国家自然科学基金(30872257)
- 作品数：8 被引量：14H指数：2
- 相关作者：鲍朗黄丹丹李伟黄强杨晓玲更多>>
- 相关机构：四川大学川北医学院四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌毒力分泌基因Rv3872重组卡介苗的构建及表达
- 2010年
- 目的:构建结核分枝杆菌Rv3872的原核重组表达质粒pET-3872并对其进行表达及鉴定。构建表达结核分枝杆菌抗原蛋白Rv3872即PE35的重组卡介苗。方法:应用PCR技术扩增Rv3872基因,定向克隆入pET32a(+)并转化E.coli BL21(DE3)菌株,测序后用IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western blot对目的蛋白进行检测及鉴定。用纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。构建重组穿梭表达质粒pMV-3872,将重组质粒电穿孔进入卡介苗,对重组卡介苗进行诱导表达用SDS-PAGE和Western blot检测和鉴定目的蛋白。结果:表达融合蛋白的pET-3872质粒构建成功,重组蛋白经Western blot检测出特异性阳性信号。重组卡介苗BCG-3872构建成功,热诱导表达后经SDS-PAGE和Western blot,在培养上清中检测到目的蛋白。结论:成功构建了重组质粒pET32a(+),并在大肠杆菌中表达了PE35蛋白,有利于进一步研究Rv3872基因功能。本研究还对表达结核分枝杆菌蛋白PE35的重组卡介苗进行了鉴定,为进一步研究该重组卡介苗的免疫功能奠定了基础。
- 时欣欣鲍朗邱云青郭思
- 关键词：结核分枝杆菌重组卡介苗
- 人粒-巨噬细胞集落刺激因子和结核杆菌特异性抗原CFP10嵌合基因重组卡介苗的构建及鉴定
- 2010年
- 目的构建能共同表达人粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和结核分枝杆菌培养滤液蛋白10(CFP10)的重组卡介苗(recombinant BCG,rBCG)。方法运用分子克隆技术,通过SOE法(重叠延伸,Gene splicing by overlap exten-sion),扩增GMCSF-CFP10嵌合基因,将该基因定向克隆到穿梭表达质粒pMV361中,构建重组pMV GMCSF-CFP10质粒。用电穿孔法将重组质粒导入BCG菌构建rBCG,经热诱导后对rBCG表达产物作SDS-PAGE及免疫印迹分析。结果重组质粒pMVGMCSF-CFP10经PCR、酶切及测序证实构建成功,并在BCG中经热诱导成功表达了具有GMCSF-CFP10的嵌合蛋白。结论成功构建能表达GMCSF-CFP10蛋白的重组BCG,为发展新型结核病疫苗奠定基础。
- 杨晓玲鲍朗邓仪昊
- 关键词：CFP10卡介苗穿梭质粒
- 结核病免疫应答中自噬现象的分子机制和意义被引量：4
- 2012年
- 越来越多的证据表明，自噬是结核免疫反应的重要组成部分。自噬可以杀灭结核分枝杆菌、调节促炎细胞因子的分泌、增加抗原递呈功能。自噬与其他抗菌途径如维生素D3、炎性体、泛素系统存在协同作用。另一方面，结核分枝杆菌可以调控巨噬细胞的自噬。目前，自噬已成为临床重要的诊疗靶点。其能诱导自噬的药物，可以作为佐剂治疗耐药性结核；能有效诱导自噬的疫苗，可能提供更好的免疫保护作用。
- 黄丹丹鲍朗
- 关键词：自噬结核分枝杆菌
- 结核分枝杆菌毒力分泌系统Rv3871基因的分子克隆及蛋白表达研究被引量：1
- 2008年
- 目的为探索参与结核分枝杆菌(MTB)毒力分泌系统相关基因的分子功能,对MTB H37Rv株编码Rv3871蛋白基因进行克隆、表达及鉴定分析。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,用PCR扩增Rv3871基因片段,并重组到原核表达载体pET32a(+)中,转化E.coliBL21(DE3)菌株,用IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western blot对目的蛋白进行检测分析。结果阳性重组质粒经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切得到1 776和5 900 bp两条片段,与预期大小一致。重组质粒测序,与NCBI上Rv3871编码序列比对完全一致,且输入片段读码框与表达载体读码框相吻合。SDS-PAGE检测表达蛋白分子质量单位为84 ku;Western blot检测出特异性阳性信号。结论本研究成功构建了结核杆菌毒力分泌系统重要相关基因Rv3871的原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达Rv3871蛋白,为进一步探讨该基因在MTB毒力分泌中的功能奠定了基础。
- 秦紫芳邱云青黄毕高蕾鲍朗
- 关键词：蛋白表达
- 掺锶硫酸钙复合骨修复材料修复松质骨骨缺损研究被引量：2
- 2013年
- 目的初步验证掺锶硫酸钙复合骨修复材料修复松质骨骨缺损的能力。方法建立直径5mm、深度12mm的新西兰兔股骨髁包容性骨缺损模型,取含锶量为0.5%的掺锶硫酸钙骨缺损进行修复。术后4、8、12w连续X线摄片,观察骨缺损修复情况。术后12w处死动物,取动物双股骨下段,进行股骨远端缺损区压凹实验。术后8、12w取标本行HE染色,光镜观察材料及周围组织的变化和植入材料内新骨的形成情况。采用ImageplusCCD系统对植骨区的成骨情况进行定量分析。结果 X线显示掺锶硫酸钙组术后12w时原骨缺损区域已完全被新骨填充,其密度与正常骨组织密度接近;α-半水硫酸钙组术后12w时骨缺损区内部仍可见少量植入材料的碎片。术后12w掺锶硫酸钙组和α-半水硫酸钙组股骨髁骨缺损区压缩强度均高于空白对照组(P=0.000,P=0.000);两组间比较掺锶硫酸钙组压缩强度高于α-半水硫酸钙组(P=0.007);掺锶硫酸钙组压缩强度与正常对照组相比差异无统计学意义(P=1.000)。术后8、12w掺锶硫酸钙组和α-半水硫酸钙组新骨形成率均明显高于空白对照组(P=0.000),且掺锶硫酸钙组新骨形成率均明显高于α-半水硫酸钙组(P=0.030,P=0.043)。结论现阶段制备的0.5%掺锶硫酸钙材料在松质骨包容性骨缺损区内有明显的促成骨作用,在12w内比基质材料α-半水硫酸钙能更好的修复骨缺损。
- 李伟黄强黄丹丹
- 关键词：锶盐硫酸钙骨缺损生物材料
- 结核CFP10/ESAT6抗原和人GM-CSF基因重组卡介苗的构建与免疫原性研究
- ＜正＞目的:构建共表达人GM-CSF和结核杆菌特异性抗原CFP10与ESAT6的重组卡介苗（recombinant BCG,rBCG）,分析rBCG引起的免疫反应。方法:扩增GMCSF-CFP10-ESAT6（GCE）融...
- 杨晓玲邓仪昊夏志扬黄丹丹鲍朗
- 文献传递
- 结核杆菌基因组RD1区毒力蛋白分泌相关基因Rv3871的克隆、表达及生物信息学分析被引量：4
- 2009年
- 目的对结核分枝杆菌H37Rv毒株RD1毒力分泌系统Rv3871基因进行克隆和蛋白表达,运用生物信息学分析该基因在结核杆菌毒力蛋白分泌过程中的作用。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,以PCR扩增出完整的Rv3871基因,将其插入原核表达载体pET32a(+),对其核苷酸序列进行测定。利用生物信息学软件对结核杆菌Rv3871进行结构功能分析并与多种分枝杆菌进行同源性比对。结果经分子克隆的Rv3871酶切片段与预期大小符合,基因序列与Genbank报道一致,SDS-PAGE检测到相对分子质量为84000的特异性表达蛋白,生物信息学分析发现两个FtsK/SpoEⅢ样结构域,同源性比对则发现在致病性分枝杆菌与卡介苗等非致病菌Rv3971基因对应区域的结构完整程度有较为显著的差别。结论本研究通过对结核分枝杆菌RV3871基因进行分子克隆,特异蛋白表达和基因序列测定,提供了该基因的结构功能特征,并通过生物信息学与同源性对比分析,发现Rv3871基因在致病和非致病分枝杆菌毒力分泌作用中的结构和功能差异,为结核病发病机制阐明及其治疗药靶的筛选提供理论和实验依据。
- 鲍一歌秦紫芳鲍朗
- 关键词：结核分枝杆菌生物信息学
- 掺锶硫酸钙骨修复材料体外细胞相容性研究被引量：2
- 2013年
- 目的验证掺锶硫酸钙复合骨修复材料的细胞毒性和细胞相容性。方法用α-半水硫酸钙(α-CSH)和氯化锶(SrCl2)采用混合共结晶法制备6组不同掺锶量的掺锶硫酸钙骨修复材料,用MTT法来检测细胞增殖情况,对各组材料进行细胞碱性磷酸酶活性测定。结果 MTT实验显示,细胞在各组掺锶硫酸钙材料浸提液中均正常增殖,培养7d时掺锶材料各组OD值均高于α-CSH组(P<0.01);碱性磷酸酶活性测定结果显示,成骨细胞碱性磷酸酶活性在掺锶材料浸提液中增加(P<0.05),且当掺锶量为0.5%时最明显。共培养结果显示,细胞能在各组掺锶硫酸钙材料上紧密贴附生长,共培养4d后,掺锶0.3%和0.5%材料上的细胞多于α-CSH组,但差异无统计学意义(P=0.061,P=0.057)。结论掺锶硫酸钙骨修复材料无细胞毒性且有较好的细胞相容性,成骨样细胞能在其上正常地贴附生长。
- 李伟黄强黄丹丹
- 关键词：锶盐硫酸钙生物材料细胞培养
- 结核CFP10/ESAT6抗原和人GM-CSF基因重组卡介苗的构建与免疫原性研究被引量：1
- 2010年
- 杨晓玲邓仪昊夏志扬黄丹丹鲍朗
- 关键词：免疫原性研究基因重组重组穿梭质粒定向克隆
