国家自然科学基金(31072160)
- 作品数：29 被引量：59H指数：4
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- 相关机构：山东省农业科学院东北农业大学山东师范大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 牛轮状病毒结构蛋白VP4基因的真核表达
- 2012年
- [目的]克隆获得牛轮状病毒VP4全基因,并进行真核表达。[方法]采用RT-PCR技术,从牛轮状病毒总RNA中扩增出VP4基因,将其重组到含有Flag标签的pcDNA3.1(+)载体中,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,通过Lipofect2000TM转染293T细胞,细胞增殖后经RT-PCR和Western Blot检测VP4基因的表达。[结果]获得了VP4基因的阳性重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-VP4;转染293T细胞后经RT-PCR和Western Blot检测表明,该基因的重组表达载体构建正确,可在293T细胞内瞬时表达。[结论]VP4基因的重组真核表达载体构建成功并可在真核表达细胞内表达,该研究为VP4基因的DNA疫苗的研发及应用奠定了基础。
- 王丹宋玲玲王洪梅杨宏军王立群何洪彬
- 关键词：牛轮状病毒VP4基因克隆真核表达
- 口蹄疫病毒整合素受体研究进展被引量：1
- 2010年
- 口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)感染宿主细胞首先是病毒与被感染细胞表面的病毒受体结合,通过网格蛋白介导的内吞途径,酸化的内吞泡运输进入细胞内,然后衣壳迅速解体,释放出基因组RNA,细胞受体决定口蹄疫病毒宿主特异性和组织特异性。对口蹄疫病毒细胞受体的研究将有助于揭示口蹄疫病毒的感染机制、复制过程、致病机理和疫病预防及治疗等,细胞受体的研究已经成为目前口蹄疫病毒研究中的重点领域之一,论文就近年来FMDV整合素受体研究现状进行了综述,并对其发展进行了展望。
- 陈莉莉武建明王洪梅高运东仲跻峰何洪彬
- 关键词：口蹄疫病毒整合素病毒受体
- 动物乳腺生物反应器研究进展被引量：2
- 2011年
- 介绍了动物乳腺生物反应器的优点,论述了其研究及应用概况,并对其发展趋势进行了展望。
- 杨慧婷王洪梅侯明海高运东仲跻峰何洪彬
- 关键词：转基因乳腺生物反应器动物
- 具有绿色荧光标记的表达T7 RNA聚合酶稳定细胞系的建立被引量：1
- 2011年
- [目的]建立具有绿色荧光标记表达T7 RNA聚合酶的稳定细胞系。[方法]从BL21(DE3)大肠杆菌中克隆出T7RNAP基因,定向克隆质粒FG12后,构建了表达T7 RNA聚合酶基因(T7)的Lenti-virus重组质粒FG12-T7 RNAP。用此重组质粒转染293T细胞,WB可检测出瞬时表达的T7 RNAP蛋白;利用辅助质粒对表达T7的非复制型Lenti-virus病毒进行体外包装,所获得的非复制型Lenti-virus病毒感染BHK-21细胞,利用GFP通过流式细胞分选仪筛选表达T7的细胞系,并利用WB检测基因的表达。[结果]通过WB检测出不同代次的阳性细胞中均能稳定表达目的基因T7 RNA聚合酶。[结论]T7 RNA聚合酶能顺利在真核细胞内表达,并在此基础上建立的稳定细胞系为RNA病毒体内拯救技术平台的建立奠定了基础。
- 宋玲玲李欣王洪梅高远东王立群仲跻峰何洪彬
- 关键词：T7真核表达
- 人补体C1INH基因的原核表达及其抗血清的制备
- 2012年
- 采用PCR技术获得人补体C1INH基因全长,以其为模板扩增出抗原表位基因片段命名为C1,然后将C1片段重组到pET32a(+)载体中,筛选阳性克隆,转化大肠杆菌;IPTG诱导表达,用超声波裂解重组菌BL21培养物,纯化蛋白后免疫新西兰兔制备抗血清。SDS-PAGE分析表明,pET32a-C1融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以包涵体形式高效表达;获得的抗血清经间接ELISA法检测效价为1∶6 400;Western-blot检测显示,抗血清可与原核表达的C1INH蛋白进行特异性结合,为进一步检测真核表达蛋白及研究rhC1INH的功能活性,并为C1INH的临床检测奠定基础。
- 许燕王洪梅朱其军武建明宋玲玲杨宏军刘晓何洪彬王立群
- 关键词：原核表达抗血清
- 抑制牛整合素β5基因表达的shRNA的筛选
- 2012年
- 根据牛整合素β5(Integrin Bata5,ITGB5)的基因序列,设计并构建了真核表达载体pcDNA3.1-flag-β5和shRNA重组慢病毒载体H1-shRNA145、H1-shRNA726,利用脂质体介导法,将pcDNA3.1-flag-β5分别和H1-shRNA145、H1-shRNA726共转染293T细胞,并以针对LacZ基因的H1-shRNA-LacZ与pcDNA3.1-flag-β5共转染293T细胞作为对照,以持家基因β-actin为蛋白内参,通过Western blot检测ITGB5的表达,结果表明,H1-shR-NA145、H1-shRNA726均可抑制ITGB5的表达,并有剂量效应,为进一步研究ITGB5的基因功能奠定基础。
- 王浩然王洪梅朱其军武建明刘晓宋玲玲何洪彬王立群
- 关键词：真核表达SHRNAWESTERNBLOT
- Mx基因的抗病毒研究进展被引量：4
- 2012年
- Mx(myxovirus resistance)蛋白是由干扰素诱导产生的具有GTP酶活性的肌动蛋白,具有广谱的抗病毒功能,可抑制RNA病毒及DNA病毒的复制。作者综述了Mx基因及其编码蛋白的结构和功能,阐述了其抗病毒的作用机制,并展望了Mx基因在抗病毒转基因育种领域的应用前景。
- 辛婷婷王洪梅何洪彬
- 关键词：MX基因抗病毒
- 转座子在动物转基因研究中的应用被引量：2
- 2011年
- 转座子是生物界中存在的一类可移动的遗传因子,它们在转基因和基因组进化中扮演了一个极其重要的角色。转座子技术已成为制备转基因动物的重要手段。论文综述了转座子及其在动物转基因领域的相关应用,并对转座子技术进行了展望。
- 谢维欣武建明王洪梅高运东仲跻峰何洪彬
- 关键词：转座子转基因动物
- 轮状病毒疫苗的研究进展被引量：3
- 2011年
- 轮状病毒(RV)是引起全球婴幼儿腹泻的主要病源之一,它不仅在发展中国家流行,也在发达国家流行。有研究表明改变卫生条件并不能有效制止轮状病毒的传播。疫苗接种是唯一可行的预防控制轮状病毒较高发病率和死亡率的方法,因此轮状病毒疫苗的研发具有非常重要的现实意义。论文针对近几年来研发的轮状病毒疫苗作一综述。
- 宋玲玲王延东王洪梅武建明刘晓高运东仲跻峰何洪彬
- 关键词：轮状病毒疫苗腹泻
- 奶牛金黄色葡萄球菌乳腺炎及其疫苗的研究进展被引量：2
- 2011年
- 金黄色葡萄球菌是奶牛乳腺炎的重要致病菌,笔者对奶牛乳腺炎、金黄色葡萄球菌及其致病机理、金黄色葡萄球菌乳腺炎疫苗的研究等进行了综述,并对新型疫苗的研究进行了展望。
- 孙涛武泽轩王玲玲王洪梅杨宏军何洪彬
- 关键词：奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌疫苗
