天津市自然科学基金(983702411)
- 作品数：6 被引量：40H指数：3
- 相关作者：何庆尹潍王晶苏京刘铭更多>>
- 相关机构：天津医科大学总医院诺和诺德(中国)研究发展中心天津医科大学更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肿瘤坏死因子-α对脂肪细胞脂联素和炎症因子mRNA表达的影响被引量：7
- 2010年
- 目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在肥胖-炎症-胰岛素抵抗(IR)-2型糖尿病(T2DM)的病生理过程中的作用。方法:(1)培养前脂肪细胞3T3-L1细胞,并观察其诱导分化成熟过程中过氧化物酶体增殖活化受体-γ(PPAR-γ)mRNA、脂联素(ADPN)mRNA的表达情况。(2)以高浓度(20μg/L)的TNF-α处理分化成熟的脂肪细胞0.5、4、8、24h,提取总RNA,采用实时定量逆转录聚合酶链反应检测ADPN mRNA、PPAR-γmRNA、TNF-αmRNA、白细胞介素(IL)-6mRNA、IL-1βmRNA的表达情况。结果:(1)3T3-L1细胞诱导分化过程中ADPN mRNA的表达呈逐渐上升趋势,诱导后PPAR-γmRNA增加。(2)分化成熟的脂肪细胞中ADPN mRNA表达水平在TNF-α处理0.5、4、8h后随着时间延长逐渐下降,8h时降至最低(P<0.01)。0.5h后PPAR-γmRNA表达水平并未出现明显下降,4、8、24h时均低于对照组(P<0.01),4h时降至最低。TNF-α处理0.5h后TNF-αmRNA表达水平明显上升,并于4h时达峰值,各处理组均高于对照组(P<0.01);0.5h后IL-6mRNA表达水平明显升高,各处理组均高于对照组(P<0.01)。空白组、对照组和各TNF-α处理组IL-1βmRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本实验从分子生物学水平证实了TNF-α参与肥胖-炎症-IR-T2DM的过程。
- 曹竞文何庆张明于俊娜张榕榕牛文彦
- 关键词：肿瘤坏死因子Α过氧化物酶体类脂细胞脂联素白细胞介素6白细胞介素1Β
- 高浓度游离脂肪酸对胰岛细胞凋亡及相关基因表达的影响被引量：16
- 2004年
- 目的 :观察高浓度游离脂肪酸体外对胰岛细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响。方法 :应用TUNEL法检测高浓度游离脂肪酸培养后大鼠胰岛细胞和小鼠 βTc3细胞凋亡百分率 ,应用定量RT -PCR(QRT -PCR)检测培养后bcl-2、bax、c-myc、p53和fasmRNA的表达。结果 :高浓度游离脂肪酸使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc3的凋亡细胞比例明显增加。胰岛细胞凋亡过程中 ,诱导凋亡基因bax、c -myc、fas的mRNA表达水平明显升高 ,抵抗凋亡基因bcl-2mRNA表达水平明显下降 ,p53mRNA表达水平无明显改变。结论 :游离脂肪酸可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重糖尿病 。
- 何庆王保平刘铭苏京王晶陈克勤尹潍
- 关键词：游离脂肪酸胰岛细胞凋亡基因表达
- 链脲佐菌素对胰岛细胞凋亡及相关基因表达的影响被引量：2
- 2004年
- 目的 :观察链脲佐菌素对胰岛细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响。方法 :应用放射免疫法检测了低剂量链脲佐菌素培养后大鼠胰岛细胞高糖刺激后上清液的胰岛素水平 ;应用TUNEL法检测低剂量链脲佐菌素培养后大鼠胰岛细胞凋亡百分率 ;应用定量RT -PCR(QRT -PCR)检测培养后bcl-2、baxmRNA的表达 ;应用定量RT -PCR检测低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛bcl-2、baxmRNA的表达。结果 :低剂量链脲佐菌素使原代培养的大鼠胰岛细胞胰岛素分泌功能明显下降 ;低剂量链脲佐菌素使大鼠胰岛细胞凋亡细胞比例明显增加 ,凋亡过程中 ,baxmRNA表达水平明显升高 ,bcl-2mRNA表达水平明显下降 ;对低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛凋亡相关基因QRT -PCR检测也显示同样的结果。结论 :低剂量链脲佐菌素可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致糖尿病 ,其中bcl-2/baxmRNA表达比率变化可能起重要作用。
- 何庆苏京刘铭王保平王晶陈克勤尹潍
- 关键词：胰岛细胞链脲佐菌素细胞凋亡基因表达
- 抗凋亡基因bcl-2转染哺乳动物细胞的研究
- 2006年
- 目的:构建抗凋亡基因bcl-2的哺乳动物细胞表达型质粒并转染哺乳动物细胞293T细胞。方法:利用基因重组技术,将bcl-2全编码cDNA序列,导入pCMV-Tag1表达型质粒;应用磷酸钙共沉淀技术,将其转染293T细胞;并利用免疫沉淀和Westernblotting技术检测Bcl-2融合蛋白的表达。结果:bcl-2全编码cDNA序列成功导入pCMV-Tag1表达型质粒;在转染后的293T细胞成功地检测出bcl-2融合蛋白的表达,融合蛋白大小与预期完全一致。结论:该表达型质粒可以成功转染哺乳动物细胞,为对胰岛细胞的转染奠定了基础。
- 何庆苏京刘铭王保平王晶陈克勤尹潍
- 关键词：转染免疫印迹法
- 高浓度葡萄糖对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因的影响被引量：14
- 2006年
- 目的:观察高浓度葡萄糖体外对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响,探讨葡萄糖毒性及其分子机制。方法:应用TUNEL法检测高浓度葡萄糖培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞凋亡百分率;应用定量RT-PCR(QRT-PCR)检测培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞bcl-2和baxmRNA的表达;应用定量RT-PCR检测低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛bcl-2和baxmRNA的表达。结果:高浓度葡萄糖使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc-3的凋亡细胞比例明显增加;胰岛细胞凋亡过程中,诱导凋亡基因bax的mRNA表达水平明显升高,抵抗凋亡基因bcl-2mRNA表达水平明显下降,致使bcl-2/bax比率明显降低;对低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛凋亡相关基因QRT-PCR检测也显示同样的结果。结论:高浓度葡萄糖可能通过诱导胰岛细胞凋亡增加而加重糖尿病,其中bcl-2/baxmRNA表达比率变化可能起重要作用。
- 何庆刘铭苏京王保平王晶陈克勤尹潍
- 关键词：胰岛细胞葡萄糖细胞凋亡基因表达
- 抗凋亡基因bcl-2 cDNA表达型质粒的构建及序列分析被引量：2
- 2004年
- 目的 :克隆抗凋亡基因bcl-2,并构建其表达型质粒 ;进行序列分析 ,为基因转染作准备。方法 :应用PCR定向克隆技术 ,克隆SD大鼠鼠脑bcl-2全编码cDNA序列 ;应用双脱氧末端终止法进行重组质粒中bcl-2的cDNA序列分析 ;利用基因重组技术 ,将bcl-2全编码cDNA序列 ,导入pCMV -Tag -1表达型质粒。结果 :成功地克隆SD大鼠bcl-2全编码cDNA序列 ,并将其成功地导入pCMV -Tag -1表达型质粒 ;经序列分析 ,发现bcl-2全编码序列与GeneBank中的相应序列相比 ,有3个碱基出现差别 ,分别为171位a→g,233位a→c ,530位 g→a,均为同义突变。结论
- 何庆苏京刘铭王保平王晶陈克勤尹潍
- 关键词：克隆逆转录聚合酶链反应
