科技基础性工作专项(SB2007FY027)
- 作品数：6 被引量：79H指数：5
- 相关作者：冯自力李志芳朱荷琴师勇强赵丽红更多>>
- 相关机构：中国农业科学院棉花研究所中国农业科学院作物科学研究所更多>>
- 发文基金：科技基础性工作专项转基因生物新品种培育专项国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 棉花黄萎病菌T-DNA插入突变体库的构建及变异性状的分析被引量：3
- 2012年
- 利用农杆菌介导遗传转化(ATMT)的方法,成功构建含2 000个转化子的棉花黄萎病菌强毒菌株Vd080的突变体库。200μmol/L乙酰丁香酮(AS)作诱导剂,25℃共培养48h,棉花黄萎病菌孢子量为106 mL-1,其转化效率达150～540个转化子。进一步研究发现,供试突变体的T-DNA成功插入Vd080基因组,且均为单拷贝插入,转化子的潮霉素B基因能够稳定遗传。309个突变体中,53.7%的突变体菌落形态与初始菌株Vd080相同,均产生黑色的微菌核,不产生黑色素微菌核的菌丝型仅占17.5%。与初始菌株相比,随机选取的85个突变体,产孢量、生长速率、粗毒素分泌量及致病力发生显著变异的菌株分别占36.4%、12.9%、50.6%和29.4%,四者之间不存在明显的相关性。
- 周芳芳李志芳冯自力赵丽红师勇强朱荷琴
- 关键词：农杆菌介导转化棉花黄萎病菌突变体库变异性状
- 高效大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)基因敲除体系的构建被引量：8
- 2011年
- 【目的】为了深入研究大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)致病基因的功能,构建高效大丽轮枝菌基因敲除体系。【方法】融合PCR构建基因敲除载体;利用农杆菌介导法转化大丽轮枝菌;使用在T-DNA之间加入致死基因的双元载体,使T-DNA随机插入转化子在添加5-氟脱氧尿苷的培养基上不能存活,实现对随机插入转化子的"反向筛选"。【结果】对大丽轮枝菌腺嘌呤合成酶基因和几丁质合成酶基因进行基因敲除验证,基因敲除转化子在总转化子中的比例分别达到87%和44%。【结论】成功构建大丽轮枝菌高效基因敲除体系,为大丽轮枝菌致病基因的功能验证提供了技术平台。
- 田李陈捷胤汪佳妮王金龙戴小枫
- 关键词：大丽轮枝菌基因敲除融合PCR农杆菌介导转化致死基因
- 根癌农杆菌介导的真菌遗传转化研究进展被引量：10
- 2012年
- 农杆菌介导遗传转化成为真菌实现菌种改良、新基因标记及目的基因的筛选、分离和克隆的重要方法之一。该方法操作简单、受体范围广、转化效率高、单拷贝率高及突变体遗传稳定,解决了传统转化方法的瓶颈。利用该方法成功实现了多种真菌大容量高质量突变体库的构建,且在各类真菌突变体库构建的基础上,相关基因的筛选和功能基因的验证工作成为下一步的研究热点,进而为各类病原菌致病机理的深入研究提供依据,为抗病育种等亟待解决的问题奠定基础。
- 周芳芳李志芳冯自力师勇强赵丽红李彩红朱荷琴
- 关键词：农杆菌真菌突变体
- 蛭石沙土无底纸钵定量蘸菌液法鉴定棉花品种(系)的抗黄萎病性被引量：37
- 2010年
- 试验建立了一种鉴定棉花品种（系）抗黄萎病性的新方法。该方法采用商品蛭石和晒干的河沙为基质，制作无底纸钵，于可控条件下种植棉苗；在棉苗第一片真叶平展时，定量蘸根接种棉花黄萎病菌的孢子悬浮液（接种孢子浓度为1×10^6～5×10^6个·mL^-1）；棉苗普遍发病后进行分级调查，以相对病情指数来评价供试棉花品种（系）的抗病性。采用该方法和人工病圃成株期鉴定方法对20个品种进行了鉴定，两种鉴定结果达极显著相关。该方法具有快速、准确、经济、环保等特点。
- 朱荷琴冯自力李志芳赵丽红师勇强
- 关键词：棉花品种黄萎病抗病鉴定
- 我国棉花黄萎病菌基于SSR的遗传多样性分析被引量：12
- 2011年
- 为了对棉花黄萎病菌群体的遗传多样性进行研究,以棉花黄萎病菌基因组DNA为模板,用双因素和单因素水平优化的方法对SSR反应体系的重要参数进行摸索和优化,建立了最适反应体系。从300对引物中筛选出13对多态性较高的引物,并对来自我国12个省96个县(市)的170个棉花黄萎病菌株进行SSR分析。SSR图谱的聚类分析结果将供试菌株划分为2个群体:群体Ⅰ有26个菌株,其中18个为新疆菌株,占69.23%;群体Ⅱ有144个菌株,其中138个为内地菌株,占95.83%。新疆菌株与其它省份的菌株存在明显差异,SSR指纹图谱与菌株地理来源存在显著的相关性,而与菌株致病力强弱没有表现出相关性,但弱致病力菌株可能更容易发生遗传变异。
- 尹志新朱荷琴李志芳冯自力
- 关键词：棉花大丽轮枝菌SSR遗传多样性分析
- 转几丁质酶和葡聚糖酶双价基因棉花株系对黄萎病的抗性被引量：13
- 2011年
- 采用人工病圃、重病田及苗期室内鉴定相结合的方法,研究了转双价(Chi+Glu)基因的棉花株系61217-1对棉花黄萎病的抗性。结果表明,转基因棉花株系61217-1在人工病圃连续3年达抗病水平,病指极显著低于其受体中棉所24。2009年该转基因株系在河南安阳、江苏大丰及新疆石河子棉花黄萎病重病田的病指分别为18.7、18.1和16.7,均极显著低于受体中棉所24的病指。该转基因株系对来自河北、湖北、新疆的3个强致病力落叶型菌株均达抗病水平,病指分别为16.4、16.8和15.6,也极显著低于受体中棉所24的病指。表明转双价(Chi+Glu)基因的棉花株系61217-1具有优异稳定的抗黄萎病性。
- 朱荷琴冯自力李志芳赵丽红师勇强尹志新
- 关键词：转基因棉花黄萎病几丁质酶基因葡聚糖酶基因
