国家自然科学基金(39770863)
- 作品数：5 被引量：15H指数：2
- 相关作者：曹德良郑春华杨向东周胜华万腊香更多>>
- 相关机构：南华大学中南大学湘雅二医院耶鲁大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金湖南省教育厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 转ARL-1基因HepG2细胞耐药相关基因的筛选被引量：7
- 2003年
- 背景与目的:醛糖还原酶相似基因1(aldose-reductaselikegene-1,ARL-1)在原发性肝癌中高表达,与肝癌细胞对化疗药物耐药有关。本研究拟建立转染ARL-1的人肝癌细胞株,观察转染ARL-1的HepG2细胞对含醛基抗肿瘤药物耐药性的改变,利用基因表达谱芯片筛选HepG2细胞转染ARL-1后差异表达耐药相关基因。方法:采用脂质体转染PBK/ARL-1质粒到HepG2细胞,获得高表达ARL-1的单克隆细胞株;RT-PCR、流式免疫荧光和免疫组化鉴定高表达ARL-1的HepG2细胞;应用MTT法和细胞凋亡分析研究HepG2细胞和转染ARL-1的HepG2细胞对含醛基抗肿瘤药物阿霉素(ADM)和丝裂霉素(MMC)的耐药性,以5-氟尿嘧啶(5-FU)(不含醛基)为对照;将Cy3和Cy5两种荧光染料分别标记两种细胞的cDNA探针,与人肝癌基因表达谱芯片进行杂交与扫描,观察转染ARL-1基因HepG2与对照组HepG2细胞在基因表达谱方面的差异,筛选耐药相关基因,并运用RT-PCR和Westernblot对部分差异表达相关基因进行初步证实。结果:与对照组HepG2细胞相比,转染ARL-1基因HepG2细胞高表达ARL-1蛋白,明显增强对含醛基的抗肿瘤药物如ADM、MMC的耐药性,分别提高2.6倍和3.47倍,用5-FU处理两组细胞,则未发现有明显的耐药差异(ADM组t=6.39,P<0.05;MMC组t=30.06,P<0.01;5-FU组t=0.684,P>0.05);芯片扫描结?
- 杨向东唐大年王建曹德良
- 关键词：HEPG2相关基因耐药性癌细胞
- 人类ARL-1重组蛋白特异性抗体的制备及鉴定
- 2003年
- 目的 制备ARL -1重组蛋白及其特异性抗体。方法 利用基因重组技术构建PQE -ARL -1原核表达载体 ,在M15大肠杆菌中进行表达 ,制备ARL -1重组蛋白 ,再将此蛋白免疫健康新西兰兔 ,制备ARL -1特异性抗体。结果 ARL -1在大肠杆菌中获得高效表达 ,经Ni+-NTA (次氮基三乙酸 )琼脂柱纯化 ,获得纯蛋白 ,将此蛋白免疫健康新西兰兔 ,制备出抗人ARL-1特异性抗体 ,经环状沉淀试验及双琼脂扩散试验检测出抗体效价达 1∶2 0 0 0 0。结论 人类ARL -1重组蛋白及其特异性抗体的制备 ,为进一步研究ARL -1在肝癌早期诊断中的作用 。
- 郑春华周胜华万腊香曹德良
- 关键词：肝癌重组蛋白特异性抗体
- PQE-ARL-1重组表达质粒的构建及ARL-1蛋白的制备与纯化被引量：2
- 2000年
- 目的：进一步了解人醛糖还原酶相似基因（aldose reductase like-1，ARL-1）的功能及其生物学活性，为制备特异性的ARL-1抗体作准备。方法：用基因重组技术构建PQE-ARL-1原核表达载体，在M15大肠杆菌中进行表达，然后利用Ni+-NTA琼脂柱纯化ARL-1蛋白。 结果：经酶切鉴定，PQE-30表达载体上已插入了ARL-1基因，PQE-ARL-1在大肠杆菌中表达产物人重组ARL-1 蛋白经纯化后进行SDS-PAGE电泳，成一条蛋白带，分子量为37.7×103，表达产物约占全菌蛋白的25%，定量测得ARL-1蛋白的浓度为100mg/L。 结论： PQE-ARL-1重组质粒的构建及ARL-1蛋白的制备，为深入研究ARL-1的功能及制备特异性的ARL－1抗体奠定了坚实的基础。
- 郑春华万腊香吴孟津曹德良杨永宗
- 关键词：基因重组质粒肝癌
- 高表达醛糖还原酶相似基因的HepG2单克隆细胞模型的建立被引量：2
- 2002年
- 醛糖还原酶相似基因(aldose reductase-like gene,ARL-1)表达的增高与肝癌抗药性关系的研究是近年来发展的一个新课题.
- 郑春华周胜华万腊香吴孟津杨永宗曹德良金俊飞
- 关键词：肝癌耐药细胞模型
- 蛋白酶体抑制剂MG132诱导HepG2细胞凋亡及其机制研究被引量：5
- 2005年
- 目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌细胞HepG2的致凋亡作用,并从泛素蛋白酶体途径(UPP)相关基因E1、E2和E3及天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)表达初步探讨MG132的致细胞凋亡机制。方法采用多个浓度(2、5、10μmol·L-1)的蛋白酶体抑制剂MG132处理HepG2细胞;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测UPP相关基因E1、E2、E3和凋亡相关基因Caspase3的转录水平;免疫细胞化学检测Caspase3蛋白表达。结果对照组HepG2细胞凋亡率低于5%,在2、5和10μmol·L-1MG132作用下,细胞凋亡率分别为42.9%、66.1%、72.8%,MG132诱导HepG2细胞凋亡具有量效关系;RTPCR检测发现细胞内UPP相关基因E1、E2、E3mRNA表达下降,而凋亡相关基因Caspase3mRNA表达上调;免疫组化检测Caspase3蛋白表达水平升高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制UPP活性,使细胞内Caspase3蛋白降解减少,同时上调Caspase3基因转录,促进细胞凋亡。
- 何慧郭芳屈顺林任重刘俊文杨向东
- 关键词：泛素-蛋白酶体途径蛋白酶体抑制剂肝癌细胞凋亡CASPASE-3
