博士科研启动基金(2010JC08)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 相关作者：李树伟牛玉清邓芳姜仁军史惠君更多>>
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- 和田羊Myostatin蛋白成熟肽的基因克隆及原核表达被引量：2
- 2013年
- 为了克隆和田羊肌肉生长抑制素(Myostatin)蛋白成熟肽编码基因片段,并对其进行原核表达,试验根据绵羊Myostatin蛋白成熟肽基因序列从GenBank(登录号为NM_001009428)中设计并合成1对引物。以塔里木大学动物基因工程实验室构建的和田羊Myostatin基因全序列的克隆载体为模板,采用PCR方法特异性扩增和田羊Myostatin蛋白成熟肽基因片段;将其克隆到pMD18-T载体中,构建克隆质粒pMD18-T-Ms;经PCR和双酶切分析鉴定,将阳性克隆送上海生工生物工程技术服务有限公司测序验证;测序验证后双酶切pMD18-T-Ms克隆质粒和pET-28a(+)表达质粒,进一步构建pET-28a(+)-Ms重组表达质粒。将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后表达Myostatin蛋白成熟肽,通过SDS-PAGE电泳分析鉴定表达的重组蛋白。结果表明:PCR特异性扩增出1条长度约为330 bp的条带;序列测定分析显示和田羊Myostatin蛋白成熟肽基因片段长327 bp,与GenBank上绵羊Myostatin蛋白成熟肽编码基因从799～1 125 bp片段的核苷酸同源性为100%,所表达的Myostatin蛋白成熟肽分子质量约为14.7 ku。试验成功克隆和田羊Myostatin蛋白成熟肽编码基因片段,构建了其克隆质粒pMD18-T-Ms和重组表达质粒pET-28a(+)-Ms,并在大肠杆菌中获得有效表达。
- 姜仁军李树伟邓芳
- 关键词：原核表达
- 新疆南部地方品种绵羊MSTN基因功能区的克隆及其蛋白二级结构和抗原表位的预测被引量：1
- 2011年
- 为了确定新疆南部地方品种绵羊肌生成抑制素（MSTN）成熟蛋白的功能区及二级结构和B细胞抗原表位,根据GenBank中绵羊肌生成抑制素基因序列及其所编码蛋白质的序列,应用GenBank的Blast功能检索其蛋白的功能区,并设计引物克隆新疆南部地方品种绵羊MSTN功能区基因,进行序列测定。然后运用DNAStar软件和www.expasy.org在线服务器等生物信息学方法分析其蛋白的二级结构,并通过Jameson-Wolf法、Kyte-Doolittle法、Emini法、Karplus-Schulz法、Hopp＆Woods法、Welling法分别预测其抗原指数、亲水性、表面可及性、柔韧性和抗原性等参数,并综合分析、预测该蛋白的B细胞抗原表位。结果表明：克隆出的MSTN功能区基因经测序和比对后与GenBank上Blast的结果相符。绵羊MSTN蛋白的B细胞抗原表位的优势区域最有可能的是肽链的301~305,321~323,331~333,343~344,346,354~356,358位肽段和氨基酸处。
- 牛玉清任述强李树伟金波尹阔赵春霞史惠君
- 关键词：肌生成抑制素蛋白二级结构B细胞抗原表位
- 绵羊MSTN基因结构和功能的生物信息学分析被引量：7
- 2011年
- 为了研究绵羊肌肉生长抑制素(MSTN)基因结构和功能,试验采用生物信息学方法对其编码蛋白的结构、理化性质、信号肽、跨膜结构、亚细胞定位、功能分类、二级结构、高级结构和功能结构域进行生物信息学分析并推测与其他物种的生物进化关系。结果表明:绵羊MSTN蛋白是一个疏水性不稳定蛋白,作为信号肽的可能性很大;含有9个α-螺旋、11个β-折叠、25个β-转角、1个跨膜结构区域,其功能域可能位于278～375位氨基酸处;绵羊MSTN基因在人、牛、黑猩猩、大鼠、狗、鸡等物种中与牛的亲缘关系最近。
- 牛玉清李树伟
- 关键词：绵羊生物信息学
