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番木瓜叶片、叶柄胚性愈伤组织的诱导及其体胚植株的发生被引量：11: 2008年; 以"漳红"番木瓜组培苗的叶片和叶柄为外植体,在改良MS+0.5 mg/L KT+1.0mg/L 2,4-D+0.5 mg/L BA+0.1 mg/L NAA+400 mg/L Glu+30 g/L蔗糖的固体培养基上诱导出了胚性愈伤组织。其中,CⅡa型胚性愈伤在一定条件下能够继代增殖,并能向CⅡb型转变,CⅡb型胚性愈伤则容易发生体胚。采用两步生根法,将体胚再生植株先接种于1/2 MS+0.5 mg/L IBA+1.0 g/L AC+30 g/L蔗糖的固体培养基中暗培养7 d后,转移至1/2 MS+1.0 g/L AC+25μmol/L VB2+30 g/L蔗糖的固体培养基上光照培养,生根效果最好。移栽后,成活率可达45%以上。; 何玮毅陈晓静申艳红卢秉国潘东明; 关键词：番木瓜叶片叶柄胚性愈伤组织体胚发生

番木瓜果肉果胶裂解酶基因克隆及反义植物表达载体的构建被引量：2: 2009年; 采用cDNA末端快速扩增方法,获得了番木瓜果肉果胶裂解酶(Pectate lyase,PL)基因的完整3′端和部分5′端序列。然后,根据本实验室已经获得的PL基因5′端DNA序列及笔者得到的3′端序列设计上、下游引物,以番木瓜基因组DNA为模板扩增得到PL基因的开放性阅读框。该序列编码385个氨基酸,与草莓、桃、芒果、拟南芥氨基酸序列的同源性分别为83.38%、75.76%、73.68%、65.96%。根据PL基因设计特异引物,扩增其保守区片段,将其反向插入pBI 121的CaMV 35 S启动子和Nos终止子之间,成功构建反义植物表达载体pBP,并导入到根癌农杆菌EHA 105中。; 申艳红陈晓静何玮毅卢秉国; 关键词：番木瓜果胶裂解酶 RACE 反义表达载体

改良热硼酸小量法提取番木瓜果肉总RNA被引量：9: 2009年; 通过改良热硼酸小量法提取两个发育时期的番木瓜果实果肉总RNA。结果表明,这种方法能排除番木瓜果肉中多糖、木瓜蛋白酶、色素等物质的干扰,提取到高质量RNA,OD260/OD280在1.7～2.0之间,RNA完整,无DNA、蛋白质等污染。经检验,可以用于后续cDNA-AFLP等分子生物学实验。; 申艳红陈晓静; 关键词：番木瓜果肉 RNA

番木瓜果肉RNA提取方法的比较被引量：12: 2008年; 为了从成熟末期的番木瓜果肉中提取纯净完整的RNA,本试验采用了TRIzol试剂盒、改良TRIzol、SDS法、CTAB法等4种方法从番木瓜果实中提取总RNA。从RNA的完整性、产率和纯度等方面对这几种方法进行比较和评价,结果表明,采用改良TRIzol所得RNA完整性较其他方法好,条带清晰无明显降解,28S和18S RNA的亮度比约为2∶1,D260/D280达1.9且得率较高,为380.5μg.g-1,经RT-PCR后得到一特异条带表明该RNA可用于后续分子生物学操作。; 林莹陈晓静; 关键词：番木瓜果实 RNA提取 RT-PCR

番木瓜果胶裂解酶基因片段的克隆及序列分析被引量：4: 2009年; 以4个不同成熟阶段的番木瓜果肉cDNA为模板,经RT-PCR扩增仅在第四成熟度的番木瓜果肉中得到596 bp的PL基因片段,所得核苷酸序列通过Blast分析,该序列与草莓、拟南芥、芒果、葡萄等果胶裂解酶基因的相似性都较高,均在79%–82%之间.; 林莹陈晓静; 关键词：番木瓜 RT-PCR

番木瓜β-Gal基因的克隆分析与植物表达载体构建被引量：1: 2010年; 番木瓜果实采后贮藏期间的迅速软化与β-Gal基因的表达密切相关。利用常规PCR结合反向PCR技术,分离了一条4501bp的番木瓜β-Gal基因组序列。其共含有17个内含子,外显子部分与相应的cDNA序列只有1个碱基的差异。生物信息学分析结果表明,该番木瓜β-GAL属于糖苷水解酶超级家族42中家族35的成员,在进化过程中与拟南芥的亲缘关系较近,与鳄梨和北美云杉则较远。同时,它还具有一段定位于胞外的信号肽,再次表明其可能参与了果肉细胞壁的降解和果实软化。进一步分离了β-Gal基因启动子,初步验证了其果实表达特异性。将该启动子替换载体p2301/TTRG上的CaMV 35S启动子,构建出RNAi-β-Gal双T-DNA植物表达载体。酶切分析和PCR检测结果表明,载体p2301/BPTTRG已被成功导入农杆菌,可用于后续的遗传转化研究。; 何玮毅陈晓静申艳红卢秉国; 关键词：番木瓜 Β-半乳糖苷酶果实特异性启动子

番木瓜β-Gal基因RNAi双T-DNA植物表达载体的构建及其遗传转化的初步研究被引量：2: 2009年; 克隆了番木瓜(Carica papaya L.)果肉的细胞壁水解关键酶β-半乳糖苷酶(β-GAL)基因保守区,将其反向重复插入载体pKANNIBAL,构建RNAi中间表达载体pKAN/RG,将其上的发夹结构取代经改造的载体pCAMBIA1300上hptⅡ基因,构建中间表达载体p1300-/MFRG,分离单T-DNA区段,与载体pCAMBIA2301构建RNAi双T-DNA植物表达载体p2301/TTRG。酶切分析和PCR检测表明,p2301/TTRG已被成功导入农杆菌EHA105。通过遗传转化,初步获得了GUS染色呈阳性且具Kan抗性的番木瓜胚性愈伤组织。; 何玮毅陈晓静申艳红卢秉国潘东明; 关键词：番木瓜 Β-半乳糖苷酶 RNA干扰

番木瓜PL和β-Gal基因双价反义表达载体的构建被引量：1: 2010年; 在已报道的番木瓜果胶裂解酶(PL)和β-半乳糖苷酶(β-Gal)基因序列的基础上,设计特异引物,分别扩增保守区序列,将其分别反向插入植物表达载体pCAMB IA1301-35S-GUS-Nos的CaMV35S启动子和Nos终止子之间,构建反义表达载体pCP和pCG.然后用2种不同的方法将带有完整启动子和终止子的PL和-βGal基因引入pCAMB IA2301中,获得PL和β-Gal基因的双价植物反义表达载体pCPG,并对2种方法进行比较.; 申艳红陈晓静何玮毅; 关键词：番木瓜果胶裂解酶 Β-半乳糖苷酶反义表达载体

番木瓜组培苗叶片基因组DNA的微量提取被引量：6: 2009年; 比较了3种从番木瓜组培苗叶片中提取基因组DNA的方法.结果表明:改良CTAB法步骤简单,DNA得率与质量均较高,并能用于转基因植株的PCR检测、限制性内切酶酶切以及后续的反向PCR反应;SDS-KAc法存在RNA残留;试剂盒法的DNA得率与质量均较低.; 何玮毅陈晓静申艳红卢秉国官磊潘东明; 关键词：番木瓜组培苗基因组DNA

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福建省自然科学基金(B0610010)