陕西省自然科学基金(2010JM4012)
- 作品数：9 被引量：36H指数：3
- 相关作者：赵勇师长宏毛峰峰赵善民白冰更多>>
- 相关机构：第四军医大学西安市疾病预防控制中心第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：陕西省自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 表达HBHA和hIL-12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌对结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗作用被引量：4
- 2012年
- 评价表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌用于结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗效果。结核分枝杆菌H37Rv感染小鼠4周后,用表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌免疫治疗,检测免疫小鼠肺部荷菌量和组织病理变化。重组耻垢分枝杆菌可有效控制感染小鼠肺部结核分枝杆菌的荷菌量,减轻病理损伤。但在降低肺部荷菌量方面不如化疗药物。表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌可有效控制结核分枝杆菌在小鼠体内的增殖,可能成为联合化疗药物控制结核病的有效候选疫苗。
- 赵善民张彩勤赵勇毛峰峰白冰张海师长宏徐志凯
- 关键词：重组耻垢分枝杆菌结核分枝杆菌HBHA
- 结核分枝杆菌Rv2031c基因在P815细胞中的高效表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建结核分枝杆菌Rv2031c基因的真核表达载体,并在P815细胞中高效表达。方法应用PCR扩增Rv2031c基因,克隆人原核表达载体后进行测序,测序正确的序列克隆入真核表达载体pcDNA3.1(一);重组质粒pcDNA-Rv2031c转染p815真核细胞;以RT-PCR方法俭测结核分枝杆菌Rv2031c在真核细胞内mRNA表达,以间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达。结果 Rv2031c基因成功克克隆人真核表达载体pcDNA3.1(一),并可在P815细胞高效表达。结论成功构建了真核表达重组质料pcDNA-Rv2031c,为进一步研究Rv2031c的功能奠定了坚实基础。
- 尚淑琴王丽梅张薇曾令城陈宝忠
- 关键词：结核分枝杆菌基因真核
- 参麦注射液对肺结核患者血清β-CAR、IL-17及CD4^+细胞表达的影响被引量：3
- 2018年
- 目的:探讨参麦注射液对肺结核患者血清β-CAR、IL-17及CD4^+细胞表达的影响。方法:选取2014年6月至2016年4月住院收治的68例初治PTB,并随机分成2组,每组34例。对照组予标准2S(E)HRZ/4HR方案,观察组在此基础上予参麦注射液静脉滴注,2组均接受24周治疗。检测血清氧化应激指标、炎性反应因子以及免疫功能,评价中医症候评分,比较治疗效果。结果:与治疗前比较,2组丙二醛(MDA)升高(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)、β-胡萝卜素(β-CAR)降低(P<0.05),白介素-10(IL-10)、白介素-17(IL-17)降低(P<0.05),干扰素γ(IFN-γ)升高(P<0.05),CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+升高(P<0.01),CD8^+降低(P<0.01),咳嗽、潮热、盗汗、消瘦症候评分降低(P<0.01);与治疗后比较,观察组MDA较高(P<0.05),SOD、β-CAR较低(P<0.05),IL-10、IL-17较低(P<0.05),IFN-γ较高(P<0.05),CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+较高(P<0.01),CD8^+较低(P<0.01),咳嗽、潮热、盗汗、消瘦症候评分较低(P<0.01),总有效率较高(P<0.05)。结论:参麦注射液治疗PTB效果显著,值得推广应用。
- 徐红艳
- 关键词：肺结核参麦注射液IL-17CD4^+
- Rpf结构域及其突变体对MTB感染小鼠的免疫治疗作用
- 2013年
- 目的:观察复苏促生长因子Rpf结构域(Rpfd)及其突变体E54K(Rpfd1),E54A(Rpfd2)和E54K+D48A(Rpfd3)对MTB感染小鼠的免疫治疗作用。方法:表达、纯化Rpfd及其突变体Rpfd1,Rpfd2和Rpfd3。结核毒株H37R v从尾静脉感染BALB/c小鼠,剂量为1×105C F U。感染4w后,随机分为6组,在感染后4w、6w和8周分别腹部皮下注射含50μg/ml相应蛋白Rpfd、Rpfd1、Rpfd2、Rpfd3的生理盐水,同时设异烟肼(INH,54.25 mg/L)联合利福平(RFP,52.5 mg/L)治疗组。在感染后11w和13w,分别取一侧肺脏计数荷菌数。将各时间点的感染小鼠另一侧肺脏固定后进行组织学观察。结果:表达产物均可与抗-Rpf结构域单抗特异性结合,相对分子量约为32 kDa。感染后11w和13w,Rpfd、Rpfd1、Rpfd2治疗组肺部荷菌量明显少于Rpfd3治疗组和生理盐水组(P<0.05),但其对肺部MTB的控制未达到INH+RFP联合治疗的效果(P<0.05)。结论:MTB感染小鼠后,利用Rpfd蛋白进行免疫治疗,发现Rpfd及其突变体Rpfd1和Rpfd2蛋白能够显著的降低肺脏荷菌数,并且诱导淋巴细胞的增值。为利用Rpf结构域突变体制备MTB的免疫治疗疫苗提供了理论依据和实验基础。
- 尚淑琴赵勇赵善民张彩琴师长宏
- 关键词：结核分支杆菌突变体免疫治疗
- GST融合蛋白包涵体纯化方法的探索被引量：3
- 2012年
- 探讨GST融合蛋白包涵体纯化的方法。将表达Rpfd与GST融合蛋白的质粒PGEX-4T1-Rpfd转入大肠杆菌DH5a,IPTG诱导表达目的蛋白。通过比较盐酸胍裂解和Novagen蛋白折叠试剂盒预处理,及调整不同类型蛋白复性液,观察上述因素对GST融合蛋白包涵体纯化效果的影响。结果:超声后先去除可溶性表达,再使用20 mmol Tris-HCl和0.1 mmol DTT进行复性,可获得高效纯化,具有活性的GST融合蛋白。对于GST包涵体蛋白进行纯化时,去除可溶性表达蛋白,改变蛋白复性液的成分,可有效提高蛋白纯化效果。
- 季林刘佩娟王毅赵勇毛峰峰赵善民尚淑琴师长宏
- 关键词：谷胱甘肽S-转移酶包涵体纯化
- 结核分枝杆菌培养滤液蛋白CFP10的表达、纯化和鉴定
- 2012年
- 克隆结核分枝杆菌培养滤液蛋白CFP10基因,并在大肠杆菌中进行表达和纯化。用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增出CFP10基因片段,克隆至pMD18-T载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到表达载体pGEX-4T-1并在大肠杆菌BL21中表达。表达蛋白经SDS-PAG及Western-blot分析后,亲和层析法纯化蛋白。成功克隆了CFP10基因,并对其在E.coli中进行了表达,SDS-PAGE及Western blot分析表明表达产物正确。通过GST纯化系统获得36 kD纯化蛋白,与文献报道相符,该蛋白可与CFP10 mAb特异结合,并且同时与活动期结核病人血清发生反应。成功获得了纯化的CFP10蛋白,为进一步研究CFP10蛋白的致病机理提供了实验依据。
- 江鹰尚淑琴赵勇毛峰峰赵善民张彩勤师长宏
- 关键词：结核分枝杆菌CFP10纯化
- 结核分枝杆菌Hsp16.3蛋白影响小鼠巨噬细胞自噬形成的实验研究被引量：12
- 2011年
- 目的:观察热休克蛋白Hsp16.3对感染结核分枝杆菌(MTB)的巨噬细胞自噬体形成的作用。方法:以50 ng/μL雷帕霉素诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7自噬体形成后,用结核分枝杆菌毒株H37Rv感染巨噬细胞,再用Hsp16.3蛋白作用于巨噬细胞,电镜观察自噬体相成的变化,抗酸染色观察胞内细菌形态,计数MTB的菌落数。提取巨噬细胞总蛋白,Western blot方法检测自噬相关蛋白LC3表达水平的变化。结果:雷帕霉素诱导巨噬细胞形成自噬后感染结核分枝杆菌可使胞内细菌局限化,加入Hsp16.3蛋白可明显抑制了自噬体的形成,影响了结核分枝杆菌在巨噬细胞内的生存,显著增加了细菌的菌落形成单位,降低了自噬相关蛋白LC3的表达(P<0.05)。结论:Hsp16.3蛋白可能通过调节Atg8的表达水平抑制自噬体的形成。
- 师长宏江鹰赵勇毛峰峰张彩琴白冰张海
- 关键词：结核分枝杆菌自噬
- 结核分枝杆菌Hsp16.3单克隆抗体的制备及其特性鉴定被引量：1
- 2012年
- 制备抗结核分枝杆菌Hsp16.3的单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。将含目的基因的表达载体pProEXHTb-Hsp16.3,通过E.coli DH5α诱导表达,获得含有6×His的Hsp16.3蛋白,采用Ni-NTA纯化试剂盒进行目的蛋白的纯化,并用透析方法进行蛋白复性。将复性的蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株。将获得的Hsp16.3阳性杂交瘤细胞株分别利用间接ELISA法和Western blot方法进行效价、相对亲和力及特异性的测定。获得了三株Hsp16.3的单克隆抗体,分别命名为3H6F9、1D5E1和4H8G6,其效价分别为1:1×107、1:1×106和1:1×106,相对亲和力分别为0.000 1 mg/mL、0.001 mg/mL和0.001 mg/mL,并且无交叉反应性。所获得的结核分枝杆菌Hsp16.3的单克隆抗体效价高、特异性强,为进一步研究Hsp16.3在结核分枝杆菌潜伏感染中的作用提供了有效的工具。
- 张彩勤江鹰赵勇毛峰峰赵善民白冰师长宏
- 关键词：结核分枝杆菌HSP16.3单克隆抗体
