河南省科技攻关计划(112101110100)
- 作品数：8 被引量：19H指数：2
- 相关作者：王亚宾陈丽颖胡慧冯艳红李晓博更多>>
- 相关机构：河南农业大学河南省动物性食品安全重点实验室更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 共培养时大肠杆菌对粪肠球菌毒力基因表达的影响被引量：1
- 2016年
- 为探索大肠杆菌O157∶H7对粪肠球菌N9分离株生长特性的影响及15种毒力基因在不同生长时期的应答情况,本研究将粪肠球菌N9、大肠杆菌O157∶H7单独培养和混合培养后分别计数菌株菌落总数,绘制生长曲线,根据生长曲线4个特定的时间点,分别提取其mRNA,反转录后利用荧光定量PCR方法检测15种毒力基因的转录水平。结果显示:混合培养与单独培养相比,粪肠球菌最高菌体浓度增加4 200多倍;两菌混合培养时,大肠杆菌整体促进了粪肠球菌15种毒力基因的转录,仅psr和atn在4个生长期中一直比单独培养时高,ebpA、ebpB、ebpR、rnjB、frsA、frsB除在稳定前期较单独培养时表达量低,其余3个时期均较高;而GelE和SprE除在对数中期和稳定期,其他时期均较单独培养时表达量低。稳定期ebpB和frsA表达量分别较单独培养高154.56倍和144.37倍,其次是对数后期ebpC,其表达量较单独培养时高110.35倍。实验结果表明:共培养时大肠杆菌能明显促进肠球菌的生长及其相关毒力基因的转录。
- 冯艳红彭新然王超群刘玲玲张留君王亚宾陈丽颖
- 关键词：毒力基因
- 双重PCR检测生鲜猪肉中大肠杆菌O157∶H7和沙门菌方法的建立与应用被引量：2
- 2015年
- 目的建立生鲜猪肉中大肠杆菌和沙门菌的双重PCR检测方法,并初步调查生鲜猪肉中大肠杆菌和沙门菌的污染情况。方法以大肠杆菌O157∶H7 rfb E基因和沙门菌inv A基因为靶基因设计引物。通过对单个基因PCR和多重基因PCR扩增进行特异性、敏感性试验以及优化反应体系,建立快速检测大肠杆菌和沙门菌的双重PCR法。在郑州市不同地区的综合性超市、冷鲜肉专卖店和农贸市场随机抽检144份生鲜猪肉样品,分别进行了PCR检测和常规微生物学检验。结果建立的双重PCR方法特异性好,抗干扰能力强,灵敏度可达到10 pg/μl。在144份样品中检测出大肠杆菌的样品数为10份,检出率为6.94%;检出沙门菌的样品数为13份,检出率为9.03%;大肠杆菌和沙门菌同时检出的有2份,占总样品的1.39%。结论初步建立了同步、简便、快速、灵敏地检测生鲜猪肉中大肠杆菌、沙门菌的双重PCR方法;生鲜猪肉中存在致病菌的污染问题,将威胁到食品安全和人体健康,不容忽视。
- 张秀方武二丽刘肖张伟强胡慧邵刘云王亚宾陈丽颖
- 关键词：沙门菌双重PCR食源性致病菌食品安全
- 猪源粪肠球菌Ace蛋白间接ELISA方法的建立与应用被引量：3
- 2014年
- 根据GenBank已发表粪肠球菌Ace基因(AF260879)的核苷酸序列设计1对引物,通过PCR扩增Ace基因保守序列A片段部分序列,将其克隆到pET-32a(+)裁体中,构建了原核表达载体pET-32a(+)-Ace,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,成功表达并纯化了重组蛋白;以此重组蛋白作为抗原建立了检测粪肠球菌Ace抗体的间接ELISA方法。经反复试验,确定该间接ELISA的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1mg/L,被检血清稀释度为1∶800,1%BSA为封闭液,血清和二抗的作用时间均为60min,底物TMB反应时间为15min,反应的阳性判定值为0.126。交叉试验、批内重复和批间重复试验证明,所建立的间接ELISA方法具有特异性高、重复性好的特点,可用于粪肠球菌Ace蛋白血清抗体的检测。
- 陈丽颖张祥李晓博李英英邵刘云胡慧王亚宾
- 关键词：粪肠球菌ELISA
- BHI和SRFE培养条件对粪肠球菌15种因子表达的影响
- 2015年
- 通过了解粪肠球菌在BHI和SRFE培养基中生长不同时期时其15种因子的表达情况,为粪肠球菌致病机制的研究奠定基础。将粪肠球菌N10株在BHI和SRFE培养基中培养,分别提取其在2种培养基生长至对数中期、对数后期和稳定期时的总RNA,并进行SYBR Green I实时荧光定量PCR,从而测定15种因子的表达情况。结果显示,15种因子中的13种因子在SRFE培养基中表达量较高,与菌毛生成相关因子ebp ABC和rnj B以及与生物膜形成相关因子srt A、atn和psr在SRFE培养基中的表达量都高于其在BHI培养基中的表达量(P<0.01),这说明SRFE培养基可能不仅有利于菌毛和生物膜的形成,而且也有利于其他毒力相关因子的形成,从而增加了粪肠球菌的致病性。
- 张留君王超群胡慧陈丽颖冯艳红林红莉焦会普王亚宾
- 关键词：粪肠球菌BHI基因表达实时荧光定量PCR
- 利用16S rDNA检测奶牛乳房炎5种病原菌PCR方法的建立及应用被引量：9
- 2014年
- 为建立快速检测引起奶牛乳房炎5种病原菌的方法,参照GenBank发表的产气荚膜梭菌、乳酸乳球菌、变形杆菌、绿脓杆菌、肠球菌序列,分别根据其16SrDNA保守序列区间设计5对引物,进行PCR扩增。结果显示:这5对引物均能针对自身菌株扩增出目的条带,且具有较强的特异性;产气荚膜梭菌、乳酸乳球菌、变形杆菌、绿脓杆菌、肠球菌菌液DNA的最低检测量分别为3.40、0.89、0.91、3.30、3.60ng/μL;对临床采集的疑似患有乳房炎的奶牛所产的牛奶样品进行检测,结果显示,与传统的细菌分离鉴定相比,新建立的方法具有灵敏、高效的特性。
- 李栋梁寇亚楠宋月魏战勇王亚宾
- 关键词：奶牛乳房炎乳酸乳球菌变形杆菌
- 不同肠球菌基因组DNA提取方法对PCR鉴定的影响被引量：2
- 2012年
- 为研究肠球菌基因组DNA的不同提取方法对16S rRNA基因序列PCR、种属多重PCR、RAPD PCR等肠球菌鉴定结果的影响,分别采用6种基因组DNA提取方法(水煮法1、水煮法2、常规酚/氯仿抽提法、chelex-100法1、chelex-100法2和试剂盒法),对1株肠球菌标准菌株ATCC29212基因组DNA进行提取,以这些分别提取的DNA为模板在相同的扩增条件下进行PCR检测.结果表明,在16S rRNA基因序列PCR和种属多重PCR检测中以水煮法1进行肠球菌DNA的提取最适宜,而试剂盒法在RAPD PCR检测中效果最佳.
- 张祥李晓博谷素美段志刚王亚宾胡慧陈丽颖
- 关键词：肠球菌DNA提取PCR
- 不同培养基对粪肠球菌基因表达及黏附细胞能力的影响被引量：1
- 2016年
- 为探讨粪肠球菌(E.faecalis)N10菌株在血清肉汤培养基和TSB培养基中不同生长时期15种毒力基因mRNA的表达情况及对IPEC-J2细胞黏附能力的影响,采用分光光度计测量N10菌株在血清肉汤培养基和TSB培养基中的OD值,绘制生长曲线,确定生长时期(对数中期、对数后期和稳定期),用RT-PCR方法检测N10菌株中不同基因不同生长时期的mRNA转录水平,然后将不同培养基不同时期的细菌黏附IPEC-J2细胞,平板计数细菌黏附数量。结果显示,血清肉汤培养基培养的细菌浓度低于TSB培养基培养的细菌浓度(P<0.01)。在血清肉汤培养基中,仅有fsrC、sprE、gelE和ant基因的最高表达量低于在TSB培养基中的,其他基因的最高表达量均高于在TSB培养基中的。黏附试验中对数中期细菌的黏附数量最多,血清肉汤培养基培养的细菌黏附数量比TSB培养基培养的细菌黏附数量少(P>0.05),但比不加血清的肉汤培养基培养的细菌黏附数量多(P<0.01)。可见,血清肉汤培养基有利于菌毛相关基因的表达,肉汤培养基中加入血清可促进细菌黏附。
- 冯艳红赵娣张留君刘玲玲陈丽颖王亚宾
- 关键词：粪肠球菌毒力基因RT-PCR
- 生鲜猪肉中致病性球菌的双重PCR检测方法的建立与应用被引量：1
- 2014年
- 以金黄色葡萄球菌clfa基因和溶血性链球菌sdy基因为靶基因设计引物.通过对单个基因PCR和多重基因PCR扩增进行特异性、敏感性试验以及优化反应体系,建立了快速检测溶血性链球菌和金黄色葡萄球菌的双重PCR方法.在郑州市不同地区随机抽检126份生鲜猪肉样品,分别进行了双重PCR检测和常规微生物学检验.结果表明,建立的双重PCR方法特异性好,抗干扰能力强,灵敏度可达到102ng·L-1.在126个样品中检测出溶血性链球菌的样品数为7份,检出率为5.55%;检出金黄色葡萄球菌阳性的样品数为8份,检出率为6.35%.
- 李英英邵刘云刘肖张秀方胡慧王亚宾陈丽颖
- 关键词：金黄色葡萄球菌溶血性链球菌猪肉双重PCR
