国家自然科学基金(81171532)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：董珊珊赵沙沙汪德强周爱娥钟文更多>>
- 相关机构：重庆医科大学遵义医学院附属医院重庆医科大学附属第一医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肺炎链球菌三磷酸甘油醛脱氢酶GAPDH与热休克蛋白DnaJ的相互作用
- 2015年
- 目的验证肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)糖酵解关键酶三磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)和热休克蛋白Dna J的相互作用。方法 PCR扩增S.pn D39 GAPDH蛋白编码基因gap全长,将其克隆至p ET-28a(+),重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导GAPDH-6His的表达,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,用SDS-PAGE鉴定其纯度。重组GAPDH蛋白经腹部皮下免疫昆明小鼠获得多克隆抗体。Western blot鉴定GAPDH的保守性。采用大肠杆菌双杂交系统、直接结合实验、生物膜层干涉技术(Bio-layer Interferometry,BLI)验证GAPDH和Dna J的相互作用。结果获得了纯度达90%的GAPDH重组蛋白,并获得了效价达107的抗GAPDH多克隆抗体,Western blot检测显示在7株不同血清型S.pn的全菌裂解液和培养上清中均存在和抗GAPDH抗体反应的特异性条带。大肠杆菌双杂交系统显示GAPDH和Dna J共转化菌株能够在3-AT平板及双选择培养平板上生长,提示二者在细菌胞内有相互作用。直接结合实验和BLI显示随着加入GAPDH蛋白浓度的增加,二者的结合量也增加,提示GAPDH和Dna J的结合具有浓度依赖性。BLI实验也显示GAPDH和Dna J的亲和常数为1.12×10-7mol/L。结论糖酵解关键酶GAPDH在肺炎链球菌中保守表达,且为分泌性蛋白;该蛋白和热休克蛋白Dna J在细胞内存在相互作用,且为直接相互作用。
- 马峰王建敏王丽滨宋志新徐红梅邢燕粟玉凤张雪梅孟江萍
- 关键词：肺炎链球菌蛋白相互作用
- SPD1672蛋白对肺炎链球菌磷壁酸合成和细菌增殖的影响被引量：1
- 2015年
- 目的鉴定SPD1672基因在肺炎链球菌细胞壁多糖合成及增殖中的作用。方法通过生物信息学分析SPD1672蛋白可能的生物学功能,用替代失活法在肺炎链球菌D39菌株和R6菌株中敲除该基因,用电子显微镜观察基因缺失菌株与野生菌株荚膜厚度,Western blot检测磷壁酸合成量,最后以吸光度法测定肺炎链球菌体外增殖能力。结果成功构建SPD1672基因缺失菌;SPD1672基因缺失菌株与野生菌株相比,荚膜厚度无差异;而缺陷菌株的C反应蛋白结合量较野生菌显著减少(P<0.01),其磷壁酸含量也较野生菌显著下降。此外,SPD1672基因缺失菌体外增殖较野生菌缓慢(P<0.05)。结论 SPD1672蛋白影响肺炎链球菌磷壁酸合成和体外增殖能力,是肺炎链球菌的一种新毒力因子。
- 黄健张彦青黄美容吴凯峰胥文春王虹
- 关键词：肺炎链球菌
- 肺炎链球菌假想转录因子LytR的表达、纯化、晶体生长及优化被引量：2
- 2013年
- 本研究通过大量表达、纯化肺炎链球菌(S.pn)假想转录因子LytR,以用于晶体生长、优化及三维结构解析。以S.pn D39血清型LytR基因为DNA模板、pET-32a(+)为表达质粒、E.coli BL 21(DE 3)为表达菌株,经成功克隆、表达及纯化后,获得大量、上清表达,且纯度>90%的LytR重组蛋白(含His标签);经悬滴气相扩散法行蛋白晶体培养、初筛及优化,获得体形较大、外观规则的棒状晶体,该晶体X射线衍射能力达4.0A。本研究为假想转录因子LytR三维结构的解析及其生物学研究奠定基础。
- 闵迅钟文赵沙沙董杰董珊珊周爱娥闫文娟汪德强
- 关键词：肺炎链球菌蛋白质纯化
