湖北省自然科学基金(2008CDB127)
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 相关作者：郑建伟薛新波吴在德李雁易继林更多>>
- 相关机构：华中科技大学武汉大学同济大学附属东方医院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 腺病毒介导的黑色素瘤分化相关基因-7抑制内质网应激蛋白表达阻滞MHCC-97H血管形成及转移机制的研究被引量：1
- 2013年
- 目的 探讨黑色素瘤分化相关基因（MDA）-7抑制内质网应激蛋白表达,以及阻滞MHCC-97H血管形成的机制.方法 以人肝癌细胞株MHCC-97H为实验对象,使用噻唑蓝（MTT）法和流式细胞仪比较Ad.MDA-7及对照组、缺氧组及正氧组的细胞生存率,比较缺氧环境中,MHCC-97H凋亡率的变化.荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测MDA-7、细胞外信号调节激酶（ERK）、E-钙黏蛋白（E-cad）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶（MMP）-9 mRNA的变化.Western blot检测MDA-7、蛋白激酶样内质网激酶（PERK）、E-cad、VEGF、MMP-9蛋白表达的变化.结果 MTT表明缺氧条件下,正氧组正常肝细胞LO2生长抑制率分别为（12.60±4.85）％,（7.80±0.61）％,Ad.MDA-7对正常肝细胞LO2无生长抑制作用.肝癌细胞株MHCC-97H生长抑制率缺氧组,正氧组分别为（5.10±0.09）％、（4.80±0.05）％.缺氧环境中,ERK、VEGF和MMP-9空白组及空白对照组mRNA表达量为[（18.042 ±5.915）/（17.512 ±6.354）、（22.654±5.976）/（22.587 ±7.741）、（22.654±2.789）/（22.587±8.551）]高于正氧组[（10.987±2.514）/（12.347±4.385）、（15.321 ±4.262）/（15.634 ±8.521）、（15.321 ±6.384）/（15.634±4.423）].缺氧环境中,E-cad mRNA空白组及空白对照组[（6.427 ±0.512）/（6.042±1.972）]表达低于正氧组[（10.987±2.514）/（12.347 ±4.385）],而Ad.MDA-7干预后,ERK、VEGF和MMP-9 mRNA缺氧组及正氧组表达量降低[（4.117±1.843）/（5.683±0.794）、（5.371 ±0.541）/（4.209 ±0.348）、（5.371 ±0.941）/（4.209±0.265）],E-cad表达量明显增加[（19.573 ±5.971）/（21.309±8.544）].PERK、VEGF和MMP-9蛋白表达与mRNA一致.结论 缺氧环境中,肝癌细胞株MHCC-97H生长抑制率与正氧环境中差异无统计学意义,MDA-7基因明显抑制PERK表达,抑制肝癌细胞血管生成作用.同时,MDA-7基因增强E-cad表达,协同其作用,抑制肿瘤细胞转移.
- 郑建伟张晓梅李雁秦仁义申铭吴在德薛新波
- 关键词：白细胞介素-24血管形成
- 携带mda-7基因的复制缺陷性腺病毒联合阿霉素致肝癌细胞HepG2凋亡机制的研究被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨黑色素瘤分化相关基因-7/白介素-24（MDA-7/IL-24）基因联合阿霉素杀伤肝癌细胞HepG2,并逆转HepG2多药耐药的机制.方法 以人肝癌细胞系HepG2为实验对象,使用MTT法和流式细胞仪比较Ad.mda-7联合阿霉素处理组与阿霉素组、Ad.mda-7组对肝癌细胞HepG2的作用差异.阐明MDA-7/IL-24对多药耐药的逆转作用的机制.实时定量PCR检测MDR-1、STAT-3、BCL-2、BAXmRNA的变化.Western blot检测gp-170、stat3、P-stat-3、PKB、bcl-2、hax蛋白的表达的变化.结果 低浓度的Ad.mda-7联合正常肝细胞半抑制浓度浓度的阿霉素（1.5 mg/L）使得细胞抑制率从阿霉素组的17.46%上升到79.5%,生长抑制逆转4.55倍（P＜0.05）.联合化疗组MDR-1mRNA相对表达量从16.49±0.11下降至5.48±0.05.STAT-3 mRNA相对表达量从13.17±0.08上升至21.57±0.11.BCL-2及BAX表达与其他实验组相比较差异均有显著统计学意义（P＜0.05）.联合实验组P-170蛋白的表达量较其他组明显降低,PKB蛋白表达量明显降低,磷酸化stat-3蛋白的表达量增加.结论 Ad.mda-7具有逆转肝癌细胞HepG2多药耐药的作用.其在下调MDR-1mRNA表达的同时,通过抑制PKB蛋白和活化STAT-3信号通路的表达降低促进肝癌细胞凋亡.
- 郑建伟薛新波王从俊张晓梅陈堃李雁于愿肖朝文彭志海易继林吴在德
- 关键词：肝细胞癌阿霉素多药耐药凋亡
- 多柔比星联合羟基喜树碱杀伤肝癌细胞HepG2机制研究被引量：2
- 2010年
- 目的探讨羟基喜树碱(HCPT)联合多柔比星抑制肝细胞癌转移机制。方法以人肝癌细胞系HepG2及正常肝细胞LO2为实验对象,使用噻唑蓝(MTT)法比较多柔比星处理组、HCPT组及多柔比星联合HCPT组对肝癌细胞HepG2和正常肝细胞LO2的作用差异。荧光定量PCR检测E-selectin、VEGF、MMP-9、Bcl-2及Bax mRNA的变化。Westernblot检测E-selectin和MMP-9蛋白表达的变化。结果 MTT实验表明作用48 h后,1.5 mg.L-1多柔比星对肝癌细胞HepG2的细胞抑制率为16.58%,2 mg.L-1HCPT为39.92%,而HCPT(2 mg.L-1)联合多柔比星(1,1.5 mg.L-1)组分别为66.61%和74.47%。Real-time PCR检测表明E-selectin mRNA相对表达量多柔比星组为(52.13±0.58),联合组为(93.41±8.43)、MMP-9 mRNA相对表达量多柔比星组为(26.49±0.11),联合组为(6.48±0.05)。联合组Bcl-2及Bax表达与其他实验组比较均差异有显著性(P<0.05)。结论 HCPT杀伤肝癌细胞HepG2的作用优于多柔比星,HCPT联合多柔比星抑制肝癌细胞生长的效应更加明显。HCPT联合多柔比星可以明显降低HCPT及多柔比星的药物浓度,减少这些药物对肝脏的细胞毒作用。
- 吕小红张晓梅郑建伟王从俊薛新波
- 关键词：多柔比星羟基喜树碱肝细胞癌化学治疗
- 生长抑素受体-2基因逆转上皮-间充质转化抑制肝癌细胞侵袭转移机制的研究被引量：6
- 2013年
- 目的 观察生长抑素受体-2（SSTR2）基因对肝癌细胞株MHCC-97H侵袭转移及上皮-间充质转化（EMT）特性的影响.方法 构建慢病毒3FLAG-puromycin-LV及SSTR2-LV,转染肝癌细胞株MHCC-97H,噻唑蓝（MTT）、免疫荧光检测转染效率.采用Transwell侵袭实验和迁移实验分别检测未转染细胞（空白对照组）、转染3FLAG-puromycin-LV细胞（阴性对照组）和转染SSTR2-LV细胞（实验组）侵袭转移能力的强弱.镜下观察转染前后细胞形态的变化,免疫荧光检测转染前后细胞上皮表型蛋白和间质表型蛋白的定位和表达,实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测转染后细胞SSTR2的表达,Westem blot检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）蛋白的表达.结果 SSTR2-LV可以有效转染肝癌细胞株MHCC-97H,稳定表达SSTtR2的mRNA和蛋白.转染SSTR2-LV的肝癌细胞株MHCC-97H较空白对照组和阴性对照组侵袭迁移能力明显受到抑制（P＜0.05）.镜下观察肝癌细胞株MHCC-97H转染SSTR2-LV后,由成纤维细胞样、排列分散,转变为细胞排列紧密如铺路石.免疫荧光染色结果可见肝癌细胞株MHCC-97H转染后细胞膜表达的E-cadherin荧光由胞质转移至细胞周边浓聚,而Vimentin的荧光强度较前下降.采用Western blot进行蛋白定量分析,转染后MHCC-97H细胞上皮表型标志性蛋白E-cadherin、β-连环蛋白（β-catenin）表达量增高,间质表型标志性蛋白N-cadherin、Vimentin表达量减少,差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论 转染再表达SSTR2MHCC-97H细胞可以增加上皮表型蛋白表达,减少间质表型蛋白,从而逆转肝癌细胞EMT,导致肿瘤细胞侵袭能力减弱.
- 郑建伟张晓梅张春霞李雁易继林秦仁义吴在德薛新波申铭
- 关键词：上皮-间充质转化肝细胞癌
- 黑色素瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24促进阿霉素杀伤肝癌细胞MHCC-97L机制的研究被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨黑色紊瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24（MDA-7/IL-24）基因促进阿霉素（ADM）杀伤肝癌细胞,逆转肝癌细胞多药耐药（MDR）的机制.方法 以人肝癌细胞株MHCC-97L为实验对象,使用噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞仪比较Ad. MDA-7联合ADM处理组与ADM组、Ad. MDA-7组对肝癌细胞MHCC-97L和正常肝细胞L02的作用差异.观察MDA-7/IL-24对多药耐药的逆转作用.荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测MDR-1、STAT-3、bcl-2、bax mRNA的变化.Western blot检测gp-170、STAT-3、bcl-2、bax蛋白的表达的变化.结果 MTT表明Ad. MDA-7对正常肝细胞LO2无生长抑制作用（P〉0.05）.LO2细胞Ad. MDA-7联合ADM组与ADM组细胞生存率差异无统计学意义（P〉0.05）.低浓度（100 VP/cell）的Ad. MDA-7联合正常肝细胞的IC50浓度的ADM（1.5 mg/L）使得细胞抑制率从ADM组的17.46%上升到79.50%,生长抑制逆转4.55倍（P〈0.05）.MDR-1mRNA相对表达量从（16.49±0.11）下降至（5.48±0.05）.STAT-3 mRNA相对表达量从（13.17±0.08）上升至（21.57±0.11）.bcl-2及BAX表达与其他实验组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）.联合实验组P-170蛋白的表达量较其他组明显降低,而磷酸化STAT-3蛋白的表达量亦增加.结论 Ad. MDA-7具有逆转肝癌细胞MHCC-97L多药耐药的作用,其下调MDR-1 mRNA的表达的同时,并通过活化STAT-3信号通路的表达促进肝癌细胞凋亡.
- 郑建伟薛新波张晓梅王从俊陈堃乌建利李雁易继林吴在德
- 关键词：阿霉素多药耐药脱噬作用
