浙江出入境检验检疫局科研基金(ZK200610)
- 作品数：2 被引量：13H指数：2
- 相关作者：李光才邱海洪鲁兴萌张弘更多>>
- 相关机构：浙江大学浙江中医药大学更多>>
- 发文基金：浙江省重大科技专项基金浙江出入境检验检疫局科研基金国家质检总局科技计划项目更多>>
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- 不同DNA抽提方法对普通PCR和实时荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫的影响被引量：9
- 2011年
- 为了优选快速、灵敏、特异的家蚕微孢子虫Nosema bombycis分子检测方法和DNA抽提方法,本文通过对家蚕微孢子虫TaqMan探针荧光定量PCR检测方法和SYBRGreen荧光定量PCR检测方法的建立以及反应体系优化,并与普通PCR方法进行比较;再采用4种不同DNA抽提方法分别对PCR和实时荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫悬浮液的效果评价。结果显示:不经过DNA抽提,直接将家蚕微孢子虫发芽液进行PCR反应的效果优于其他方法,检测灵敏度由高到低依次为直接法、酚/氯仿抽提法、动物组织DNA试剂盒抽提法和植物组织DNA试剂盒抽提法;TaqMan探针法检测家蚕微孢子虫发芽液的灵敏度和SYBRGreen法相近,达到微孢子102个/mL,两者均优于普通PCR方法。实验表明,直接采用发芽液结合荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫最为简便、快速、灵敏。该研究结果将有助于提高家蚕微粒子病监控技术和检疫能力,对家蚕微粒子病的检疫和防治具有积极意义。
- 何永强吴姗鲁兴萌邱海洪帅江冰张晓峰王素华徐国群李光才董强
- 关键词：家蚕微孢子虫荧光定量PCR家蚕微粒子病检疫
- 家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法及诊断试剂盒被引量：9
- 2011年
- 基于为蚕种生产与流通贸易提供快速、灵敏、准确检测家蚕微孢子虫的方法,以家蚕微孢子虫小亚单位核糖体RNA基因66 bp片段作为靶标,设计特异性引物和TaqMan探针,用构建的重组质粒制备标准品进行荧光定量PCR扩增,通过优化PCR反应体系,测定线性范围,评价方法的特异性、灵敏度和重复性,成功构建了家蚕微孢子虫的荧光定量PCR检测方法,并研制出诊断试剂盒。该方法的检测线性范围为1×108～1×102拷贝/mL的7个线性梯度,检测家蚕微孢子虫的敏感度达1×102拷贝/mL,特异性高,3次重复性检测应用试验的批内变异系数为3.6%～7.2%,批间变异系数为5.2%～7.8%。结果表明,建立的家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法具有准确、灵敏、快速、特异性强的特点。
- 何永强吴姗鲁兴萌张弘邱海洪帅江冰王素华张晓峰徐国群李光才董强
- 关键词：家蚕微孢子虫荧光定量PCR诊断试剂盒
