国家自然科学基金(31050010)
- 作品数：6 被引量：4H指数：2
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- 组蛋白去乙酰化酶抑制剂Trichostatin A对细胞周期素D1调控的影响
- 2016年
- 目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂Trichostatin A(TSA)对细胞周期素D1表达的影响,探讨TSA抑制细胞周期素D1表达的分子机制。方法以不同浓度(20、100、400 nmol/L)的TSA处理A549细胞24 h,以RT-PCR、Western blot等方法检测细胞周期素D1 mRNA和蛋白的表达水平;以染色质免疫沉淀技术分析400nmol/L的TSA处理A549细胞24 h后,细胞周期素D1基因核心启动子组蛋白3第9位赖氨酸乙酰化(AcH3k9)水平。结果随着TSA处理浓度的增加细胞周期素D1 mRNA和蛋白表达水平下降。在400 nmol/L TSA作用下,细胞周期素D1启动子区组蛋白乙酰化程度下降。结论 TSA造成细胞周期素D1表达下调可能与细胞周期素D1启动子乙酰化程度下降有关。
- 何浪郝小惠刘小健蔡文臣孟晨雪孙佳佳沈阳丽田洁张婧郭志义
- 关键词：组蛋白去乙酰化酶抑制剂启动子细胞周期素D1
- SNP位点rs6983267相关非编码RNAG/U对结肠癌细胞转移活性的影响被引量：2
- 2016年
- 目的探讨染色体8q24区域中单核苷酸多态性(SNP)位点rs6983267相关非编码RNA G/U对结肠癌细胞转移活性的影响。方法运用生物信息学方法分析SNP rs6983267位点的非编码RNA;收集KM12C和KM12SM细胞,提取细胞总RNA,逆转录和PCR扩增,片段回收后用Tsp45Ⅰ进行酶切,对酶切(酶切组)和不做酶切(对照组)的模板做PCR扩增分析。通过限制性内切酶-PCR方法检测两组SNP rs6983267位点的非编码RNA G/U相对表达量;KM12C和KM12SM细胞分别进行p GL3-Gs-LUC(p GL3-Gs-LUC组)、p GL3-Ts-LUC(p GL3-Ts-LUC组)和p GL3-Basic-LUC质粒转染,应用双荧光素酶报告基因方法检测两组KM12C和KM12SM细胞中rs6983267非编码RNA启动子活性。结果 ENCODE数据库显示,染色体8q24区域SNP rs6983267位点附近存在非编码基因。KM12C细胞中酶切组、对照组SNP rs6983267位点相关非编码RNA G/U为0.80±0.10、5.60±1.30,KM12SM细胞中分别为0.71±0.09、1.43±0.11。与对照组比较,KM12C细胞中酶切组SNP rs6983267位点相关非编码RNA G/U差异无统计学意义(P﹥0.05),KM12SM细胞中升高(P<0.05)。KM12C细胞中,p GL3-Gs-LUC组、p GL3-TsLUC组rs6983267位点相关G型与T型非编码RNA启动子相对活性分别为0.81±0.14、0.82±0.25,KM12SM细胞中分别为1.00±0.26、1.85±0.58。在KM12SM细胞中,两组比较,P<0.05;在KM12C细胞中,两组比较,P﹥0.05。结论 SNP rs6983267位点相关非编码RNA G/U可能与结肠癌细胞的转移活性相关。
- 蔡文臣郝小惠沈阳丽孟晨雪田洁郭志义
- 关键词：结肠肿瘤肿瘤转移单核苷酸多态性
- 前列腺癌细胞系中结肠癌相关转录因子2与雄激素受体基因的转录调控关系
- 2022年
- 雄激素受体(androgen receptor,AR)是经典的前列腺癌主效基因。结肠癌相关转录因子2(colon cancer associated transcript 2,CCAT2)是基于GWAS大数据结果发现的前列腺癌相关长链非编码基因,二者关系尚未见报道。依据AR表达模式的不同,前列腺癌(prostate cancer,PCa)可以划分为普通前列腺癌以及恶性程度更高的去势抵抗性前列腺癌(castration-resistance prostate cancer,CRPC)两种截然不同的发展阶段,其机制尚不明确。AR与CCAT2是否存在调控关系以及是否在其中发挥作用是本研究的切入点。本文采用雄激素依赖型与非依赖型的前列腺癌细胞研究模型LNCaP与DU145细胞系,研究发现了CCAT2与AR存在转录调控关系。首先,采用过表达与敲低的分子生物学研究策略,发现二者的RNA水平存在相互调控。在DU145细胞中,G型CCAT2激活AR mRNA水平到2.6倍,T型CCAT2抑制AR mRNA水平至0.2(P<0.05);在LNCap细胞中,G型CCAT2激活AR mRNA水平1.5倍,T型CCAT2对AR mRNA水平变化无显著意义(P<0.05)。在DU145细胞中过表达AR,CCAT 2的表达量上升2.9倍(P<0.05);在LNCaP细胞中沉默AR的表达,CCAT 2的表达水平下降至0.48(P<0.05)。报告基因分析结果显示,CCAT2对AR启动子相对活性影响与RNA水平改变相一致。由于CCAT2研究的缺乏,本文进一步研究了其与细胞活性以及对AR蛋白质水平的影响,数据显示与转录水平的结果基本一致。最后,本文初步分析了AR与CCAT2可能相关的靶基因,包括CTNNB1,MYC和TCF7L 2,初步探讨可能的机制并验证了转录水平的发现。结果表明,在LNCaP细胞中G型CCAT2分子激活AR的转录,U型CCAT2无作用。在DU145细胞中,G型CCAT2激活AR转录,U型CCAT2抑制AR的转录。在2个细胞系中,AR都激活CCAT 2整体的转录活性,提示二者存在反馈调节机制。研究发现,CCAT2与AR的转录调控关系,为真核基因表达与调控的机制研究以及前列腺癌的发病机制与治疗提供了理论与实验数据。
- 张品正梁娜常铭杰王旭莹李金泽王亚宁孙凡丽陈紫芸尚璇郭志义
- 关键词：前列腺癌雄激素受体基因转录调控
- DNA甲基化在热休克诱导细胞周期素D1表达水平降低中的转录调控机制被引量：1
- 2012年
- 目的研究DNA甲基化在热休克诱导的人细胞周期素D1基因启动子活性下降调控中的作用。方法 DNA甲基化通过甲基化特异性PCR方法检测。甲基化位点突变采用Stratagene公司定点突变试剂盒。甲基化位点的作用通过报告基因技术分析启动子活性确认。结果热休克处理可能造成细胞周期素D1基因启动子+65/67位点发生DNA甲基化,而突变该位点逆转了由报告基因活性分析研究的热休克效应。结论启动子+65/67位点的DNA甲基化可能调控细胞周期素D1的热休克效应。
- 郭志义郝小惠高雯雯姜雪莲赵丹丹陈远杨方
- 关键词：DNA甲基化甲基化特异性PCR热休克细胞周期素D1
- 细胞周期素D_2启动子曲古菌素A效应区域的研究
- 2011年
- 目的研究在曲古菌素A(trichostatin A,TSA)处理条件下细胞周期素D2的调控机制。方法细胞周期素D2的mRNA水平通过RT-PCR方法检测。细胞周期素D2的启动子片段以A549细胞基因组DNA为模板,通过高保真PCR扩增获得,并克隆到pGL3-BASIC载体中;并以此为基础通过高保真PCR扩增出不同长度的启动子片段。启动子相对活性通过萤火虫酶报告基因方法确定。结果在TSA处理条件下,细胞周期素D2的mRNA水平上升。共构建4个以不同长度细胞周期素D2启动子片段驱动的报告基因质粒,分别命名为pGL3-1816CD2-LUC、pGL3-1358CD2-LUC、pGL3-720CD2-LUC和pGL3-524CD2-LUC。在TSA处理条件下,启动子活性的变化在-524 bp删切质粒时消失。结论 TSA条件下细胞周期素D2 mRNA水平上升是启动子依赖的;细胞周期素D2启动子的TSA效应区域在-720～-524 bp之间。
- 郭志义郝小惠田炜谭菲菲姜雪莲李潇婷胡倩倩杨方
- 关键词：启动子报告基因曲古菌素A
- 应用液滴数字PCR技术检测rs6983267三种多态性位点被引量：2
- 2018年
- 核苷酸的多态性检测在临床以及基础生命科学研究中占据着重要地位.目前基于PCR的探针法应用最为广泛.由于在核苷酸上微小差异,探针的设计往往带有交叉活性反应,这阻碍了qPCR方法的推广.数字PCR(dPCR)是近年来已成功实现商业化的基于单分子分析的核酸检测技术.通过对条件的优化,dPCR可以消除探针的交叉活性,不过目前商业化的dPCR一般只有2个通道,对于同时检测3个多态性需要更加细致的优化.本研究以rs6983267位点的CCAT2基因3种多态性检测为例,利用探针的交叉活性反应检测其3个多态性位点.检测涉及到3个探针:2个针对多态性位点,另1个位于多态性位点外侧作为参照探针.结果表明,成功地区分了3个包含多态性位点基因片段的簇.在本研究中交叉活性反应可以为dPCR留出白空间,利于多样品的检测.
- 沈阳丽孙浩蔡文臣张品正王旭莹尚雨寒石璐辛倩倩郭志义
