公共文化服务平台

共 3 条记录，以下是 1-3

全选清除导出

排序方式：

解偶联蛋白UCP1启动子荧光素酶报告基因载体的构建: 2015年; 目的:构建解偶联蛋白UCP1启动子荧光素酶报告基因载体,为寻找调控UCP1表达的小分子化合物提供有效工具。方法:从小鼠基因组DNA中PCR扩增小鼠UCP1启动子上游2000 bp序列,并将该序列连接到荧光素酶报告基因载体p GL3-basic中,构建p GL3-UCP1启动子。测序正确后,提取质粒,然后将上述载体与p RL-TK载体共转染至HEK293细胞、小鼠白色脂肪前体细胞和小鼠棕色脂肪前体细胞,48 h后裂解细胞检测荧光素酶的活性。结果:通过PCR成功扩增获得了目的片段,并将其克隆至p GL3-basic中。与细胞内源UCP1表达水平相似,荧光素酶报告系统表明构建的p GL3-UCP1在棕色脂肪细胞中启动子活性最高,在白色脂肪细胞中活性较低,在HEK293细胞中基本没有活性。同时β3肾上腺素受体激动剂CL 316,243同样能够上调p GL3-UCP1的启动子活性。结论:成功构建了小鼠UCP1启动子荧光素酶报告基因载体,并证明在棕色脂肪细胞中,该启动子具有很强的启动子活性,而在白色脂肪和HEK293细胞中,启动子活性很低。该启动子报告系统有望为寻找激活UCP1的小分子化合物提供重要平台。; 刘旭卢晓昭韦梦影王姗杨国栋; 关键词：启动子转录调控药物筛选

活化T细胞核因子对组成性启动子SV40的调控作用被引量：2: 2012年; 目的:利用双荧光素酶报告系统探讨活化T细胞核因子(NFAT)能否调控常见组成性启动子CMV,SV40和TK,为不同条件下选择合适双荧光报告系统内参提供依据。方法:用限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ分别从质粒pCDNA3.1和pRL-TK中切下CMV和TK启动子,克隆至pGL3-basic载体中,构建成pCMV-Luc和pTK-Luc载体。将构建pCMV-Luc和pTK-Luc以及商品化的pGL3-control(SV40启动子驱动),分别与SV40(pBIND)和TK(pRL-TK)两种启动子驱动的两种内参质粒共转染入HEK293细胞;观察过表达组成性活化NFAT后相对荧光素酶活性读数的改变。结果:成功构建了pCMV-Luc和pTK-Luc质粒,荧光素酶活性检测发现,常见组成性启动子SV40启动子对过表达组成性活化的NFAT存在一定的反应。结论:T细胞活化过程中重要的转录因子NFAT能够调控SV40启动子活性;表明常见组成性启动子SV40并非真正、绝对的组成性不变。因此,在荧光素酶报告系统内参选择时需要充分考虑该问题,本研究为合理选择内参质粒提供了一个可行策略。; 濮军杨国栋卢晓昭韦梦影卢兹凡鲁建国; 关键词：活化T细胞核因子内参

实例分析PBL教学法在医学分子生物学实验教学中的应用被引量：5: 2015年; 分子生物学实验课程对培养学生科研能力至关重要,然而,目前常规教学重动手能力,而忽略科研思维的培养。本文以证明"突变β-catenin促进结肠癌细胞增殖"为例,探讨PBL教学法在分子生物学实验教学中的实际应用。与传统孤立地讲授和实施常见分子生物学实验技术不同,该PBL(problem based learning)法通过证明"突变β-catenin促进结肠癌细胞增殖"这一科学问题将DNA提取、PCR、质粒克隆和提取、核酸电泳、胶回收、蛋白提取、Western Blot、细胞转染等实验技术有机的统一起来,强化了实验技术解决实际问题的针对性和各个方法之间的内在联系,增强了学生学习的积极性,同时也大大提高学生发现问题、综合分析问题和解决问题的科研能力。; 杨国栋韦梦影卢晓昭晋亮王姗; 关键词：PBL教学法分子生物学实验教学模式

全选清除导出

共1页<1>

国家自然科学基金(31100979)