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简单异尖线虫D-天冬氨酸蛋白酶基因的克隆和表达: 2012年; 目的克隆简单异尖线虫Ⅲ期幼虫(L3)的D-天冬氨酸蛋白酶基因(AsAP)全长,研究其表达蛋白的特性。方法根据GenBank中简单异尖线虫D-天冬氨酸蛋白酶基因表达序列标签的部分信息,设计特异引物并用cDNA末端快速扩增技术得到AsAP全长序列,分析推导的蛋白序列特征,并预测其三级结构。用RT-PCR扩增简单异尖线虫L3的AsAP基因编码序列,产物用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切,连入表达载体pET32а(+),转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测。结果简单异尖线虫L3的AsAP基因全长1 753 bp,编码453个氨基酸,与锡兰钩虫(Ancylostoma ceylanicum)的D-天冬氨酸蛋白酶相似性达65%。该蛋白具有两个保守的催化域,1个活性中心翼环,S2和S3亚位点各1个;具有由20个氨基酸组成的N端信号肽,构成疏水性强的跨膜域。不同浓度的IPTG(0.2～1.6 mmol/L)诱导对AsAP表达的影响较小,1.0 mmol/LIPTG诱导2 h后表达量达到最高水平。结论克隆并表达了简单异尖线虫的D-天冬氨酸蛋白酶。; 倪芳徐世三王逸难余长茂罗大民; 关键词：简单异尖线虫克隆原核表达

向HelmCoP数据库直系同源组添加古菌序列: 2014年; 含有古菌序列的直系同源组可以在很大程度上便利各种基于HelmCoP数据的研究,但是目前HelmCoP直系同源组不含有任何古菌序列.为了向HelmCoP直系同源组添加古菌序列,以1个OrthoMCL-DB网站工具的分配方法为依据,我们将29种古菌物种模式菌株的蛋白质组数据,通过BLAST比对和OrthoMCL分析,逐步添加至各个HelmCoP直系同源组中.结果显示,21 326条古菌序列被成功地分配给了1 954个HelmCoP直系同源组中,而其他2 821条古菌序列被归类至NO_GROUP类别.这些分配结果得到了良好BLAST匹配数据的支持.一些自由生活物种包括Caenorhabditis japonica、大豆和拟南芥在研究中也受到了关注,因为这些物种相当多的基因在古菌物种内有同源基因.; 杨一子罗大民; 关键词：古菌 BLAST

福建茶区小贯小绿叶蝉rDNA序列分析及形态再描述被引量：1: 2015年; 重新描述了小贯小绿叶蝉的形态结构,尤其是头部色斑、翅脉、腹部内突、下生殖板及其刚毛着生位置,并增加了足部（刺毛列）特征描述。通过PCR技术克隆得到该物种的r DNA序列,包括部分18S（1 843bp）和28S序列（667 bp）以及完整的5.8S（155 bp）、ITS1（3 114 bp）和ITS2序列（1 008 bp）。序列分析表明,18S,5.8S,28S与其他物种间具有90%～95%的序列一致性;而ITS1和ITS2序列变异性非常大。碱基组成比率分析显示ITS1以及ITS2具有AT偏好性,前者A＋T占66.0%,后者占65.1%。与亲缘种的比较分析显示ITS1和ITS2具有丰富的多态位点,并且ITS2更适用于近缘种的分子鉴定。; 章旭日潘杰Tukayo Meks余良方文珍罗大民; 关键词：RDNA ITS2

广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶基因的克隆、表达及免疫组织定位分析被引量：2: 2019年; 目的通过对广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶基因的克隆、表达及免疫组织定位分析,探讨其在虫体中的分布及功能。方法根据虾红素金属蛋白酶EST序列设计引物进行RACE克隆和进化树分析;制备Ac-ALMP多抗血清,对广州管圆线虫L1,感染期L3和成虫进行免疫组织定位,通过Real-time PCR进行Ac-ALMP定量分析。结果获得广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶全基因序列,并将其命名为Ac-ALMP(Astacin-like metalloprotease)。进化树分析Ac-ALMP基因的核酸序列与Dictyocaulus viviparous同源性较高。免疫荧光定位分析Ac-ALMP在广州管圆线虫的各期中主要分布于消化道(肠道与食道)。定量分析显示Ac-ALMP在各期中均有表达,其中L1相对表达量较高,L3次之。结论成功对Ac-ALMP蛋白进行了原核及真核表达,定量分析Ac-ALMP在虫体的肠道、角质层、精巢、体壁等均有分布,推测Ac-ALMP在广州管圆线虫寄生过程中起重要作用,可为广州管圆线虫病的防治及疫苗开发提供参考。; 余良谷麦曹斌斌罗大民; 关键词：广州管圆线虫免疫定位

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