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人穿孔素真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达被引量：2: 2008年; 目的:观察克隆的人穿孔素(pfn)基因在COS-7细胞中的表达情况。方法:用PCR方法获取人pfn全长基因,将所获基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),转染COS-7细胞,RT-PCR检测pfn基因在COS-7细胞中的表达。结果:成功获得人pfn全长基因,并构建了真核表达载体。转染COS-7后,检测出pfn基因的表达。结论:人pfn全长基因可以在转染的COS-7细胞中表达。; 张春华李芳秋缪家文; 关键词：穿孔素真核表达

人颗粒溶素基因真核表达载体的构建及在肝癌细胞中表达的实验研究被引量：4: 2005年; 目的:构建人颗粒溶素(GNLY)全长编码序列的真核表达载体,转染肿瘤细胞,观察GNLY在细胞内的表达及其对细胞增殖的抑制作用。方法:用RT-PCR技术获取人GNLY全长编码序列cDNA,克隆至pGEM-T载体进行测序,再将克隆片段插入质粒pcDNA3.1(+)中,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/GNLY,用阳离子聚合物转染试剂转染肝癌细胞系SMMC-7721,检测目的基因mRNA的表达,W ST-8法检测细胞增殖活性。结果:获得人GNLY全长编码序列cDNA,并成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/GNLY;转染SMMC-7721细胞后,检测出目的基因mRNA的表达;重组质粒转染组与空质粒对照组细胞增殖活性有非常显著性差异(P<0.01和P<0.001),并且随着转染基因浓度的增加,细胞增殖活性逐渐降低,2.0μg/m l pcDNA3.1(+)/GNLY转染组细胞增殖活性下降至0.329。结论:pcDNA3.1(+)/GNLY真核表达载体构建成功,GNLY基因转染对SMMC-7721细胞能产生细胞毒性效应,对肝癌细胞具有一定的杀伤作用。; 缪家文李芳秋杨爱龙张春华; 关键词：颗粒溶素真核表达细胞抑制作用

放射诱导基因治疗肿瘤的研究进展被引量：2: 2005年; 近年来,放射诱导基因治疗已成为肿瘤治疗领域新的研究热点之一。该治疗策略一方面将放射治疗与基因治疗有机地结合,发挥协同治疗作用;另一方面由于放疗具有靶向性和可控性,实现了对杀伤基因表达的时空调控。相关的研究已经取得一定进展,作者简要概述目前的研究现状及该技术未来的应用前景。; 张春华李芳秋; 关键词：基因治疗

人精子蛋白17放射诱导表达细胞模型的构建被引量：3: 2007年; 目的:构建pEgr-Sp17重组质粒,并检测其在人卵巢癌细胞系HO8910中的辐射诱导表达,探索Egr-1基因调控序列辐射诱导下游基因表达的功能,建立放射诱导表达人精子蛋白Sp17的细胞模型。方法:用双酶切、粘端连接的方法构建含有辐射诱导特性的早期反应因子Egr-1和人Sp17基因的pEgr-Sp17重组质粒,利用脂质体介导其转染人HO8910细胞,用免疫细胞化学方法检测X线照射后被转染细胞中Sp17的表达。在确证Sp17能瞬时表达后,继续用含G418的RPMI1640培养基培养细胞,筛选稳定表达Sp17的细胞株。结果:测序结果和酶切鉴定均证实pEgr-Sp17重组质粒构建正确;免疫细胞化学试验表明pEgr-Sp17重组质粒转染的人HO8910细胞表达Sp17蛋白。结论:X线可诱导pEgr-Sp17重组质粒在人HO8910细胞中表达Sp17蛋白,构建了Sp17蛋白放射诱导表达的卵巢癌细胞模型。; 张春华李芳秋杨爱龙缪家文朱锡旭; 关键词：EGR-1启动子 X线

CIK体外抗癌活性分子机制的探讨被引量：4: 2009年; 目的:分析细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell,CIK)抗肿瘤活性增强的分子机制。方法:从健康人志愿者和恶性肿瘤患者PBMC培养获得CIK细胞,用LDH释放法分别对PBMC和CIK进行体外杀伤肿瘤细胞的活性测定,用流式细胞术分析PBMC和CIK细胞群中颗粒溶素(granulysin,GNLY)和穿孔素(perforin,PFN)的表达。结果:在效靶比为5∶1时,健康人和肿瘤患者PBMC对肿瘤细胞K562的裂解率分别为6.33%和1.29%,两组CIK细胞对肿瘤细胞K562的裂解率分别为14.7%和14.16%,PB-MC与CIK对细胞的裂解率显著提高,P<0.01;GNLY阳性表达细胞百分比由4.43%和1.95%上升到19.15%和17.52%,P<0.01。但PFN细胞却由21.91%和14.69%降低到4.96%和3.7%,P<0.05。结论:肿瘤患者PBMC抗肿瘤活性下降可能与该细胞中GN-LY和PFN表达减少有关;CIK细胞杀伤肿瘤活性的提高可能与GNLY的表达增加相关;PFN表达下降可能是维持CIK细胞在体外大量增殖的调节因素。; 李芳秋张蕾刘群黄海嵘李德闵; 关键词：细胞因子类过继杀伤细胞淋巴因子激活

人穿孔素N端肽段的放射诱导表达研究: 2008年; 目的:构建人穿孔素N端(hPFN-N)的真核放射诱导表达载体,并在放射诱导条件的刺激下研究hPFN-N的表达产物(rhPFN-N)在肺癌细胞SPC-A1中的分布及其对该细胞的细胞毒性作用。方法:以克隆有hPFN全长cDNA序列的载体pcDNA3·1(+)/hPFN为模板,用PCR扩增hPFN-N,将该基因片段克隆到含放射诱导启动子的真核表达载体pcDNA3·1(+)/Egr-1中,以重组体稳定转染SPC-A1细胞,经过X射线的放射诱导后,应用RT-PCR、细胞免疫化学法检测hPFN-N蛋白的表达,用MTT法测定该蛋白对靶细胞的杀伤活性。结果:成功构建了真核放射诱导表达载体pcDNA3·1(+)/Egr-hPFN-N。以重组体转染SPC-A1细胞后,用RT-PCR检测到hPFN-N mRNA的表达。细胞免疫化学法检测结果呈阳性反应,MTT法检测结果为rhPFN-N对靶细胞的杀伤活力为29·2%。结论:构建了pcDNA3·1(+)/Egr-hPFN-N真核放射诱导表达载体,在经过X射线的放射诱导后,hPFN-N能够在SPC-A1细胞的细胞膜上大量表达,表达产物rhPFN-N对靶细胞有明显杀伤活力。; 张蕾李芳秋韩艳玲朱锡旭; 关键词：穿孔素 EGR-1启动子杀伤活性

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南京市科技发展计划项目(200401070-5)