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上海市自然科学基金(07ZR14123)
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兔羊膜成体干细胞培养及体外定向诱导神经细胞分化
2013年
目的观察体外分离、培养的兔羊膜成体干细胞(ADsc)定向诱导神经细胞的分化结果。方法新西兰雌兔羊膜分离、培养ADSC。实时定量聚合酶链反应(PCR)检测羊膜ADSC的纤连蛋白(Fibronectin)、巢蛋白(Nestin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA的表达水平。单克隆形成实验证实羊膜ADSC是否具有自我复制能力。培养成功的ADSC中加入神经分化诱导培养基诱导神经细胞分化。诱导分化5d后,免疫荧光染色检测伊微管蛋白(tubulin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果培养的ADSC在24h后逐渐从羊膜组织中移行出;72h可见明显的多角形细胞富集在羊膜组织周边;120h后多角形细胞致密地分布于羊膜四周。分裂后的子代细胞形态同父代细胞。单克隆形成实验结果证实羊膜ADSC具有自我复制能力。实时定量PCR检测结果显示,羊膜ADSC的Nestin、Vimentin、FibronectinmRNA分别是脾脏细胞同种分子表达量的15.79、1.91、7.65倍,两者差异有统计学意义(Z=-5.243、-3.972、-2.524,P〈0.05)。免疫荧光染色结果显示,β-tubulin在大部分细胞的胞质中表达;GFAP在部分细胞的细胞质中表达。结论羊膜ADSC具有自我复制能力,在合适条件下能够分化成神经元和神经胶质细胞。
徐蔚
王震
曲申
刘思维
王培军
关键词:
成体干细胞
细胞分化
细胞培养技术
羊膜
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