黑龙江省自然科学基金(D201208)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 腺病毒adv-hmepe质粒构建与转染表达优化
- 2016年
- 目的构建人细胞外基质磷酸糖蛋白(hmepe)基因的重组腺病毒p Yr-ads-4-h MEPE真核表达载体,并优化其转染条件。方法构建腺病毒包装质粒p Yr-ads-4-h MEPE,在HEK293细胞中包装形成腺病毒颗粒,转染前列腺上皮细胞株RWPE1,同时转染空质粒作为对照细胞株。设置腺病毒重组质粒梯度检测最佳转染浓度,免疫印迹检测转染细胞株中MEPE蛋白表达水平,确定转染效果。共聚焦显微镜检测不同条件下的转化率。结果经酶切与测序验证,p Yr-ads-4-h MEPE重组质粒构建成功,免疫印迹分析验证转染r Ad-4-h MEPE的RWPE1细胞株中MEPE蛋白表达水平上调,而转染相应空载体的细胞株中MEPE蛋白的表达水平与野生型细胞株一致,说明腺病毒质粒构建成功可在真核细胞表达,共聚焦检测分析质粒浓度对转染效率可信度较好。结论成功构建hmepe真核表达载体,重组腺病毒转染RWPE1细胞最佳融合比例1.25∶1 000,即质粒量为1.25μl加入1 ml培养液中转染效率最佳。
- 张慧明魏巍刘爽
- 关键词：腺病毒转染
- 地鳖虫醇提物对肿瘤细胞侵袭与凋亡的作用机制被引量：3
- 2020年
- 目的探究地鳖虫醇提物(ESWE)对前列腺癌细胞的迁移、侵袭、凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养前列腺癌细胞,通过划痕实验测定其对细胞运动能力的影响,transwell小室做细胞迁移侵袭能力测定,吖啶橙溴乙锭(AO/EB)染色观察其对前列腺癌细胞凋亡的影响,Western印迹(WB)检测整合素(ITG)β1/ITG连接激酶(ILK)/纤维型肌动蛋白(F-actin)通路相关基因的表达。结果通过毒性试验得出ESWE对前列腺癌细胞的IC50值为6.265 mg/ml;随ESWE浓度增加,细胞运动能力、迁移与侵袭能力逐渐减弱;ITGβ1、ILK mRNA表达量呈递减趋势(P<0.05);半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3增加表达,促进凋亡。骨架蛋白F-actin重构受阻并未影响F-actin mRNA的表达。结论ESWE通过抑制ITGβ1的表达从而调节F-actin重构,抑制PC3细胞迁移与侵袭,并上调其下游caspase3蛋白表达促进细胞凋亡。
- 张慧明富尧白淑菊刘爽吕冬云
- 关键词：PC3细胞
- 骨形态发生蛋白与细胞外基质磷酸化糖蛋白相关性研究进展
- 2015年
- 骨形态发生蛋白(BMP)是转化生长因子β超家族成员,细胞外基质磷酸化糖蛋白(MEPE)是一种细胞外基质的非胶原磷酸化糖蛋白,两者都是成骨信号通路中的重要蛋白。近年来发现MEPE表达水平受BMP的调节,并在磷酸盐代谢调节、成骨细胞增殖分化中发挥重要作用,同时与肿瘤细胞的骨转移有着密切的关联。在此,我们简要综述近年来BMP与MEPE的关系以及它们在肿瘤细胞骨转移方面的作用。
- 张慧明富尧刘爽
- 关键词：骨形态发生蛋白WNT信号通路
