细胞株,经有限稀释法筛选重组EGFP/p38稳定细胞株,用Western blotting检测细胞总p38的表达,用计数法绘制细胞的生长曲线。结果经酶切鉴定,成功构建EGFP/p38重组慢病毒载体,并包装慢病毒,检测病毒悬液的滴度为4.7×106 TU/ml,利用此病毒悬液感染DU145细胞,成功筛选到EGFP/p38稳定表达细胞株,Western blotting显示该细胞株能稳定表达外源性EGFP/p38融合蛋白,这种过表达p38的细胞株的生长速度明显低于对照组。结论成功构建p38 MAPK重组慢病毒载体并建立了表达外源性p38 MAPK基因的稳定细胞株EGFP/p38-DU145,细胞内p38过表达能够抑制DU145细胞的增殖。
- 荆玉明罗杰张艳玲陈三三万沛颜仁和王宏昌陈白虹谭万龙李红卫
- 关键词：P38丝裂原激活蛋白激酶前列腺癌慢病毒
- 慢病毒载体及其在RNA干扰技术中的应用与发展被引量：18
- 2013年
- 慢病毒载体是一类逆转录病毒载体,以其转染效率高,可感染分裂期和非分裂期细胞,可容纳较大的基因片段等优点,现已被作为转移目的基因的理想载体。而RNA干扰技术是近年来迅速发展起来可以特异性地剔除特定基因或者抑制特定基因表达的一种新技术,在病毒感染、心血管疾病、肿瘤等疾病的治疗中被广泛应用。通过慢病毒载体与RNA干扰技术的结合应用,有望为特定基因的功能以及相关疾病的治疗研究提供新的手段和方法。
- 李妍杜红延李红卫
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰
- 血管紧张素II2型受体——肿瘤细胞凋亡诱导因子
- 2012年
- 血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)是由8个氨基酸组成的线性小肽,是肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)的主要效应因子。血管紧张素Ⅱ1型(angiotensinⅡ1receptor,AT1R)和血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensinⅡ 2 receptor,AT2R)分别是AngⅡ作用的靶细胞的表面特异性G蛋白偶联1型和2型受体。AngⅡ通过上述2种受体参与调节血管舒缩、水盐平衡、细胞增殖、炎性反应、细胞凋亡等生物学功能。目前对AT1R的研究较多,在多种组织和器官中AT1R几乎介导了AngⅡ所有已知的生物学功能,但还不十分明确AT2R功能。随着对AngⅡ受体与肿瘤关系认识的深入,AT2R与肿瘤之间的联系也越来越受到重视。近年来AT2R诱导细胞凋亡的作用在肿瘤细胞中也有所发现,这提示AT2R可能作为肿瘤凋亡诱导因子来发挥作用,并有望成为肿瘤治疗的新靶点。
- 段世超费扬黄植杜红延李红卫李明
- 关键词：AT2R肿瘤凋亡
