国家自然科学基金(30872224)
- 作品数：7 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：中山大学附属第三医院中山大学武汉大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 信号肽酶21启动区SNP分布及其与HBV感染转归的关系
- 2013年
- 目的了解中国汉族人信号肽酶复合物(SPC)21基因启动区单核苷酸多态性(SNP)的出现情况,探讨其与HBV感染转归的关系。方法收集40例健康人、40例HBV持续感染者和23例HBV自限性感染者的全血并提取全基因组DNA,以PCR技术扩增SPC21启动区约1 200 bp的区域进行DNA序列分析。结果在各组样本中SPC21启动区的SNPs位点-933(A/C)、-885(G/T)、-779(C/T)和-596(C/T)均存在多态性,而在-1189、-1180和-966位点未见多态性。与GenBank登记情况比较显示,-885(G/T)和-779(C/T)的基因型分布与登记数据类似。生物信息学分析提示,-933(A/C)与-596(C/T)存在连锁关系。各SNP的基因型、等位基因和单体型的分布频率在健康人、持续感染者和HBV自限性感染者中的差异无统计学意义。结论在汉族人群中,SPC21启动区存在SNPs多态性,且有自身特点,但其基因型、等位基因和单体型分布与HBV感染转归无明显相关性。
- 韩宗萍时红朱银洪彭晓谋
- 关键词：乙型肝炎E抗原单核苷酸多态性
- 乙型肝炎病毒对原蛋白转化酶Furin表达的影响
- 2013年
- 目的观察HBV对原蛋白转化酶Furin表达的影响，明确HBV在宿主细胞内适应生存过程中宿主细胞内Furin表达的变化，为今后探索提高抗病毒治疗疗效提供理论基础。方法采用荧光定量PCR、Westemblot及免疫细胞化学技术比较慢性乙型肝炎肝组织和正常肝组织之间，以及稳定表达HBV复制的HepG2．2．15细胞株和前体细胞HepG2之间的Furin表达变化，从mRNA、蛋白水平、组织水平观察HBV对肝细胞内Furin表达的影响。Furin mRNA及蛋白表达结果根据3次独立试验的倍数均数和标准差进行t检验。结果在慢性乙型肝炎肝组织中Furin表达下调，在HepG2．2．15细胞上，Furin mRNA（与HepG2细胞比较为下调50．1％土4．8％对比1）及蛋白表达水平均被下调，尸值均〈0．05。结论HBV通过下调宿主细胞内Furin可能有利于病毒自身复制。
- 陈燕顾琳时红彭晓谋
- furin基因P1启动子区-229C/T多态性与肝硬化患者肝细胞功能的关系被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨furin基因启动子活性对肝硬化患者肝细胞功能的影响。方法:收集180例乙型肝炎肝硬化患者的血样和临床资料,采用竞争分化聚合酶链反应技术对furinP1启动子区单核苷酸多态性(SNP-229C/T)进行基因分型,并以其为活性指标分析启动子活性与肝脏血清酶学、胆红素、白蛋白和凝血酶原等水平的关系。结果:全部患者中,等位基因C的频率为75.3%(271/360),等位基因T的频率为24.7%(89/360),基因型CC、CT和TT的频率分别为62.2%(112/180)、26.1%(47/180)和11.7%(21/180)。SNP-229C/T基因分型与主要血清酶学、胆红素、白蛋白和凝血酶原等水平无关,而与碱性磷酸酶和γ-谷氨酰转移酶有关。结论:furin基因启动子的活性对肝细胞主要功能无影响,提示furin作为HBV感染的治疗新靶点具有一定的可行性。
- 雷瑞祥时红程杰朱银洪彭晓谋
- 关键词：肝硬化单核苷酸多态性
- 原蛋白转化酶在转化生长因子β_1抑制HBV复制效应中的作用被引量：4
- 2010年
- 目的:探讨原蛋白转化酶(PCs)在转化生长因子β1(TGFβ1)抑制HBV复制效应中的作用。方法:常规培养的HepG2.2.15细胞加2μg/L或5μg/L重组TGFβ1或/和20μmol/L PC抑制剂作用18h,收集细胞提取细胞总RNA和HBV衣壳DNA,采用荧光定量PCR技术检测PC mRNA和HBV DNA含量。结果:HepG2.2.15细胞的7种PCs均有不同程度的表达。加用重组TGFβ1后除PC5/6下调外,其余PCs均显著上调。尽管PC1/3和PC2上调最显著,但结合基础表达水平的分析显示furin和PACE4在TGFβ1处理前后均为优势表达PCs。在HepG2.2.15细胞上,进一步使用PC抑制剂可消除TGFβ1抑制HBV复制的效应。结论:上调PCs mRNA表达是TGFβ1抑制HBV复制的重要中间环节。此结果对进一步探讨TGFβ1有效干预HBV复制具有积极意义。
- 雷瑞祥陈燕谢霞彭晓谋
- 关键词：细胞因子类转化生长因子Β乙型
- HepG2.2.15细胞系中HBV复制相关抑制因素的变化
- 2011年
- 目的:研究HBV对其自身复制相关抑制因素的影响,为今后探索提高抗病毒治疗的疗效提供基础。方法:采用实时荧光定量RT-PCR技术检测原蛋白转化酶(PCs)、肝细胞核因子(HNF)3β和转化生长因子(TGF)β1等HBV复制相关抑制因素的mRNA表达,采用Western印迹技术检测部分PCs的蛋白表达,通过比较模型细胞HepG2.2.15和其前体细胞HepG2的表达差别来判断HBV对其自身复制相关抑制因素的影响。结果:HepG2.2.15和HepG2细胞均相对高表达furin和PACE4,但HepG2细胞还高表达PC1/2。与HepG2细胞相比,HepG2.2.15细胞的PC1/3和PC7/8在mRNA水平显著被下调(均P<0.05),且PC1/3在蛋白水平的表达也显著减少。HepG2.2.15细胞的HNF3β和TGFβ1的mRNA表达水平也发生了显著改变,分别增加到5.22倍和降低到0.35倍。结论:HBV的存在对其自身复制相关抑制因素可产生显著影响。下调部分PCs和TGFβ1表达可能有利于HBV自身复制,但上调HNF3β的意义值得深入研究。
- 谢霞陈燕顾琳雷瑞祥彭晓谋
- 关键词：肝炎病毒乙型
- 乙型肝炎病毒核心蛋白原蛋白转化酶切割假定产物的体外研究被引量：1
- 2010年
- 目的 通过体外试验探讨furin切割核心蛋白的可能性,并通过重组载体表达,研究其假定产物在HepG2细胞内的分布特点. 方法 重组HBV核心蛋白,并将其在不同温度和时间条件下（4℃消化16 h、30℃消化1h和30℃消化3h）接受furin切割,产物采用Western blot分析.构建HBV核心蛋白furin切割假定产物的真核表达载体,并以完整核心蛋白表达载体作为对照,转染HepG2细胞,获得稳定表达细胞株.使用核心蛋白与假定产物共同区的单克隆抗体进行间接免疫荧光染色,用共聚焦显微镜观察其细胞内分布. 结果 HBV核心蛋白在多种条件下均被furin切断,其主要产物相对分子质量约为15 000,与预期相符,且30℃切割1 h的效果最好.真核表达的核心抗原假定切割产物能与核心蛋白单克隆抗体结合,且在细胞内的分布与完整核心蛋白类似,主要以颗粒形式分布在细胞质. 结论 HBV核心蛋白在体外能被furin切割,其主要产物与完整核心蛋白有类似的免疫原性和相同的细胞内分布,提示furin或其家族成员参与了HBV复制调节,其切割产物对机体抗病毒免疫可能存在深远影响,值得深入研究.
- 程杰时红雷瑞祥彭晓谋
- 关键词：病毒核心蛋白质类
- 肿瘤坏死因子-α抑制乙型肝炎病毒复制的作用与其上调原蛋白转化酶的关系被引量：1
- 2014年
- 目的探讨TNF-α对原蛋白转化酶（PC）表达的影响，以及与其抑制HBV复制作用的关系。方法常规培养的HepG2．2．15细胞加20μg／L重组TNF-α或（和）20μmol／LPC抑制剂（DEC），作用18h，收集细胞，提取细胞总RNA和衣壳相关HBVDNA，采用荧光定量PCR技术检测PCmRNA和HBVDNA。计量资料比较采用t检验。结果以空白对照组的表达水平为基数（1），20μg／L重组TNF-α作用18h后，HepG2．2．15细胞内7种PCmRNA均显著上调（PCI／3、PC2、furin、PC4、PC5／6、PACE4和PC7／8mRNA的表达水平分别为3．3±0．7、79．3±3．3、77．5±1．3、19．2士3．1、1．3±0．1、1．4±0．2、274．8±7．1，均P〈0．05）。与空白对照组相比，20μg／L重组TNF-α作用18h后，衣壳相关HBVDNA水平明显降低（0．21：1，t=8．79，P=0．002），20μmol／LDEC显著升高衣壳相关HBVDNA水平（3．84：1，t=7．67，P=0．004），而DEC和TNF-α联合处理组的衣壳相关HBVDNA水平显著高于TNF-α处理组（0．31：021，t=10．49，P=0．007）。结论TNF-α上调PCmRNA表达是其抑制HBV复制的重要中间环节。
- 陈燕时红顾琳彭晓谋
- 关键词：肿瘤坏死因子Α病毒复制
