国家自然科学基金(39770866)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 相关作者：朱平万忠海刘晓明江禹何畅更多>>
- 相关机构：解放军军需大学白求恩医科大学长春职工医科大学更多>>
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- 绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白基因重组与鉴定被引量：2
- 2002年
- 为了获得高表达量重组绿脓杆菌外毒素 A(PEA)受体结合区蛋白 ,以用作免疫原 ,从含有目的片段 (10 0 0 bp)的 p ET- 2 0 (b) +B1 0 质粒切下目的片段 ,以正确阅读框架插入含有 T7lac启动子的 p ET- 2 8c(+) DNA中 ,构建了p ET- 2 8c(+) B1 0 质粒。用该质粒转化大肠杆菌 BL2 1 (DE3 )、BL2 1 (DE3 ) p L y S,经 IPTG诱导 ,BL2 1 (DE3 ) p L y S能高效表达目的蛋白。 SDS- PAGE、Western blot分析证实 ,该蛋白即是所需的蛋白 ,该重组蛋白占菌体总蛋白的 5 8%。
- 万忠海王景林江禹刘晓明何畅朱平
- 关键词：绿脓杆菌外毒素A基因重组
- 重组PEA受体结合区蛋白的免疫活性
- 2004年
- 为了观察重组绿脓杆菌外毒素 A(PEA)受体结合区蛋白在不同动物体内的免疫效果 ,将该蛋白纯化后免疫了小鼠、家兔、山羊等动物。对小鼠进行了攻毒实验 ,通过 EL ISA方法检测了家兔、山羊血清中抗体的消长规律。结果对小鼠的保护情况为 :最后 1次免疫后 14 d小鼠对 3倍 L D50 的 PEA攻毒保护率为 10 0 % ,2 1d保护率为 5 0 % ,2 8d后无保护效果。家兔和山羊免疫后 7～ 14 d达到峰值 ,2 1d后逐渐降低 ,2 8～ 35
- 万忠海金爱军谭建华江禹刘晓明朱平
- 关键词：免疫活性免疫效果
- 重组绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白动物免疫保护试验被引量：4
- 2001年
- 将绿脓杆菌外毒素 A( PEA)受体结合区基因重组质粒 p ET-2 8( c) +B1 0 转入大肠杆菌 BL2 1 ( DE3)plys,诱导表达出的重组 PEA受体结合区蛋白包涵体经脲素洗涤后 ,Sephacryl-2 0 0分子筛层析 ,DEAE-Sepharose FF离子交换层析获得纯度为 95.8%重组蛋白包涵体。将该蛋白作免疫原免疫小鼠后 ,用 PEA进行不同时间攻毒 ,观察到最佳保护时间为 1 4 d左右 ;
- 万忠海何畅江禹甄勇刘晓明朱平
- 关键词：绿脓杆菌外毒素A免疫受体
- 抗PEA受体结合区单克隆抗体的制备及鉴定
- 2007年
- 目的：探讨绿脓杆菌外毒素A（PEA）中和性单克隆抗体在预防和治疗绿脓杆菌感染中的免疫保护作用。方法：以重组绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白免疫Balb／c小鼠，将免疫鼠脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，用ELISA方法筛选细胞培养上清，采用有限稀释法对阳性孔进行克隆，3次克隆后获得4株能稳定分泌抗PEA单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1CA，1134，2E12和3C6。结果：细胞培养上清ELISA效价为4000～8000，腹水ELISA效价可达25600～51200，其中3C6抗体在细胞上的中和试验显示具有较高的中和效价。其亲和常数为8．93×10^8。结论：获得的单克隆抗体可在抗烧伤绿脓杆菌感染中发挥重要作用。
- 万忠海岳玉环杜付彬谭建华朱平
- 关键词：绿脓杆菌外毒素AELISA单克隆抗体
