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乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测的临床应用被引量：3: 2011年; HBV共价闭合状DNA（covalently dosed circular DNA，oocDNA）是HBV复制的初始模板。近年来，随着以选择性实时荧光PCR技术为代表的各类cccDNA检测技术日渐成熟，以及临床医生对cccDNA检测临床意义认识的不断提高，cccDNA检测已从基础研究逐渐进入到临床应用。; 赵克开缪晓辉; 关键词：乙型抗药性肝衰竭

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNAYMDD位点基因序列自然变异的检测与分析被引量：1: 2012年; HBV共价闭合环状DNA（covalentlyclosedcircularDNA，cccDNA）是病毒转录和复制的原始模板，并能长期稳定地存在于被感染的肝细胞核内。目前，抗病毒治疗难以完全将其清除，寻找细胞核内早期出现的耐药变异cccDNA，可为初始联合抗病毒治疗策略提供关键证据，从而降低发生耐药的可能。本研究应用套式PCR结合直接测序法检测85例未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者肝内HBVcccDNA的YMDD位点，并对YMDD变异株进行克隆分析，了解变异株所占的比例。并用同样方法检测血清及肝组织HBV松弛环状DNA（relaxedcircularDNA，rcDNA）的YMDD位点，探讨其与cccDNA变异的关系。; 汪菁陈玉徐文胜缪晓辉; 关键词：乙型肝炎病毒自然变异 HBVCCCDNA 基因序列 YMDD变异株联合抗病毒治疗

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA与松弛环状DNA对核苷（酸）类药物耐药变异的比较: 2012年; 目的了解肝细胞内HBV共价闭合环状DNA（HBV cccDNA）核苷（酸）类药物耐药变异的情况，并比较其与松弛环状DNA（rcDNA）耐药变异的异同。方法取40例慢性HBV感染肝移植患者的部分肝组织，采用十二烷基硫酸钠一蛋白质沉淀法结合DNA提取试剂盒分离提取肝内的HBV cccDNA和rcDNA。将抽提产物用不降解质粒的ATP依赖DNA酶酶切纯化后，用跨HBV基因组双链缺口并涵盖常见核苷类耐药位点（rt169～rt250）的引物行单轮PCR或套式PCR选择性扩增cccDNA。另用不跨双缺口的引物PCR扩增肝组织内的HBV rcDNA和患者肝移植术前的血清HBVrcDNA。用直接测序法对上述扩增产物进行基因测序并分析核苷（酸）类药物耐药位点的检出情况。结果40例患者中，31例肝组织内检测到HBVcccDNA，35例肝组织检测到HBVrcDNA，21例肝移植术前血清中检测到HBVrcDNA。测序结果显示，2例肝组织内cccl）NA、rcDNA和血清rcDNA均检测到rtM204I变异；有2例患者肝内cccDNA、rcDNA分别存在rtM204I、rtQ215H变异，而血清rcDNA未检测到相应变异；3例血清中分别存在rtM204V、rtM204V、rtV173L＋rtL180M＋rtM204V变异，而肝内cccDNA和rcDNA未检测到相应变异。结论慢性HBV感染者肝细胞内cccDNA可出现核苷（酸）类药物耐药变异，且肝组织内的cccDNA、rcDNA耐药变异株与血清中的rcDNA耐药变异株不完全一致。; 陈建山徐文胜赵克开倪武缪晓辉; 关键词：肝炎病毒乙型核苷酸类

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国家自然科学基金(30972599)

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