辽宁省自然科学基金(20082191)
- 作品数：5 被引量：13H指数：3
- 相关作者：陈飞桓明辉吴红艳关艳丽郭玲玲更多>>
- 相关机构：辽宁省微生物科学研究院沈阳农业大学更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Tetramycin抗性基因克隆及生物活性的测定被引量：2
- 2012年
- 为研究Tetramycin生物合成基因簇,提高产量,根据已知链霉菌抗性基因的保守核苷酸序列设计简并引物,以链霉菌11371基因组DNA为模板进行克隆Tetramycin抗性基因,并将其转化GS115中表达,以阳性克隆为指示菌,测定Tetramycin抗性基因生物活性。结果显示克隆的Tetramycin抗性基因1-2-1和2-1-1测定生物活性时并没有表现出对Tetramycin拮抗作用的提高,但为进一步研究Tetramycin生物合成基因簇、提高Tetramycin产量提供理论数据。
- 陈飞吴红艳桓明辉关艳丽郭玲玲于广峰
- 关键词：链霉菌抗性基因
- 不吸水链霉菌梧州新亚种基因组文库的构建被引量：6
- 2009年
- 以不吸水链霉菌梧州新亚种为材料,提取的总基因组DNA经Sau3AI不完全酶切,回收20～30kb DNA酶切片段,与经HpaI和BamHI酶切的粘粒载体pKC505进行连接,将连接产物用噬菌体包装蛋白包装,侵染大肠埃希菌DH5α。在含有安普霉素的LB平板上培养,所得转化子数为12000个,构建成不吸水链霉菌梧州新亚种的基因组文库。以不吸水链霉菌染色体基因组大小为7Mb计算,概括了不吸水链霉菌梧州新亚种约99%的基因组,达到了建库要求的理论值。未扩增文库的滴度为1.2×108pfu/L,扩增文库的滴度为4.8×1011pfu/L,包装效率为每微克DNA1.2×105个转化子。随机挑取菌落,提取重组质粒进行酶切电泳分析,均有外源片段插入。基因文库的构建为进一步深入研究梧宁霉素生物合成基因结构及功能奠定基础。
- 赵红岩李莉桓明辉陈飞吴红艳
- 关键词：基因文库
- 链霉菌11371原生质体的制备与再生被引量：3
- 2011年
- 为选育链霉菌11371的高产Tetramycin菌株,摸索该菌株的原生质体的制备与再生。结果表明,链霉菌11371原生质体制备和再生的最佳条件为菌丝生长培养液中甘氨酸浓度为0.7%,培养温度为28℃,培养时间为42 h,溶菌酶浓度为3 mg/mL,酶解温度为37℃,酶解时间为90 min。最佳再生培养基为R2YE培养基。
- 陈飞关艳丽吴红艳桓明辉郭玲玲于广峰修翠娟
- 关键词：原生质体
- 链霉菌11371基因工程宿主菌的确定
- 2011年
- 为消除链霉菌11371内源性质粒对pIJ702的限制,以提高pIJ702转化率,确定11371基因工程宿主菌。采用种内接合转移的方法对链霉菌11371衍生菌U3和P2、P5、P7进行内源性质粒的消除。获得接合转移子U3-P7-6,具有转化外源质粒的能力,转化率为17～20个/100个菌,为链霉菌11371转化体系构建、克隆基因结构、功能鉴定和基因定位等研究提供生物材料。
- 陈飞吴红艳桓明辉关艳丽郭玲玲修翠娟
- 大肠埃希菌DH5α感受态细胞转化率变化的研究被引量：3
- 2013年
- 针对本实验室保藏的E.coli DH5α,对该菌株在不同生长时期的转化效率变化情况进行测定,确立了一个能制备高转化率感受态细胞的实验方案。结果表明:在细菌的生长繁殖过程中,其转化率有很大变化;得到了E.coil DH5α菌株制备感受态细胞的最佳条件。
- 桓明辉关艳丽陈飞
- 关键词：大肠埃希菌感受态转化率
