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质粒介导的RNAi技术对大鼠CⅡTA和MHCⅡ基因表达抑制的检测被引量：1: 2009年; 目的研究应用质粒介导的RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术对大鼠MHCⅡ类分子反式激活因子（MHCclassⅡtransactivator，CⅡTA）和MHCⅡ基因表达的抑制作用。方法根据大鼠CⅡTA基因信息，设计合成3条短发夹状RNA（short hairpin RNA，shRNA）并构建质粒载体，于体外转染大鼠骨髓源树突状细胞（DC）及体内转染大鼠脾脏，采用实时定量RT-PCR技术检测转染后DC和脾脏的CⅡTA及MHCⅡ的mRNA表达变化，流式细胞术检测转染后MHCⅡ蛋白表达变化。结果成功构建shRNA质粒载体，3个shRNA质粒转染组的DC和脾脏转染后的CⅡTA和MHCⅡ的mRNA表达水平及MHCⅡ抗原表达水平均明显减低（P〈0．01），其中第1条shRNA的质粒转染组抑制效果最佳，CⅡTA与MHCⅡ基因表达呈正相关。结论应用CⅡTA靶向shRNA质粒载体在体内外均能显著抑制CⅡTA和MHCⅡ基因表达，为进一步基因治疗研究奠定实验基础。; 刘刚何向辉赵娜朱理玮; 关键词：质粒载体

MHC-Ⅱ类分子反式激活因子基因沉默对大鼠肝移植急性排斥反应的抑制作用被引量：2: 2009年; 目的观察沉默供体肝脏MHC-Ⅱ类分子反式激活因子（CⅡTA）基因表达对大鼠肝移植急性排斥反应的的抑制作用。方法构建针对大鼠CⅡTA基因的短发夹状RNA（shRNA）真核表达载体，建立DA大鼠至Lewis大鼠的肝移植模型，设置生理盐水（NS）组、对照组和shRNA组，n＝16，移植前72h各组供体经门静脉分别注射NS、对照载体和靶向shRNA，移植术后第5天随机取8只受体的移植肝脏检测排斥反应分级，并采用定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测标本中CⅡTA和MHC-Ⅱ的mRNA表达水平，免疫组织化学检测MHC—Ⅱ抗原表达水平，其余受体观察生存期。结果NS组、对照组和shRNA组火鼠肝移植术后平均生存期分别为7．75、7．25和15．75d，shRNA组大鼠生存期明显延长（P〈0．01）；shRNA组大鼠的排斥反应病理分级明显减低（P〈0．01），CⅡTA和MHC-Ⅱ的mRNA表达水平及MHC-Ⅱ抗原表达水平均显著降低（P〈0．01）。结论沉默供体肝脏CⅡTA基因表达可以有效减轻大鼠肝移植急性排斥反应，其机制可能与干预免疫识别有关。; 刘刚逯宁朱理玮; 关键词：肝移植基因沉默急性排斥反应

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国家教育部博士点基金(20050062012)