国家重点基础研究发展计划(2007CB512003)
- 作品数：22 被引量：69H指数：4
- 相关作者：刘秀华邹云增牛玉宏葛均波姚树桐更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院复旦大学泰山医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 巨细胞病毒感染的载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化发生的可能机制被引量：1
- 2008年
- 目的研究巨细胞病毒感染引起的免疫损伤导致动脉粥样硬化发生的可能机制。方法载脂蛋白E基因敲除的8周龄C57BL/6雌性小鼠,随机分成对照组、高脂饮食组、鼠巨细胞病毒感染组和高脂饮食+鼠巨细胞病毒感染组。在不同时间段分别处死小鼠,截取主动脉,利用逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学等方法检测主动脉单核细胞趋化因子1、生长相关癌基因α、Fractalkine和调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子的表达。结果第8周时,巨细胞病毒感染后可显著提高生长相关癌基因α在主动脉的表达,并可诱导Fractalkine、活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子和单核细胞趋化因子1的表达,而在高脂饮食+巨细胞病毒感染的小鼠主动脉组织中,Fractalkine的表达较其它组明显升高。第12周时,高脂饮食+巨细胞病毒感染组中Fractalkine和活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子和单核细胞趋化因子1的表达较其它组更高些。免疫组织化学结果发现,高脂饮食后,生长相关癌基因α、Fractalkine和单核细胞趋化因子1的表达均有明显升高,但Fractalkine的表达较局限,单核细胞趋化因子1和生长相关癌基因α在整个血管壁都存在,但以内膜较高。单纯巨细胞病毒感染组与高脂饮食组相似,可诱导单核细胞趋化因子1、生长相关癌基因α和Fractalkine的表达,但不同的是Fractalkine的表达广泛存在。而高脂饮食+巨细胞病毒感染组单核细胞趋化因子1、生长相关癌基因α和Fractalkine表达的升高更为明显,尤其是斑块部位。结论巨细胞病毒感染后通过调节趋化因子表达水平的改变,从而促进炎症细胞的迁移,促进动脉粥样硬化的发生。
- 陈瑞珍熊思东许从峰杨英珍邹云增葛均波陈灏珠
- 关键词：病理学与病理生理学巨细胞病毒动脉粥样硬化趋化因子
- 过表达HSF1及ASK1基因对H_2O_2刺激后心肌细胞内ROS水平的影响被引量：3
- 2007年
- 目的研究热休克因子1(HSF1)及凋亡信号调节激酶1(ASK1)对过氧化氢(H_2O_2)刺激后心肌细胞内活性氧簇水平(ROS)变化的影响。方法对不同组培养心肌细胞分别单独转染质粒HSF1,ASK1,及共转染HSF1+ASK1,48h待其充分表达后用1 mmol/LH_2O_2刺激心肌细胞30min,检测细胞内ROS水平,并与相应转染后未刺激组及未转染的对照组比较,观察ROS水平的变化。结果(1)所有H_2O_2刺激组心肌细胞内ROS水平均高于相同转染条件下的非刺激组(P<0.05);(2)相同H_2O_2刺激条件下,各组ROS水平:HSF1组低于对照组(P<0.05),ASK1组与对照组无显著差异,HSF1+ASK1组与单转HSF1组相比有升高的趋势;(3)相同H_2O_2刺激条件下,各组刺激后比刺激前ROS水平增高的幅度:HSF1组低于对照组(P<0.05),ASK1组与对照组无显著差别,HSF1+ ASK1组与单转HSF1组相比有升高的趋势。结论在H_2O_2刺激条件下,HSF1可通过降低心肌细胞内的ROS水平来发挥细胞保护作用,而ASK1对细胞内ROS水平无影响,但其可干扰HSF1对ROS的抑制作用。
- 张磊梁艳艳牛玉宏姜红邹云增葛均波
- 关键词：热休克因子1活性氧簇心肌细胞
- 人肌纤生成调节因子1真核表达载体的构建及其在乳鼠心肌细胞中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的构建人肌纤生成调节因子1全长的真核表达质粒,并观察其在HEK293T细胞系及Sprague-Daw-ley乳鼠心肌细胞中的表达。方法从NCBI GenBank数据库中克隆得到人肌纤生成调节因子1基因(AF417001)全长序列,与真核表达载体质粒pcDNA3.1/Myc-His(-)B连接并转化大肠杆菌XL1-Blue,筛选阳性克隆,T7引物测序,转染细胞后以逆转录聚合酶链反应、Western Blotting方法检测人肌纤生成调节因子1的表达。结果pcDNA3.1/Myc-His(-)B-hMR-1质粒经测序证实目的基因序列正确,无碱基突变。该质粒转染到HEK293T细胞系和乳鼠心肌细胞后人肌纤生成调节因子1的转录水平及表达水平明显增高。结论成功构建了人肌纤生成调节因子1全长的真核表达载体并确定了简便有效的乳鼠心肌细胞瞬时转染方法。
- 王晓礽刘秀华李婷韩文玲
- 关键词：质粒构建乳鼠心肌细胞
- 血管内皮细胞内质网应激被引量：7
- 2010年
- 内质网是调控细胞内膜型/分泌型蛋白质合成、钙稳态和细胞凋亡的重要细胞器,多种因素影响内质网稳态、触发内质网应激。适当的内质网应激通过激活未折叠蛋白反应促进内质网紊乱的恢复,但过度内质网应激触发内质网相关凋亡途径,参与多种疾病的发生。血管内皮细胞具有高度发达的内质网,对内质网应激非常敏感,本文综述血管内皮细胞内质网应激反应及其在血管损伤相关疾病中的作用。
- 张振英刘秀华
- 关键词：血管内皮细胞内质网应激
- 缺血后处理抑制缺血再灌注大鼠心肌内质网应激相关凋亡被引量：8
- 2008年
- 目的:研究缺血后处理(I-postC)对缺血/再灌注(I/R)大鼠心肌组织Caspase-12和CHOP(CEBP Homologous Protein)的影响,从内质网应激角度探讨I-postC抑制I/R心肌细胞凋亡的机制。方法:采用Wistar大鼠在体心脏I/R模型,以TUNEL法检测细胞凋亡,并检测血浆乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK-MB)含量及心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,免疫印迹法检测心肌组织Caspase-12、CHOP、Bcl-2和Bax表达。结果:I-postC显著抑制I/R所致的心肌细胞凋亡(较I/R组低74.3%,P<0.01),上调Bcl-2表达(较I/R组高53.2%,P<0.05)并抑制Bax表达上调(较I/R组低46.1%,P<0.05);与I/R组比较,I-postC组心肌细胞LDH和CK-MB漏出减少(分别较I/R组低37.6%和34.3%,P<0.01),心肌组织MDA含量降低(较I/R组低38.4%,P<0.05),SOD活性上调(较I/R组高18.3%,P<0.05);I-postC抑制I/R所诱导的Caspase-12活化和CHOP表达上调(分别较I/R组低41.7%和33.3%,P<0.01)。结论:I-postC通过抑制Caspase-12活化和CHOP过表达,减轻内质网应激相关凋亡,保护大鼠I/R心肌。
- 姚树桐刘秀华王家富
- 关键词：缺血再灌注缺血后处理大鼠心肌内质网应激I/R损伤器官移植术
- 肌纤生成调节因子-1促进myomesin-1 SUMO化引起的肌节装配
- 2010年
- 王晓礽刘秀华王松栾康徐菲菲
- 关键词：心肌肥大UBIQUITIN克隆基因
- 钙调神经磷酸酶的抑制参与大鼠心脏缺血后处理的保护作用被引量：3
- 2008年
- 目的:研究缺血后处理(I-postC)对缺血/再灌注(I/R)大鼠心肌钙网蛋白(CRT)及其下游钙调神经磷酸酶(CaN)信号转导途径的影响,探讨I-postC保护I/R心脏的机制。方法:采用Wistar大鼠在体心脏I/R模型,检测血流动力学及血浆乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK-MB)含量,以TTC法和TUNEL法分别检测心肌梗死面积和细胞凋亡,发色底物法测定心肌CaN活性,免疫印迹法检测心肌组织CaN和CRT蛋白表达。结果:CaN抑制剂环孢霉素A显著缩小I/R所致的心肌梗死面积(P<0.05),抑制细胞凋亡(P<0.01),但对心功能无明显改善(P>0.05);与I/R组比较,I-postC组心功能改善(P<0.01),心肌梗死范围缩小(P<0.01),LDH和CK-MB漏出减少(P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.01),并显著抑制I/R诱导的心肌组织CaN活性升高(P<0.05)及CaN和CRT表达上调(P<0.05),与缺血预处理组比较差异无显著,但对I/R心肌的保护作用强于单纯环孢霉素A组。结论:I-postC至少部分通过抑制CRT-CaN信号途径,减轻大鼠心肌I/R损伤。
- 姚树桐刘秀华赵秀梅荣飞
- 关键词：缺血后处理再灌注钙调神经磷酸酶钙网蛋白
- 钙网蛋白在心肌肥大中的研究进展被引量：2
- 2009年
- 钙网蛋白(calreticulin,CRT)是内质网中主要的Ca2+结合分子伴侣,具有调控细胞Ca2+稳态、蛋白质合成与修饰等作用,参与调节细胞凋亡、应激、心血管炎症反应等多种生理和病理生理过程。CRT属于心脏胚胎基因家族,通过调节心肌细胞肌原纤维形成、促进糖原分解、诱导肥大相关基因转录、调节心脏传导系统发育及心肌细胞凋亡等,在心脏发育及心肌肥大的发生、发展过程起重要作用,本文对CRT在心肌肥大中的作用及其信号转导途径予以综述。
- 徐菲菲刘秀华
- 关键词：钙网蛋白心肌肥大
- 磷酸钙盐沉淀法成功建立稳定的双质粒转染细胞模型
- 2013年
- 目的建立表达血管紧张素Ⅱ受体1型(AT1)和钙/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(CaMKⅡ)或CaMKⅡ的活性抑制体(DN)的双质粒转染COS7细胞模型,观察其磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)反应。方法通过扩增、筛选及抽提得到相关质粒,采用双酶切法及琼脂糖电泳鉴定目的DNA片段。采用磷酸盐钙沉淀法将质粒AT1和CaMKⅡ野生型(CaMKⅡ/WT)或CaMKⅡ/DN转入COS7细胞内,疫荧光法(IF)、免疫印迹法(WB)测定细胞表面表达的AT1(及其所带的HA-tag)、细胞质内表达的CaMKⅡ/WT或CaMKⅡ/DN(及其所带的V5-tag)。给予转染细胞以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、AT1受体拮抗剂(ARB)+AngⅡ等刺激,WB测定p-ERK改变。结果质粒酶切后电泳可见目的长度DNA片段。在转染细胞中,IF呈阳性荧光反应,WB可发现目的蛋白;而未转染细胞中则无。AngⅡ刺激引起转染AT1和CaMKⅡ/WT的细胞产生p-ERK升高反应,可为ARB预处理消除;而未转染细胞及转染AT1和CaMKⅡ/DN的细胞无类似反应。结论磷酸钙盐沉淀法可成功建立该双转染细胞模型。
- 马桢黄雄牛玉宏龚惠邹云增
- 关键词：质粒钙
- 肌纤生成调节因子-1促进myomesin-1 SUMO化引起的肌节装配
- ＜正＞新克隆基因人肌纤生成调节因子1（myofibrillogenesis regulator 1,MR-1）参与心肌肥大但具体调节机制不明,我们在乳大鼠心肌细胞过表达及沉默MR-1（转染pcDNA3.1-hMR-1质粒...
- 王晓礽刘秀华王松栾康徐菲菲
- 文献传递
