辽宁省教育厅高等学校科学研究项目(L2010579)
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 相关作者：安春丽王雪莲宋阳卢岩王佐周更多>>
- 相关机构：中国医科大学盘锦市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：辽宁省教育厅高等学校科学研究项目国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- ELISPOT检测人乳头瘤病毒特异性的记忆T细胞被引量：1
- 2011年
- 应用ELISPOT方法检测人乳头瘤病毒感染后自发清除者外周血中抗原特异性的记忆T细胞。收集人乳头瘤病毒(HPV)感染后自发清除者外周血(病毒清除后74个月),分离外周血单个核细胞(peripheralblood mononuclear cells,PBMC)。体外应用已鉴定的表位肽刺激PBMC,10 d后计数细胞,去除表位肽,继续培养。第11天,ELISPOT方法检测PBMC中HPV抗原特异性的记忆T细胞。PBMC经表位肽刺激10 d后,细胞数量有明显增加,由最初的4.1×105增加为4.2×106。第11天,细胞数量增加为4.65×106,为抗原刺激前细胞数的11.3倍。ELISPOT结果显示,PBMC中的记忆T细胞活化后,能够识别抗原递呈细胞递呈的抗原肽,并分泌IFN-γ。此HPV自发清除者外周血中抗原特异性的记忆T细胞的频数为0.007%。人乳头瘤病毒(HPV)感染后自发清除者外周血存在抗原特异性记忆T细胞,抗原肽可激活记忆T细胞,使之数量增加,分泌IFN-γ。ELISPOT可用于检测外周血中HPV特异性的记忆T细胞。
- 王雪莲卢岩安春丽
- 关键词：ELISPOT人乳头瘤病毒记忆T细胞
- 静脉给予外源性神经干细胞聚集在APP小鼠脑内老年斑周围
- 2011年
- 目的研究静脉给予的外源性神经干细胞在淀粉样前体蛋白(APP)小鼠脑内的分布及可能起到的作用。方法采用14d小鼠胚胎的神经干细胞,经体外扩增、分化后,静脉注射到阿尔茨海默病动物模型——APP转基因小鼠体内,1周后通过磁共振成像(MRI)及激光共聚焦显微镜观察APP小鼠脑内外源性移植神经干细胞的分布。结果外源性标记的神经干细胞可通过血-脑屏障进入APP小鼠脑内,聚集在β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积周围,部分外源性细胞内出现Aβ信号。结论外源性神经干细胞可能在病变区神经元修复或Aβ清除方面起到一定的作用。
- 宋阳赵红邓欣薛一雪
- 关键词：静脉注射
- 痘苗病毒转移载体pSC65-HPV18 E6、E7的构建及鉴定
- 2012年
- 目的构建及鉴定含有人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18型E6、E7基因的痘苗病毒转移载体pSC65-HPV18 E6、E7。方法以HPV18型全基因质粒为模板,PCR扩增HPV18 E6、E7基因,克隆到痘苗病毒转移载体pSC65中,获得重组转移载体pSC65-HPV18 E6、E7。重组转移载体转化大肠杆菌,挑取孤立菌落PCR初步筛选。选择阳性菌落提取质粒,酶切及测序鉴定。结果阳性菌落质粒酶切结果显示有340bp、500bp大小的目的基因片段,表明为重组转移载体。测序结果证实重组转移载体包含HPV18 E6、E7基因。结论成功构建包含HPV18 E6、E7基因的痘苗病毒转移载体pSC65-HPV18 E6、E7,研究结果为进一步构建包含HPV18 E6、E7基因的重组痘苗病毒奠定基础。
- 王雪莲张晓娇赵峰安春丽
- 关键词：人乳头瘤病毒痘苗病毒
- EBV转化的人乳头瘤病毒感染者B淋巴母细胞系的建立及应用被引量：3
- 2010年
- 建立EB病毒(EBV)转化的B淋巴母细胞系(LCL),应用此细胞系作为抗原递呈细胞筛选抗原特异性的T细胞克隆。收集人乳头瘤病毒(HPV)感染者外周血20份,分离外周血单个核细胞(PBMC),利用Pan T细胞试剂盒去除PBMC中的T细胞,获得non-T淋巴细胞,EBV病毒转化non-T淋巴细胞。应用转化的LCL细胞作为抗原递呈细胞,ELISPOT筛选可能的HPV抗原特异性的T细胞克隆。成功建立18个LCLs,建株成功率为90%。转化成功的LCL细胞体积增大,聚集成团状或簇状。建株失败的两份标本,用于转化的non-T淋巴细胞数少于2×106。应用LCL细胞作为抗原递呈细胞筛选出64个HPV抗原特异性的T细胞克隆。成功建立LCLs,此细胞系细胞可作为体外研究HPV特异性免疫反应的刺激细胞。
- 王雪莲王佐周安春丽宋阳
- 关键词：人乳头瘤病毒T细胞克隆
- shRNA抑制宫颈癌Hela细胞株HPV18 E6、E7基因表达的研究
- 2012年
- 应用短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)表达载体抑制宫颈癌Hela细胞株HPV18 E6、E7基因的表达。应用已鉴定的shRNA表达载体pHPV1、pHPV2转染Hela细胞,G418筛选阳性细胞,建立稳定转染细胞株;倒置荧光显微镜检测转染情况;提取细胞内总RNA,RT-PCR方法检测HPV18 E6、E7 mRNA;WesternBlot检测HPV18 E6、E7蛋白表达的变化;采用灰度分析软件对PCR扩增条带与蛋白质条带进行灰度分析。pHPV1实验组细胞内HPV18 E6、E7 mRNA含量分别为阴性对照组的31%、38%,E6、E7蛋白分别为阴性对照组的37%、31%;pHPV2实验组细胞内HPV18 E6、E7 mRNA含量分别为阴性对照组的54%、77%,E6、E7蛋白分别为阴性对照组的52%、83%。pHPV1、pHPV2表达载体能抑制Hela细胞HPV18 E6、E7的表达,针对外显子区434-452的pHPV1抑制作用更强。
- 王雪莲卢岩韦苇杨雪安春丽
- 关键词：人乳头瘤病毒18型E6基因E7基因
