卫生部科技专项基金(WKZ-2000-1-15)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 相关作者：余正平陈孝平张启瑜蒋飞照朱冠保更多>>
- 相关机构：华中科技大学温州医学院附属第一医院更多>>
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- 利用重构pc-MDR1质粒快速诱导肝癌细胞耐药
- 2004年
- 目的 :从裸鼠原位耐药肿瘤组织中进行MDR1cDNA的全克隆和pc MDR1重组质粒的构建 ,并转染HepG2细胞 ,快速诱导其耐药 ,并筛选其抗性克隆。方法 :设计单酶切位点引物 ,利用长距离逆转录PCR(LongRT PCR)技术 ,由HepG2耐药细胞扩增MDR1cDNA ,约 3.8kb大小。将其插入至真核表达载体pcDNA3.0质粒中构建pc MDR1诱导质粒 ,使其能够在真核细胞中表达p gp蛋白。转染HepG2细胞 ,并用G4 1 8筛选出转染的细胞。结果 :成功地扩增出 3.8kb左右的MDR1cDNA片段 ,经酶切鉴定、RT PCR扩增特异片段和序列测序结果显示质粒构建初步成功 ,用G4 1 8筛选细胞耐药抗性克隆的时间约为 1 4d。结论 :从耐药肿瘤组织中进行MDR1cDNA的全克隆和pc MDR1诱导质粒的构建成功快速诱导了肝癌细胞发生耐药 。
- 韩宇陈孝平蒋飞照余正平朱冠保张启瑜
- 关键词：多药耐药基因基因克隆质粒构建转染
