中国博士后科学基金(2012T50221)
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
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- 相关机构：天津理工大学天津医院天津医科大学更多>>
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- PKH26标记结合活体荧光成像技术在椎间盘组织工程研究中的应用被引量：1
- 2013年
- 目的体外评估PKH26标记对山羊髓核细胞生物学功能的影响,并结合活体荧光成像系统评价种子细胞在裸鼠体内的生物学行为。方法取1岁龄山羊椎间盘分离髓核组织,通过酶消化法获取原代细胞,倒置相差显微镜下观察,传代获取第1代髓核细胞,行PKH26荧光标记,荧光显微镜下观察标记后的细胞荧光强度,并行甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色观察,锥虫蓝染色比较标记前后细胞活性,MTT法检测标记前后细胞增殖特性,实时荧光定量PCR检测细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白聚糖基因表达。将标记后的髓核细胞接种至一体化纤维化-髓核支架的髓核部分,纤维环部分作为阴性对照,体外培养3 d后植入5只6周龄雄性裸鼠体内,培养6周后活体成像技术检测髓核细胞-支架复合物在体内的荧光强度及范围。结果倒置相差显微镜观察示原代髓核细胞簇状生长,呈卵圆形,第1代髓核细胞呈类软骨样细胞形态;标记后的第1代髓核细胞甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色均呈阳性;标记后荧光强度均匀,标记前后细胞活性均在95%以上;标记前后细胞生长曲线比较差异无统计学意义(P>0.05);实时荧光定量PCR检测示标记前后细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。活体成像技术显示体内髓核支架有强烈荧光,纤维环支架未见荧光。结论 PKH26标记对髓核细胞的活性、增殖及细胞表型的表达无明显影响,结合体内活体荧光成像系统可以追踪细胞在体内的生物学行为。
- 伍耀宏徐宝山杨强李秀兰张杨马信龙夏群张春秋许海委曾超
- 关键词：山羊
- 软骨脱细胞细胞外基质多孔支架与山羊髓核细胞生物相容性研究被引量：1
- 2013年
- 目的制备软骨脱细胞细胞外基质多孔支架，并探讨其与山羊髓核细胞的生物相容性。方法猪关节软骨经研磨、脱细胞、冷冻干燥技术等处理制成三维多孔支架；从山羊腰椎间盘中分离出髓核细胞，培养后获取P1代细胞；四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测支架浸提液毒性；将髓核细胞以5x106／ml的密度接种在支架上体外培养48h，通过倒置显微镜、HE染色、死活细胞染色（LIVE／DEAD染色）、扫描电镜观察细胞在支架上的黏附及活性。结果软骨脱细胞基质多孔支架在敷水状态下光滑透明，分离的髓核细胞呈典型的软骨细胞样形态；MTT检测各组间增殖，其差异不具有统计学意义（P〉0．05）；倒置显微镜、电镜观察髓核细胞呈球状或短梭形均匀地贴附在支架内部，HE染色观察可见髓核细胞均匀分布在支架内部，LIVE／DEAD染色显示全部为绿色荧光（活细胞），未见红色荧光（死细胞）。结论软骨脱细胞基质多孔支架在组成上与髓核组织相似，与山羊髓核细胞具有良好的生物相容性，可以作为髓核组织工程的支架材料。
- 伍耀宏徐宝山杨强李秀兰张杨夏群张春秋许海委
- 关键词：脱细胞软骨髓核细胞生物相容性
- PKH26荧光标记牛尾髓核细胞的实验研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨PKH26荧光标记在牛尾髓核细胞的应用,为髓核组织工程的体内研究提供可示踪的种子细胞。方法从牛尾椎间盘中分离髓核组织,通过酶消化法获取原代细胞,倒置显微镜下观察,P1代髓核细胞进行番红O、甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色,对P1代髓核细胞进行PKH26荧光染料标记,并对标记后细胞的活性、荧光强度(0、14、28 d)、增殖特性及基因表达进行评估。结果分离得到的髓核细胞数为(1.56±0.35)×106/g,倒置显微镜下,原代细胞培养4 d开始贴壁,细胞成群生长,14 d铺满瓶底,原代细胞、P1代细胞均呈类软骨样细胞形态;P1代髓核细胞甲苯胺蓝染色异染、番红O染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色阳性;PKH26标记前后细胞活性均在95%以上,1、14、28 d呈递减趋势,但28 d时细胞仍可检测出较强的荧光,标记后的细胞增殖及基因表达(Ⅰ、Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖)与标记前的细胞相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论牛尾髓核组织中可以分离出数量满意的髓核细胞,且具有软骨样细胞的表型,可以用作种子细胞;PKH26标记后的髓核细胞无生物学特性的变化,可以用作髓核细胞体内研究的示踪染料。
- 丁晓明徐宝山伍耀宏许海委杨强马信龙张春秋李秀兰张扬
- 关键词：椎间盘牛尾髓核细胞PKH26
- 基于细胞外基质来源的组织工程椎间盘双相支架裸鼠皮下异位构建椎间盘被引量：1
- 2014年
- [目的]探讨椎间盘细胞和细胞外基质来源的一体化纤维环-髓核双相支架在裸鼠体内异位构建组织工程一体化椎间盘的可行性,并采用PKH26荧光标记和小动物活体荧光成像系统无创评估组织工程化细胞-支架复合体在体内生长情况。[方法]纤维环细胞和髓核细胞分别标记PKH26荧光,分别接种入细胞外基质来源的一体化支架不同相中,扫描电镜、Dead/Live荧光染色观察细胞粘附及活性,植入裸鼠背部皮下,6周后利用分子小动物活体荧光成像系统评价组织工程化组织在裸鼠体内生长情况,取材进行荧光显微镜下观察、组织学染色。[结果]扫描电镜观察细胞粘附在双相支架上且周围有基质分泌,Dead/Live染色示细胞在双相支架上活性良好;6周后,活体荧光成像显示椎间盘细胞在支架内生长良好,从髓核往纤维环荧光强度减弱,细胞支架复合体在裸鼠体内形成椎间盘样组织,HE、番红O染色、甲苯胺蓝染色阳性。[结论]天然骨基质明胶和软骨基质来源的一体化纤维环-髓核支架复合椎间盘细胞能够在裸鼠皮下异位构建椎间盘样组织。
- 祁霁舟徐宝山张杨伍耀宏马信龙张春秋李秀兰
- 关键词：椎间盘细胞外基质PKH26裸鼠
