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杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系的建立及应用被引量：1: 2018年; 为研究杂交三倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus的形成机制,探寻其产业化生产的有效途径,通过对GISH的多项试验参数进行优化,建立杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系,并对天然四倍体泥鳅(4n=100)与大鳞副泥鳅Paramisgurnus dabryanus(2n=48)正、反杂交后代进行GISH分析。结果表明:杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系中,探针DNA在温度为105℃、持续时间为2 min时,片段化后探针DNA片段长度为500~1000 bp;封阻DNA在温度为110℃、持续时间为10 min时,片段长度为100~500bp;标记后的探针DNA与片段化后的封阻DNA混合比(P/B)在1∶25和1∶50时均可以得到较好的杂交信号;以大鳞副泥鳅全基因组DNA为探针DNA、天然四倍体泥鳅全基因组DNA为封阻DNA,与二者正、反交后代进行基因组原位杂交试验,结果显示,来源于亲本大鳞副泥鳅24条染色体在着丝点处均有杂交信号,无杂交信号染色体50条,来源于亲本泥鳅。该研究结果不仅为杂交三倍体泥鳅后代的鉴定提供了最直观的证据,也为中国天然四倍体泥鳅是含有四套染色体组的遗传四倍体并能产生2n的配子提供了分子细胞遗传学基础数据,对泥鳅三倍体育种研究具有一定的指导意义。; 周贺庄子昕查荒源梁雨婷徐其征张蕊林忠乔李雅娟; 关键词：大鳞副泥鳅

泥鳅杂交三倍体和二倍体胚胎发育的比较研究被引量：3: 2014年; 对杂交三倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus(2n♀×4n♂,DT)和二倍体泥鳅(2n♀×2n♂,DD)的胚胎发育进行观察,详细记录了其胚胎发育的形态特征和发育特点。结果表明:DT受精卵在水温(25±1)℃的条件下,整个胚胎发育过程约需36 h 19 min;对照组DD受精卵在水温(25±1)℃的条件下,整个胚胎发育过程约需35 h 57 min;DT(DD)的胚胎发育包括卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、器官形成期和孵化出膜期6个时期,DT(DD)受精卵约40 min(40 min)后进入卵裂期,3 h 45 min(3 h 40min)后进入囊胚期,6 h 30 min(6 h 24 min)后进入原肠期,9 h 32 min(9 h 20 min)后进入神经胚期,15 h 45 min(15 h 30 min)后进入器官形成期,36 h 19 min(35 h 57 min)后出膜。研究表明,DT的胚胎发育时序及形态特征与DD基本相似,说明DT具有正常的胚胎发育过程,本研究可为杂交三倍体泥鳅苗种培育提供生物学依据。; 高养春李雅娟姜志强李霞王伟刘博王玉生庞义猛; 关键词：泥鳅二倍体胚胎发育

杂交三倍体泥鳅染色体C带及rDNA序列的FISH定位被引量：1: 2018年; 对杂交三倍体泥鳅(4n♀×2n♂)的胚胎染色体进行了C带及染色体荧光原位杂交(FISH)分析,首次探讨了杂交三倍体泥鳅C带特征,为准确鉴别染色体提供依据,研究了核糖体5.8S+28S r DNA在杂交三倍体泥鳅胚胎中期染色体上的数目和位置。C带结果表明,杂交三倍体泥鳅的染色体C带包括臂端C带和着丝粒C带,没有发现臂间C带。M染色体只有1号染色体既有臂端C带又有着丝粒C带,但臂端C带均比着丝粒C带大,信号也比着丝粒的强;而其他M染色体及SM染色体、T染色体只有着丝粒C带。FISH分析显示,核糖体5.8S+28S r DNA清楚地定位在杂交三倍体泥鳅中期染色体中部着丝粒染色体(M)的端部区域,在杂交三倍体泥鳅中期染色体上可以检测到三簇杂交信号。该结果从分子细胞遗传学层面进一步证实了杂交三倍体泥鳅是含有三套染色体组的遗传三倍体。; 周贺徐其征高养春张蕊李霞庄子昕梁雨婷李雅娟; 关键词：泥鳅 C带 RDNA FISH

德国镜鲤和不同倍性泥鳅银染核型的比较研究被引量：3: 2012年; 采用PHA体内二次注射法及快速银染法对德国镜鲤和不同倍性的泥鳅进行银染核型的比较研究。结果表明,德国镜鲤中期分裂相及间期核中呈现出Ag-NORs的数目为1～2个,含有2个Ag-NORs频率最高,分别为80%和56%。二倍体泥鳅中期分裂相及间期核中呈现出Ag-NORs的数目为1～2个,含有2个Ag-NORs频率最高,分别为72%和60%。四倍体泥鳅中期分裂相及间期核中呈现出Ag-NORs的数目为1～4个,中期分裂相中含有3个Ag-NORs,频率最高为36%,间期核中含有2个Ag-NORs,频率最高为40%。德国镜鲤2n=100,核型组成为30m+26sm+30st+14t,NF=156。NOR的染色体在核型中位置和NORs在染色体上的位置是:sm组第8号染色体的短臂末端。二倍体和四倍体泥鳅NOR的染色体在核型中位置和NORs在染色体上的位置均是:m组第1号染色体的短臂末端。研究结果证实德国镜鲤与中国鲤鱼一样,是多倍化后经历二倍化过程演变而来,是二倍化的四倍体,即染色体数目为2n=100。四倍体泥鳅进行加倍后未发生二倍化或在二倍过程中,是遗传四倍体,染色体数目为4n=100。; 李雅娟高敏钱聪曹顶臣孙效文; 关键词：德国镜鲤 AG-NORS 核型

冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体被引量：7: 2014年; 为探索诱导鱼类雄核发育单倍体的新方法及形成机制，以大鳞副泥鳅为研究对象，无须卵子失活，仅用冷休克诱导雄核发育单倍体，并对其后代的早期胚胎发育、染色体数目、分裂胚细胞学观察等进行了系统分析。早期胚胎发育结果显示，0℃与3℃处理组的孵化率分别为0．83％和57．42％，二者之间孵化率差异显著（P〈0．05），0℃和3℃处理组均表现出单倍体综合征。染色体倍性鉴定结果显示，0℃处理组染色体分布为18～27，单倍体率为81．40％，3℃处理组染色体分布为20-30，单倍体率为68．97％。分裂胚细胞学观察结果显示，3℃处理组受精后60min，卵核和第二极体位于胚表面，有一同释放迹象。结果表明，对大鳞副泥鳅受精卵进行3℃冷休克处理60min，可以成功诱导雄核发育单倍体，研究推测冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育的细胞学机制是雌核和第二极体一同释放。; 王玉生李雅娟于长宁姜志强李霞王伟刘博高养春李佳奇; 关键词：大鳞副泥鳅雄核发育单倍体

3种鱼类的单个胚胎染色体标本制备方法被引量：1: 2013年; [目的]为建立1种准确、快捷、高效的鱼类染色体制备方法。[方法]以泥鳅、红鳍东方鲀和德国镜鲤的单个胚胎作为材料,通过秋水仙素、低渗、卡诺固定等操作制备染色体标本。[结果]3种鱼类均获得大量形态清晰、长度适中、分散良好的中期分裂相。[结论]以鱼类肌肉效应期为材料可成功制备染色体标本,为鱼类染色体标本制备提供了新方法。; 王玉生李雅娟李佳奇徐雯高养春刘博; 关键词：泥鳅红鳍东方鲀德国镜鲤染色体

不同倍性泥鳅杂交后代染色体数目组成的研究被引量：16: 2012年; 以泥鳅Misgurnus anguillicaudatus为研究对象,通过染色体计数法,对二倍体泥鳅与天然四倍体泥鳅正交(2n×4n)、反交(4n×2n)杂交后代的早期胚胎、6月龄及12月龄阶段的染色体数目进行了统计分析。结果表明:早期胚胎正、反杂交后代的染色体数目为67～81、67～82,在良好的中期分裂相(100、100个)中,染色体数目为75的整三倍体众数百分比最高(22%,20%),此外还有大量染色体数目<75的亚三倍体(37%,51%)和染色体数目>75的超三倍体(41%,29%);6月龄正、反杂交后代的染色体数目为68～79、66～80,在良好的中期分裂相(58、63个)中,整三倍体(3n=75)众数百分比最高(26%,41%),此外还有大量亚三倍体(34%,49%)和超三倍体(40%,10%);12月龄正、反杂交后代的染色体数目为68～82、69～83,在良好的中期分裂相(71、50个)中,三倍体(3n=75)众数百分比最高(28%,54%),此外还有大量亚三倍体(48%,20%)和超三倍体(24%,26%)。研究表明,二倍体泥鳅与天然四倍体泥鳅正、反杂交后代均出现大量能存活的非整三倍体个体,并随养殖时间的延长,非整三倍体率呈下降趋势。; 李雅娟钱聪印杰高敏高养春刘博王玉生; 关键词：泥鳅染色体数目

不同倍性泥鳅鳍细胞培养及染色体标本制备方法的研究被引量：4: 2013年; 以天然二倍体、杂交三倍体(4n♀×2n♂)和天然四倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus的鳍组织为材料,对短期培养的消毒方法、秋水仙素的浓度(1.0、1.5、2.0μg/mL)与处理时间(2、3、4 h)和低渗处理时间(30、40、50 min)等细胞培养技术,及染色体标本制备方法进行了研究。结果表明:选择100 g/L的碘伏溶液杀菌效果良好,对于细胞生长影响较小,尤以处理15 min时的效果最明显,细胞迁出迅速;在终止培养前3 h加入秋水仙素至终浓度为1.5μg/mL,天然二倍体、杂交三倍体和天然四倍体泥鳅鳍细胞中期分裂相染色体众数最高,分别为93.33%、90.00%、70.00%;25℃下低渗处理40 min时,可以获得大量图像清晰、长度适中、分散良好、染色体数目完整的染色体中期分裂相。本研究中初步建立了以鳍组织培养法作为材料来源快速制备不同倍性泥鳅染色体标本的方法。; 刘博李雅娟李霞隋燚高养春王玉生马辰; 关键词：泥鳅二倍体染色体

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辽宁省科学技术基金(201102019)

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