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国家科技支撑计划(2013BAD12B04): 作品数：77 被引量：370H指数：10; 相关作者：杨泽晓王印姚学萍邬旭龙夏咸柱更多>>; 相关机构：四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室军事医学科学院更多>>; 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金四川省科技支撑计划更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学理学更多>>

泰勒虫重组抗原Tams1-spag基因原核表达与纯化: 2015年; 为了在低成本的情况下,得到高浓度、高纯度的环形泰勒虫表面重组抗原的融合蛋白,设定表达过程中不同的OD600nm、IPTG浓度与诱导时间,探索最佳表达条件。通过KCl染色法切胶后分别经透析袋电洗脱法与快速离心法回收目的蛋白。对上述试验的蛋白样品进行SDS-PAGE和Western blot检测。结果表明,在OD600nm=1时加入浓度为1mmol/L IPTG,过夜诱导时,重组蛋白的表达量最大。在KCl染色法切胶回收目的条带的基础上,电洗脱法与快速离心法均能得到同等浓度的高纯度目的蛋白,经Western blot检测重组蛋白的生物活性没有改变,仍具有良好的反应原性。; 任方易忠米晓云魏婕马文戈郭会玲苗书魁汪丽群王延薛英黄炯魏玉荣; 关键词：环形泰勒虫重组蛋白原核表达蛋白纯化

猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及荚膜血清分型被引量：13: 2016年; 为了解各血清型的多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)在四川、重庆、云南的流行情况,对2013—2014年间四川、重庆、云南等地8个规模化养殖场的125份病死猪肺炎样品进行细菌分离,并用PCR方法对分离的多杀性巴氏杆菌进行鉴定及荚膜血清分型。结果表明:从有肺炎症状病死猪的肺脏样品中共分离出11株多杀性巴氏杆菌,其中有7株为A血清型(63.6%),3株为D血清型(27.3%),1株为F血清型(9.1%),没有发现B和E血清型。表明在该区域内,猪肺疫主要是由A型Pm感染引起。另外,此次还分离出了1株较少见的F型多杀性巴氏杆菌。该结果可为上述地区巴氏杆菌病的防治提供科学材料。; 林星宇胡凌王印杨泽晓姚学萍肖璐任梅渗曾相杰; 关键词：多杀性巴氏杆菌血清分型

7种猪呼吸道综合征疾病病原多重PCR方法的建立被引量：9: 2017年; 为建立能够同时检测7种导致猪呼吸道综合症疾病病原的多重PCR方法,参考伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、副猪嗜血杆菌(HPS)、多杀性巴氏杆菌(PM)以及胸膜肺炎放线杆菌(APP)标准毒株序列,选择各病毒和细菌的保守序列分别设计7对特异性引物进行多重PCR。各项优化试验结果表明,当反应的退火温度为51℃,各条引物浓度均为0.8μmol/L时扩增的目的条带效果最佳;用敏感性试验检测该反应中各病毒的最小检出量分别为:1.01×10~2(PRV)、1.48×10~3(CSFV)、1.07×10~4(ASFV)、9.73×10~3(PRRSV)、1.82×10~3(HPS)、1.65×10~3(PM)和3.64×10~3(APP)copies/μL。在最优化的反应条件下进行特异性试验,结果未出现交叉反应,能检出对应病原的多种血清型,阴性对照均无非特异性扩增。该方法快捷、灵敏、特异性高,可为临床诊断与流行病学研究提供科学依据。; 任梅渗冷依伊蒙正群张鹏飞杨泽晓姚学萍王印; 关键词：呼吸道疾病多重PCR

野生动物在埃博拉病毒维持和传播中的作用: 2015年; 埃博拉病毒能引起人类和非人灵长类动物严重的急性出血热,致病力强、病死率高,且无有效治疗药物和疫苗.2014年西非埃博拉病毒在人群中传播速度快,已引起世界各国高度关注,世界卫生组织(WHO)将此疫情定性为国际紧急公共卫生事件.本文收集了近40年来埃博拉病毒在病原学、生态学和流行病学等方面的研究成果,整合了多学科理论知识来阐述埃博拉病毒在自然环境中是如何维持、循环传播的以及它的储存宿主等问题,详细地介绍了蝙蝠等野生动物在埃博拉病毒传播链中的作用,提出了阻止埃博拉病毒等重大人兽共患病病原从野生动物向人传播是维护社会公共卫生安全最有效的措施之一.加强野生动物疫病监测,建立长期、全面的监测体系,为早期预警和防控其向人传播提供科学依据,来更好地维护社会公共卫生安全.; 蒋丽香邢超罗静史秋梅何宏轩; 关键词：埃博拉病毒野生动物储存宿主

丹毒丝菌属荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5: 2016年; 为建立高效快速的丹毒丝菌属荧光定量PCR（SYBR Green real-time PCR）检测方法,根据丹毒丝菌属16S r RNA基因保守序列设计特异性引物,通过优化确定最佳反应条件,并进行敏感性、特异性、重复性试验以及临床样品的检测,建立了丹毒丝菌属荧光定量PCR检测方法。结果显示,标准品浓度在1.06×106~1.06×101copies/L范围内具有良好的线性关系,最低可检测到1.06×10-2 copies/L的标准品阳性质粒;该方法与副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌等22种细菌和病毒无交叉反应;批内和批间的变异系数（CV）均小于3%。对临床样品的检测结果表明,该方法具有敏感性高、特异性强、稳定性好、准确度高和检测快速等优点,可用于猪丹毒杆菌感染的早期诊断、样品的快速检测与定量分析。; 冷依伊任梅渗蒙正群张鹏飞杨泽晓姚学萍王印; 关键词：丹毒丝菌属荧光定量PCR RRNA

猪病毒性疫病高通量检测方法的建立和应用及NADC30-like PRRSV与ASFV的监测研究: 我国养猪业正在向规模化和智能化的养殖模式蓬勃发展,养殖规模与管理水平的不对称,使得猪病种类越来越多,病程复杂程度不断加剧,多种疫病的混合感染越来越严重,给临床诊断和治疗带来了困难,严重制约了我国养猪业的发展。许多散户和微...; 邬旭龙; 关键词：毛细管电泳液相芯片高通量; 文献传递

水貂绿脓杆菌的分离鉴定: 2015年; 为确诊引起该养殖场水貂大量死亡的主要病因,对吉林省某貂场送检的10只水貂进行剖检,根据死亡水貂临床表现、剖检变化,经16s r RNA PCR检测、小鼠的致死性试验、细菌分离及生化试验确诊为绿脓杆菌感染。对该致病菌进行分离纯化,测定小鼠半数致死量为1×105.48cfu/m L。; 耿海东李景玉解林红徐钰李元果王铁成尚丽元初冬孙贺廷; 关键词：绿脓杆菌水貂

常规PCR法扩增口蹄疫病毒基因组5’端序列的探索: 2018年; 【目的】扩增口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)基因组5’端序列,为获得基因组全长准备基础。【方法】将FMDV O/Akesu/58 CE39A株液氮冻存基因组RNA反转录三次,对c DNA的5’端序列进行扩增、克隆、测序。【结果】以c DNA1与c DNA3为模板,用LA Taq DNA polymerase、EX Taq DNA polymerase、Prime STARHS DNA polymerase及3对引物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均未扩增出5’端目的片段;以c DNA2为模板,用LA Taq DNA polymerase为扩增酶,两对引物Ⅰ、Ⅱ均能扩增出5’端目的片段,且所测得的序列长度787 bp、797 bp与参考序列核苷酸同源性分别为86.2%和86.3%。【结论】常规PCR法扩增5’端序列较其它技术具有价格便宜、操作简便等优点,但扩增成功率偏低。试验共进行了72次PCR,成功率为6/72,说明FMDV 5’端序列的扩增难度大,应合理设计反转录引物和扩增引物。为许多RNA病毒反向遗传学研究提供了更多的选择。; 朱研苗书魁马文戈李金娜魏玉荣汪萍魏婕米晓云黄炯; 关键词：口蹄疫病毒常规PCR 基因扩增

一株鹅源多杀性巴氏杆菌强毒株的分离鉴定及其血清型鉴定相关基因的克隆被引量：5: 2016年; 为探索某鹅场鹅巴氏杆菌病疫情发生的原因,采集初诊为鹅巴氏杆菌感染病例的肝脏、心脏等样品进行细菌分离纯化,经过染色镜检、培养特性、生化试验、种与血清型PCR鉴定、致病性试验和药敏试验等进行鉴定,并根据Gen Bank中多杀性巴氏杆菌血清型相关基因设计引物进行其血清型相关基因的克隆分析。结果显示,分离到1株荚膜A型鹅源多杀性巴氏杆菌,属于多杀亚种,血清型Ⅰ型,具有较强致病性,对实验小鼠最小致死量为5 cfu。该分离菌株具有多重耐药性,仅对头孢三嗪、头孢噻吩、头孢他啶、头孢唑肟和氟苯尼考5种药物敏感。成功克隆的该分离菌株荚膜合成相关基因hya D-hya C的开放阅读框4 155 bp,与已发布基因序列同源性高达99%;血清型Ⅰ型PCR的扩增基因片段303 bp,与巴氏杆菌C48-1株扩增基因片段序列完全相同。综上,该株血清型Ⅰ型荚膜A型的鹅源多杀性巴氏杆菌强毒株,是鹅场疫情发生的病原,克隆的荚膜合成相关基因和菌体血清型特异性基因遗传相对稳定。; 杨泽晓刘常钰王印姚学萍邬旭龙王波李桂黎蒙正群刘亚东; 关键词：多杀性巴氏杆菌血清型 PCR鉴定

非洲猪瘟病毒微滴数字PCR(ddPCR)方法的建立及应用被引量：40: 2017年; 【目的】非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)能导致猪群高死亡率,从而造成严重的经济损失。因此,建立严密、高效的防控系统,包括灵敏、准确的诊断方法以及高效的预报预警机制等,以避免ASF传入我国。本文旨在建立一种新型而高灵敏度的ASFV微滴数字PCR(Droplet digital PCR,dd PCR)检测方法。【方法】针对ASFV K205R基因设计一对特异性引物和Taq Man探针,通过反应条件优化,建立了ASFV实时荧光定量PCR(q PCR)和dd PCR检测方法;并对两种方法的线性关系、灵敏性、特异性和重复性进行了评估,利用建立的ASFV检测方法对163份国内和进境的组织样本及血清样本进行检测,血清样本经商品化ASFV ELISA试剂盒复检,评估不同方法检测结果的符合率。【结果】建立的ASFV q PCR和dd PCR检测方法线性关系较好(R2≥0.998),dd PCR的最低检测限度可达到0.36拷贝,在20μL反应体系中约为10拷贝/反应,检测灵敏度是q PCR的10倍。ASFV dd PCR检测方法具有很高的特异性和重复性,不与其他猪常见病毒发生交叉反应。【结论】该方法灵敏度高、特异性强,可作为一种有效的分子生物学方法来诊断ASFV,为防止该病传入我国以及ASFV的实时监测提供新的技术储备,同时促进dd PCR技术在我国的发展和应用。; 邬旭龙肖璐宋勇林华陈世界杨苗安微姚学萍杨泽晓王印; 关键词：实时荧光定量PCR 非洲猪瘟病毒

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